“匹多莫德”片剂的药物动力学和相对生物利用度研究

　　匹多莫德片剂的主要活性成份是吡酮莫特（pidotimod），是一种全合成的免疫刺激调节剂，通过刺激和调节细胞免疫产生效应。成人预防量为每次800mg，每日一次。本实验的目的是以意大利普利化学工业公司生产的普利莫口服液（400mg/支）为对照品利用健康志愿者验证多肽药物研究所生产的匹多莫得片剂（200mg/片）的相对生物利用度和药物动力学特征。
1　实验仪器与试药：
1.1　仪器
　　Shimadzu 6A系列高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）； IKA minishaker马来西亚产；80—2B型高心机（4000r/m）；TDx高速离心机（美固ABBOTT公司）；AP—01溶剂过滤器（奥特赛恩斯［天津］仪器有限公司）；TP200B超声波清洗机（天鹏新技术[北京]有限公司）
1.2　药品及试剂
　　药品：标准品：匹多莫德（99.9％），多肽药物研究所提供；样品：匹多莫得片剂（200mg/片），多肽药物研究所生产；对照品：普利莫口服液（400mg/支），意大利普利化学工业公司生产。试剂：甲醇乙腈（均为色谱纯）KH2PO4磷酸（均为分析纯）
2　血药浓度测定方法的建立：
2.1　色谱条件：
　　色谱柱：ALLTIMA NH₂ 5μ柱 250mm×4.6mm；预拄：4mm× 2mmNH₂柱；流动相：乙腈：0.02MpH3.2磷酸盐缓冲液=75:25；流速：1.0ml/min；检测器：Shimadau SPD-6AV UV 检测器；检测波长：210nm。
2.2　受试者的选择及试验方法：
2.2.1　受试者的选择：
　　本试验选用健康男性志愿者18名，年龄18～35岁，体重为53～ 80公斤。受试者均先经充分的体检，并由生化、尿液、血相等检查确认其健康状态。受试者在试验前应详细告知以试验内容、试验药物的作用和可能发生的副反应、受试者的权利和义务，并签署同意书之后，方可参加试验。
2.2.2　试验方法：
　　本实验采用双处理、两周期随机交叉实验投计，将受试者随机分成两组，每组9人。第一组于第一周期单剂量口服多肽药物研究所生产的匹多莫德片剂800mg，于第二周期单剂量口服意大利普利工业公司生产的普利莫口服液800mg，第二组于第一周期单剂量口服意大利普利化学工业公司生产的普利莫口服液80Omg，于第二周期单剂量口服多肽药物研究所生产的匹多莫德片剂800mg，清洗期为一周。每次给药之前，每名受试者均先经过夜禁食十小时以上，然后给药。服药前先取一空白血，然后每名受试者均统一以200ml水口服给予匹多莫德片剂或普利莫口服液 800mg，并于服药后0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0，8.0，12.0，24.0小时前臂取血3ml，肝素抗凝，分离血浆，测定其血药浓度，求出Tmax，Cmax，T1/2，MRT，AUC^0_∞，F等，样品匹多莫德片剂与对照普利莫口服液比较，求出相对生物利用度，并对其药物动力学参数进行统计学分析。

表１　生物利用度交叉实验设计表

2.3　标准曲线的制备：
2.3.1　标准溶液的配制：
　　精密称取100mg匹多莫德标准品，用蒸馏水定容至100ml，得浓度为1mg/ml的标准液。精密吸取10ml、7.5ml、5ml、2.5ml、1ml的标准液，用蒸馏水定容至100ml，分别得浓度为100μg/ml、75μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、10μg/ml的标准液。
2.3.2　标准曲线的制备：
　　取空白血浆6份各500μl，分置6个具塞离心管中，分别加入不同量的匹多莫德标准液，使其血浆浓度分别为0，1.0，2.5，5.0，7.5，10.0μg/ml，加入500μl乙晴，涡旋振荡1分钟，高速离心（10000rpm）10分钟。取上清液20μl进HPLC。每个浓度各做5次；取平均值，以浓度对蜂面积进行线性回归，得回归方程如下：Conc（μg/ml）=7.18×10^-5×Area+0.023 （γ= 0.9997）
2.4　血浆样品的测定：
　　取样品血浆500μl，加入乙晴500μl，涡旋振荡1分钟，高速离心（10000rpm）10分钟，取上清液20μl进HPLC．
2.5　方法评价：
2.5.1　最低检测浓度：0.0144μg/m1（以仪器所能检测的最小蜂面积带入浓度－面积公式）