五倍子对表皮葡萄球菌的抗菌作用及其形态学变化

　　3  结果

　　3.1  五倍子对表皮葡萄球菌的抗菌效果

　　(见表1、表2)表1  五倍子乙醇提取物对124株表皮葡萄球菌(MRSE和MSSE)的累计抑（略）表2  五倍子提取物对124株表皮葡萄球菌株的抑菌作用（略）

　　3.2  用光学显微镜观察五倍子对表皮葡萄球菌形态和结构的影响
   
　　用显微镜观察表皮葡萄球菌形态。先用低倍镜和高倍镜观察,找到适当视野时,再用油镜仔细观察细菌形态变化。正常表皮葡萄球菌在油镜下,其形态为大小相等、染色一致的革兰阳性球菌(见图1)。表皮葡萄球菌的牛心汤培养液加入五倍子提取物后,菌细胞由小变大,即逐渐膨胀、增大(见图2、图3),可能是五倍子进入菌细胞后,其抗菌物质与菌细胞发挥抑菌作用所致,实际上菌细胞已经死亡。菌细胞膨胀到一定大小时,细胞内含物包括细胞壁和细胞质逐渐消失(见图4、图5),最后菌细胞的内含物全部消失,只剩下菌细胞的影子(见图6)。

　　4  讨论

　　本实验观察五倍子对表皮葡萄球菌菌细胞形态的影响,结果表明,正常表皮葡萄球菌在油镜下是大小一致、排列整齐、表面光滑、染色一致的革兰阳性球菌。表皮葡萄球菌的牛心汤培养物,加入五倍子提取物后,菌细胞由小变大,逐渐膨胀,且大小不一。可能是五倍子进入菌细胞后,其抗菌物质与菌细胞作用所致,实际上菌细胞已经死亡。膨胀到一定大小时,其细胞壁结构、层次不清,胞浆膜和细胞质结构模糊,这与电镜下所观察的表皮葡萄球菌菌细胞的变化相似,但在显微镜下可看到菌细胞的内含物逐渐消失,最后菌细胞的内含物全部消失,只剩下菌细胞的影子。表明五倍子对表皮葡萄球菌的细胞壁和细胞质均有影响。通过对五倍子乙醇提取物进行抑菌效果检测,其结果表明,五倍子乙醇提取物对表皮葡萄球菌,无论是MRSE还是MSSE,均有很强的抑菌力,对MRSE抑菌作用更强。其对MRSE的MIC90为0.288 mg/mL,对MSSE的MIC90为0.144 mg/mL。说明五倍子抗菌作用很强。

　　据报道,抗菌药物的作用机制之一就是干扰细菌细胞壁的合成,多数青霉素类和头孢菌素类等β-内酰胺类抗生素,主要与青霉素结合蛋白[PBP1和(或)PBP3]结合,形成丝状体和球形体,然后细菌变形萎缩,逐步溶解死亡[5]。而万古霉素的作用位点处于β-内酰胺类抗生素作用位点的上游,它抑制细胞壁合成的第二阶段(类脂结合)中的一个关键的转化反应,即当万古霉素与在UDP-五肽末端的D-丙氨酰-D-丙氨酸末端游离羧基紧密结合,就抑制了有功能的肽聚糖形成过程中所需的转糖苷作用和转肽作用的最后步骤,导致细菌细胞的溶解[6]。从而可以初步认为,五倍子对表皮葡萄球菌的抗菌作用是干扰细胞壁合成,同时又损伤胞浆膜,使细菌溶解、破裂而死亡。

【参考文献】
  　[1] 李仲兴,张立志,王秀华,等.五倍子对224株耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA和MRSE)的抑菌效果观察[J].中国中医药信息杂志,2001,8(12)：32－34.

　　[2] Murray PR. Manual of clinical microbiology[M].8th ed.Washington DC：American Society for Microbiology,2003.384－404.

　　[3] 董方言.现代中药新剂型新技术[M].北京：人民卫生出版社,2001.8－13.

　　[4] 李仲兴,王秀华,赵建宏,等.应用M-H琼脂进行连翘体外抗菌实验的效果观察[J].中国中药杂志,2000,25(12)：742－745.

　　[5] 戴自英,刘裕昆,汪 复.实用抗菌药物学[M].第2版.上海：上海科学技术出版社,1998.12－18.

　　[6] 陈代杰.抗菌药物与细菌耐药性[M].上海：华东理工大学出版社, 2001. 139－141.