丹参药材水溶性成分含量的HPLC法分析

　　2.2  丹参素和原儿茶醛的含量测定

　　2.2.1  色谱条件 

　　色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-冰醋酸-水(20∶1∶80)；流速：1 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长λs＝280 nm。理论板数按丹参素峰计算应不低于4 000。在此条件下,丹参素、原儿茶醛与其他组分达到良好分离(见图2)。

　　2.2.2  供试品溶液的制备 

　　取丹参药材粉末(过3号筛)约0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25 mL,密塞,称定重量,超声提取1 h,取出,再加热回流4 h,取出,密塞,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过。取续滤液,即得。

　　2.2.3  对照品溶液的制备 

　　精密称取丹参素钠、原儿茶醛对照品适量,分别加甲醇溶解,并制成每1 mL分别含丹参素钠0.08 mg(相当于丹参素0.07 mg)、原儿茶醛0.012 mg的溶液,即得。

　　2.2.4  标准曲线的绘制 

　　分别精密吸取丹参素钠对照品溶液(0.08 mg/mL)和原儿茶醛对照品溶液(0.012 mg/mL)各3、6、9、12、15 μL,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以丹参素钠和原儿茶醛的进样量(μg)为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线并计算回归方程。丹参素钠Y＝-7.147 2＋406.353X,r＝0.999 1；原儿茶醛Y＝-0.772 7＋ 4 943.475X,r＝0.999 2。结果表明,丹参素钠在0.24～1.2 μg范围内呈线性关系；原儿茶醛在0.036～0.18 μg范围内呈线性关系。

　　2.2.5  精密度试验 

　　取供试品溶液1份,在上述色谱条件下连续进样5次,每次进样5 μL,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的RSD＝1.26%,原儿茶醛的RSD＝0.86%,二者之和的RSD＝1.13%。

　　2.2.6  重复性试验 

　　平行制备5份供试品溶液,分别在上述同一色谱条件下,分别进样5 μL,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的RSD＝2.60%,原儿茶醛的RSD＝0.66%,二者之和的RSD＝2.20%。

　　2.2.7  稳定性试验

　　取供试品溶液1份,在上述色谱条件下,分别于样品制备后0、1、2、4、8、16、24 h进行测定,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的RSD＝0.58%,原儿茶醛的RSD＝1.47%,二者之和的RSD＝0.58%。

　　2.2.8  加样回收率试验 

　　取已知含量的丹参药材粉末,分别加入等量的丹参素钠、原儿茶醛对照品,按上述色谱条件测定,二者回收率分别为98.94%和98.96%,RSD分别为1.49%和1.66%(见表3、表4)。表3  丹参素钠回收率试验结果（略）表4  原儿茶醛回收率试验结果（略）

　　2.2.9  含量测定 

　　按供试品溶液制备方法,分别对10个不同来源丹参药材中的丹参素、原儿茶醛的含量进行测定。结果见表5。表5  不同来源丹参药材中丹参素、原儿茶醛的含量测定结果（略）

　　3  讨论
   
　　在丹酚酸B含量测定中,曾经试用过甲醇-乙腈-甲酸-水不同配比的流动相,结果正文采用的流动相配比分离效果最好,所以最终选择其作为流动相。试验过程中曾对供试品的提取溶媒、溶媒用量、提取方法、提取时间等因素进行了考察,结果表明,正文所列的供试品溶液制备方法为各因素最佳组合。