敌百虫暴露对小鼠及胎鼠生殖发育影响
作者：戴斐，田英，沈莉，冯易
【摘要】 目的 研究母鼠器官形成期经口暴露较低浓度的有机磷农药-敌百虫，对母鼠生殖功能、内分泌功能及胚胎发育的影响。 方法 孕鼠随机分为对照组和3个实验组，在胎儿器官形成期即妊娠第6～15d经口灌胃染毒敌百虫，剂量分别为0，12?5，25和50mg/kg。在妊娠第17d经眼球取血后处死孕鼠，研究在本实验剂量下，敌百虫对孕鼠生殖功能、内分泌功能以及胚胎发育的影响。结果 （1）母鼠器官形成期经口暴露敌百虫，可导致各实验组胎鼠外观畸形发生率显著增高（P<0?01）。 （2）各剂量敌百虫暴露对孕鼠的生育力及妊娠结局无明显影响，表现在孕鼠的体重、卵巢脏器系数、胎盘脏器系数、黄体数、着床率、活胎数、死胎数、吸收胎数等与对照组比较差异无统计学意义（P>0?05）；（3）除50mg/kg剂量敌百虫的暴露可引起母鼠血清雌二醇浓度下降外，其他各剂量组母鼠血清和卵巢的雌二醇浓度均未见明显影响。结论 在本实验剂量下，器官形成期雌鼠经口暴露敌百虫对子代胚胎的生长发育有影响，表现为胎鼠的畸形发生率增加，但对母鼠的生殖功能、内分泌功能未见明显影响。
【关键词】 敌百虫
敌百虫是我国常用的有机磷农药之一。已有研究表明，在胚胎器官形成期，母鼠敌百虫的暴露可影响母鼠的生殖功能，导致子代生长发育迟缓和畸形的发生〔1,2〕，但上述研究中敌百虫染毒剂量均较大（>200mg/kg）。本研究以目前广泛使用的有机磷农药之一敌百虫为受试物，以母鼠及子代胎鼠为研究对象，进行器官形成期母鼠经口暴露较低剂量的敌百虫对生殖、内分泌功能及胎鼠发育毒性影响的研究，探讨较低剂量有机磷农药暴露下的健康效应。
1 材料与方法
1?1 实验动物 选用昆明种10～14周健康小鼠（中科院上海分院动物研究中心）。室温（23±2）℃，湿度（50±10）%，并保证12h明暗循环的条件下，雌雄分笼饲养1周，然后按雄雌比1∶2比例合笼，次日清晨检查阴栓，并以阴栓阳性当日定为受孕第0d（Dg0）并记录当时体重。
1?2 分组及染毒 将46只孕鼠随机分为4组：分别为空白对照组（12只）、低剂量组（11只）、中剂量组（11只）和高剂量组（12只）。在孕鼠妊娠第6d开始，每日上午10：00点按照0?1ml/10g，根据体重确定相应给药量，并灌胃给药1次，3个染毒组剂量按低中高组分别为12?5，25和50mg/kg;每3d称重一次，同时根据体重调整给药量；对照组给予相应量的蒸馏水，连续染毒10d。各组小鼠均为普通饲料自由饮水。
1?3 观察指标与方法
1?3?1 母鼠观察 （1）一般急性毒性观察：观察染毒后母鼠活动度、精神状况和饮水、食物消耗量情况。（2）体重及脏器系数：在孕鼠妊娠17d，称重后用颈椎脱臼法处死孕鼠，立即剖腹，分离卵巢、胎盘并称重，脏器系数（=脏器重量/体重）。（3）黄体数、着床率： 将卵巢置于体视显微镜（Nikon C-DSS230）下观察卵巢黄体数，同时从孕鼠子宫逐个取出胎鼠，鉴别活胎、死胎、吸收胎，并计算着床总数（为活胎、死胎、吸收胎的总和）和着床率。（4）血清及卵巢匀浆雌二醇（E2）的测定：孕鼠被处死前，摘眼球取血，离心后取血清于-20℃冰箱保存；将卵巢置于少量生理盐水中-20℃条件下保存，测定时按1∶4的比例加入生理盐水，用1ml玻璃匀浆器制成卵巢组织匀浆。用ELISA（竞争法）测定小鼠血清和卵巢匀浆雌二醇浓度；试剂盒(美国Market公司)，灵敏度5pg/ml。
