细辛、辛夷挥发油β-环糊精和HP-β-环糊精包合物的制备及其对透皮吸收的影响

　　2.5  透皮扩散试验

　　2.5.1  透皮前供试品的制备 

　　考虑到β-CD包合物(1∶4包合)包结率约为HP-β-CD包合物(1∶4包合)的2倍,为保证供试品所含挥发油量平行,称取β-CD包合物2 g,HP-β-CD包合物4 g,置于锥形瓶中,用40%乙醇超声提取30 min,提取液滤过,用旋转蒸发仪浓缩,定容于5 mL容量瓶中。各吸取上述溶液1 mL于25 mL容量瓶中,40%乙醇定容,滤过,平行3份,供气相色谱检测用。

　　2.5.2  体外透皮扩散试验 

　　取大鼠3只,脱毛膏脱毛,恢复24 h后处死,剥离腹部皮肤,刮去脂肪组织,置于生理盐水中备用。试验时取出,平展于TP-5型智能透皮扩散仪装置中,固定。称取β-CD包合物(1∶4包结)2 g,HP-β-CD包合物(1∶4包结) 4 g,分别置于鼠皮上,固定好装置(β-CD和HP-β-CD包合物各平行3份)。下层接受液为22 mL 40%乙醇溶液,磁力搅拌器恒速搅拌(300 r/min),整个装置放于37 ℃恒温水浴中。药物从给药室经皮渗透到接受室,于1、2、3、4、6、8、12、24 h各取接受液1 mL,并向装置中补充1 mL新鲜的接受液,得到不同时间点皮肤透过液。

　　2.5.3  气相色谱法测定不同时间接受液中挥发油的含量 

　　色谱柱：HP-50+(Crosslinked 50% PH M E Siloxane),0.53 mm×30 m；柱温采用程序升温,初始温度145 ℃,维持2.5 min,以15 ℃/min的速率升至190 ℃,恒温6 min；载气为高纯氮气,柱前压5 psi；检测器：FID,260 ℃；进样口温度：260 ℃。
   
　　取透皮前供试品以及各时间点的皮肤透过液,每个样品进样2次,每次进样1 μL。色谱图见图1。
   
　　结果色谱图中在t＝6.5 min的位置的峰,面积较大,且峰形较好,故选择此峰作为考察的依据。根据t＝6.5 min峰的面积,计算各时间点累计释放百分率,结果见表2。表2  不同包合物对其累积透过率的影响(略)
  
　　从表2可以看出,β-CD包合物(1∶4包结)和HP-β-CD包合物(1∶4包结)的累积透过率相差很大,二者经Paired Samples T test检验,有显著性差异(P＝0.003)。这表明：β- CD包合物(1∶4包结)的累积透过率优于HP-β-CD包合物(1∶4包结)的累积透过率。故我们在工艺中以β-CD代替HP-β-CD对挥发油进行包合。                     

 　   虽能取得一定的临床疗效,但却会出现相应的不良反应。笔者根据“肾藏精”、“主生殖”、“精血同源”、“精血互生”等理论,认为AsAb阳性导致的男性不育,其病机主要是肾虚、气血失和。肾虚精亏,气不化精,精不化血,血行无力,而形成肾虚血瘀。治疗当以补肾活血化瘀为法。方药以淫羊藿、蛇床子温肾壮阳为君药。熟地黄、紫河车、女贞子补肾益精、阴中求阳；山茱萸、枸杞子、菟丝子补肝肾；山药补肺脾肾之气而达全身；当归、桃仁活血祛瘀、通行血脉；五味子益气生津、补肾宁心,共为臣药。佐以茯苓、牡丹皮渗湿泄热；甘草解毒、调和诸药。现代药理研究表明,活血化瘀方药能通过增强血-睾屏障的功能,增加精浆免疫抑制因子的产生及提高精子内各种酶的活力,调整机体免疫机制与内在平衡,从而消除抗精子抗体或降低其活性,以治疗免疫性不育。

【参考文献】
  　　[1] Madar J, Urbanek V, Chaloupkova A, et al. Role of sperm antibodies and cellular autoimmunity to sperm in the pathogenesis of male infertility[J]. Ceska Gynekol,2002,67(1)：3.

　　[2] 何继永.外科疾病诊断标准[M].北京：科学出版社,2001.543.

　　[3] 中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则[S].1993.192.

　　[4] Dinitrora OK, Kalaidzhiewv SK, Nakov LS, et al. Methods for the detection of anti-sperm antibodies associated with immunologically- mediated human infertility[J]. A kush Ginekol(Sofiia),2002, 41(3)：43.