丹参提取工艺研究

                    作者：张玉祥,陈静君,陈优生

【摘要】  目的 优选丹参有效成分最佳提取工艺。方法 通过多种提取工艺(传统水煎法、乙醇回流法、超声波法、超临界萃取法)的比较,以丹参素和丹参酮ⅡA为指标成分,优化最佳提取工艺。结果 CO2超临界流体萃取法提取具有较高的丹参素和丹参酮ⅡA有效成分含量。结论 CO2超临界流体萃取法可以用于丹参有效成分的提取,为丹参制剂的前处理提供实验依据。

【关键词】  丹参；提取工艺；丹参素；丹参酮ⅡA

    Abstract：Objective To study the best extraction method for Radix Salvia Miltiorrhiza effective component. Methods Several extraction methods for Radix Salvia Miltiorrhiza (water decoction, alcohol reflux, ultrasonic extraction and supercritical CO2 extraction) were compared, to optimize the extraction methods by determined of Danshensu and Tanshinone IIA of Radix Salvia Miltiorrhiza. Results Supercritical CO2 extraction had high content of effective component of Danshensu and Tanshinone IIA. Conclusion Supercritical CO2 extraction was the best extraction method for Radix Salvia Miltiorrhiza. This result would be an experimental proof for pre-processing the preparation of Radix Salvia Miltiorrhiza.
   
　　Key words：Radix Salvia Miltiorrhiza；extraction methods；Danshensu；Tanshinone IIA
 
    丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎,具有祛瘀止痛、活血通经、清心除躁之功效。复方丹参制剂是我国治疗冠心病、心绞痛的常用中成药,由丹参、三七及冰片组成。现代药理学研究表明,丹参能够增加冠状动脉血流量、降血脂、抑制血栓形成或抗血栓、改善微循环[1]。特别是在近20年里,丹参治疗冠心病的研究报道甚多。丹参主要有效成分为水溶性酚性酸类(丹参素和原儿茶醛)、脂溶性二萜醌类(丹参酮ⅡA)。本实验以丹参素和丹参酮ⅡA为指标成分,通过多种方法研究丹参的提取工艺,并采用高效液相色谱法对指标成分进行含量测定,确定出最佳提取工艺,为丹参制剂的前处理提供实验依据[2-4]。

　　1  仪器和试剂
  
　　Waters高效液相色谱仪(美国Waters公司),KQ-500DE型医用超声波(昆山市超声仪器有限公司,频率40 kHz)。丹参购于广州清平药材市场,经鉴定为正品；丹参素对照品(自制,批号20040510,含量99.5%)、丹参酮ⅡA对照品(自制,批号20041015,含量99.2%)。甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。

　　2  分析检测方法

　　2.1  丹参素HPLC分析的色谱条件

    色谱柱：Zorbax ODS反相柱(250 mm×4.6mm,5 μm),流动相：甲醇-水=0.1∶0.9(用冰醋酸调pH=3),进样量：20 μL；灵敏度：0.16；柱温：40 ℃；λ=281 nm；流速：1.0 mL/min。

　　2.2  丹参酮ⅡA HPLC分析的色谱条件

　　色谱柱：Zorbax ODS反相柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流
动相：甲醇-水=0.85∶0.15,进样量：20 μL；灵敏度：0.32；柱温：40 ℃；λ=270 nm；流速：1.0 mL/min。

　　3  实验方法

　　3.1  传统水煎法

　　3.1.1  试验方法 

　　准确称取丹参25.00 g,加入一定量的水,加热煎煮,根据表1条件进行试验。丹参提取液水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量,计算提取量。表1  传统水煎法试验因素水平表（略）

　　3.1.2  结果分析 

　　由实验结果得出,影响因素顺序为B>C>A,最佳工艺为A3B3C2,即采用12倍量水,煎煮2次,每次1.5 h的煎煮方法,其丹参素和丹参酮ⅡA含量明显高于其他条件的含量。故认为此条件为传统水煎法的最佳提取条件。

　　3.2  乙醇回流法

　　3.2.1  试验方法 

　　准确称取丹参25.00 g,加入一定浓度、一定量的乙醇,加热回流,根据表2条件进行试验。丹参提取液高速离心,上清液回收乙醇,再水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA的含量,计算提取量。表2  乙醇回流法试验因素水平表（略）

　　3.2.2  结果分析 

　　丹参素的提取量：根据实验结果得出,其影响因素顺序为C>B>A,最佳工艺为A2B2C3,即60%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析得知影响提取效果的主要因素是回流时间,乙醇浓度和乙醇量对其影响不显著。
   
　　丹参酮ⅡA的提取量：根据实验结果判断其影响因素顺序为A>C>B,最佳工艺为A3B2C3,即80%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析可知,乙醇浓度对提取效果有显著性差异,乙醇量和回流时间对其影响不显著。
   
　　综合考虑认为丹参采用回流提取法,以80 %乙醇、10倍量回流2次、每次1.5 h的方法较好。