1?3?2 胎鼠观察［3］ （1）胎鼠平均体重:计算每窝胎鼠的全部活胎的平均体重。（2）外表畸形观察：按常规方法。
1?4 统计分析 应用SPSS11?5统计软件进行t检验和χ2检验。
2 结果
2?1 一般情况 在实验过程中，未发现小鼠出现有机磷农药急性中毒症状，所有小鼠全部生存至实验结束。从母鼠妊娠第6d开始染毒至妊娠第17d被处死，各实验组母鼠体重的变化与对照组比较，差异无统计学意义（P>0?05）。
2?2 经口暴露敌百虫对孕鼠生殖功能方面指标的影响(表1)
2?2?1 对孕鼠脏器系数、着床率的影响 与对照组比较，各实验组的卵巢脏器系数、胎盘脏器系数、平均黄体数和着床率差异无统计学意义（P>0?05），各实验组的活胎、死胎和吸收胎的个数与对照组比较差异也无统计学意义（P>0?05）。
2?2?2 对孕鼠血清雌二醇浓度和卵巢雌二醇浓度的影响 除50mg/kg剂量组血清雌二醇浓度较对照组明显降低（P<0?05）,其他剂量组与对照组比较则差异无统计学意义（P>0?05）；各实验组小鼠卵巢雌二醇浓度较对照组差异无统计学意义（P>0?05）。
2?3 经口暴露敌百虫对胎鼠生长发育及外观畸形发生的影响(表2) 对照外观组畸形发生率为6?25%，实验组（染毒剂量由低到高）的畸形发生率分别为28?35%，24?84%和22?15%，经χ2检验，各实验组畸形发生率较对照组有显著增高（P<0?01），但各实验组之间的畸形发生率差异无统计学意义（P>0?05）。25和50mg/kg剂量组的胎鼠平均体重与对照组比较差异无统计学意义（P>0?05）。但12?5mg/kg剂量组的胎鼠平均体重与对照组比较明显降低（P<0?01）。
表1 敌百虫暴露对孕鼠生殖功能的影响（略）
注：与对照组比较，* P<0?05
表2 孕鼠敌百虫暴露对胎鼠外表畸形发生的影响（略）
注：与对照组比较，** P<0?01
3 讨论
本研究发现，在相对较低剂量敌百虫的暴露水平下（12?5～50mg/kg），器官形成期母鼠敌百虫的经口暴露，对母鼠生育力及生殖结局没有影响，但对子代胚胎却产生了一定的影响，导致胎鼠外观畸形发生率较对照组明显增加（P<0?01），与我们先前的研究一致〔2〕。本研究结果提示，有机磷农药可以透过胎盘屏障直接作用于胚胎组织来影响胚胎的形成与发育〔4〕；敌百虫的这种致畸作用可能与通过烷化作用损伤DNA，从而产生致突变效应有关〔5〕。敌百虫对胎儿生长发育的影响，可能和抑制胎盘中酯酶的活性，影响胎儿营养的利用有关〔6〕；但是，此次研究中只在12?5mg/kg剂量组出现了胎鼠体重降低的变化，而其他中、高剂量组却无明显影响。是否和机体内部反馈调节作用有关，有待进一步研究。结果提示，随着有机磷农药敌百虫浓度的增高，卵巢组织中的雌二醇浓度未发生显著性改变，血中雌二醇浓度除了50mg/kg剂量组较对照组降低外，其余各剂量组的血清雌二醇浓度均无明显变化，说明本实验条件下，敌百虫没有显示出拟雌激素样作用。本研究发现，在相对较低剂量敌百虫的暴露水平下（12?5～50mg/kg）器官形成期母鼠敌百虫的经口暴露，可导致各实验组胎鼠外观畸形发生率显著增高，但对母鼠生育力及生殖结局没有影响。本实验条件下，敌百虫对内分泌激素雌二醇没有产生明显影响。
【】
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