高效液相色谱法测定抗病毒胶囊中连翘苷的含量

【关键词】  抗病毒胶囊；,,连翘苷；,,高效液相色谱法

　　摘要：目的建立抗病毒胶囊中连翘苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定该药中连翘苷的含量，色谱条件：ODS C18柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）为色谱柱,乙腈水（28∶72）为流动相；流速：0.8 ml/min；检测波长：230 nm。结果连翘苷浓度范围在4.96~49.6 μg/ml之间峰面积与浓度线性关系良好，r=0.999 9,平均回收率为97.7%，RSD为1.77%;结论 该方法准确、可靠、专属性强，可用于抗病毒胶囊的质量控制。

　　关键词：抗病毒胶囊；  连翘苷；  高效液相色谱法

　　Determination of Forsythin in Anti-virus Capsule by HPLC

　　　Abstract：ObjectiveTo establish a method for the determination of forsythin in Anti-virus Capsule.MethodsForsythin in Fructus Forsythiae was determined by HPLC.The chromatographic conditions were：ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm） as analytic column, acetonitrile-water(28∶72) as mobile phase,the detection wavelength was set at 230 nm and the flow rate was 0.8 ml/min.ResultsThe linearity of forsythin in the range of 4.96~49.6 μg/ml was good,r=0.999 9,the average recovery was 97.7%,RSD=1.77%.ConclusionThe method is accurate,reliable and specific and can be used for the quality control of Anti-virus Capsule.

　　Key words：Antivirus Capsule；  Forsythin；  HPLC
   
　　抗病毒片处方来源于中华人民共和国国家药品监督管理局标准，由板蓝根、石膏、芦根、生地黄、郁金、知母、石菖蒲、广藿香、连翘等九味中药组成。板蓝根、连翘清热凉血，驱除外感邪毒；石膏、知母、芦根、生地和郁金清肺热，凉血热兼解散肌表之热；广藿香疏散表邪；石菖蒲主咳逆止气。九味组方治内热感冒、上呼吸道感染等症，可谓合理得当。本品由抗病毒片改制而成，对上呼吸道感染、支气管炎、流行性出血性结膜炎、腮腺炎有疗效，对病毒性流感疗效尤为显著。为控制抗病毒胶囊的质量，本文采用高效液相色谱法测定抗病毒胶囊中连翘苷的含量，结果表明：该方法准确，重现性好，可有效控制抗病毒胶囊的质量。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器岛津LC10ATvp高效液相色谱仪，SPD10Avp紫外检测器，岛津C18柱4.6 mm×250 mm，梅特勒天平（上海梅特勒托利多有限公司）。

　　1.2  试剂与药品连翘苷对照品（药品生物制品检定所），抗病毒胶囊(安徽省华康医药科技开发公司提供)，甲醇、乙腈(色谱纯),重蒸水（自制）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件固定相：ODS C18柱（4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈水（28∶72）；流速：0.8  ml/min；检测波长：230 nm；柱温：25℃；进样量：20 μl。 

　　2.2  对照品溶液的制备  精密称取经105℃干燥至恒重的连翘苷对照品适量，加甲醇制成每毫升中含连翘苷约15 μg的溶液，摇匀，即得。

　　2.3  供试品溶液的制备  取本品精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声（功率350 W）40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，于4℃中放置过夜，滤过，精密量取续滤液10 ml，蒸至近干，加硅胶0.5 g拌匀，加于硅胶柱（200～300目，3 g，内径1～1.5 cm）上，用氯仿甲醇（40∶1）60 ml洗脱，弃去洗脱液，继用氯仿甲醇（15∶1）洗脱，收集10 ml洗脱液弃去，继收集70 ml洗脱液，浓缩至干，残渣用甲醇溶解转移至10 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

　　2.4  线性关系考察  精密称取连翘苷对照品9.92 mg，置100 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 ml分别至10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按色谱条件进行含量测定，以峰面积（S）对浓度（C）作二元一次线性回归，得回归方程 S=92 697C+19 063(r=0.999 9)。结果见表1。

　　表1  线性关系考察（略）

　　结果表明：连翘苷浓度范围在4.96~49.6 μg/ml之间峰面积与浓度线性关系良好。

　　2.5  精密度实验精密吸取上述供试品溶液20 μl，连续进样6次，按上述色谱条件测定，连翘苷峰面积积分值分别为1 014 021.1，1 060 035.9，1 046 227.8，1 038 431.3，1 050 578.5，1 042 934.9，RSD为1.67%，精密度良好。

　　2.6  溶液稳定性实验  精密吸取上述供试品溶液20 μl，分别在0，3，6，9，24，48 h进样20 μl，按上述色谱条件测定，得平均RSD=0.74%，即连翘苷在48 h以内稳定。

　　2.7  重现性实验  取同一批抗病毒胶囊样品，按上述供试品溶液的制备的方法制备6份，按上述色谱条件测定。结果RSD=1.77%，重现性较好。

　　2.8  回收率实验  采用加样回收法，精密称取连翘苷对照品，用甲醇配成193.5 μg/ml的对照品溶液，分别精密量取1ml加入到五份已知含量的同一批样品溶液中，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，照上述色谱条件进行测定，计算回收率。结果见表2。

　　表2  回收率试验结果（略）

　　2.9  样品含量测定  取不同批号的样品，分别按供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件测定，计算出样品中连翘苷的含量。结果见表3。

　　表3  样品中连翘苷的含量测定（略）

　　*为每丸中含量

　　3  讨论

　　3.1  在该实验中，曾选用乙腈甲醇水体系作为流动相，但柱压太大，对色谱柱有损伤，后改用乙腈-水体系为流动相，通过调节不同比例的流动相实验，结果表明，以乙腈水（28∶72）为流动相分离度好（R＞1.5）,而且保留时间适宜。

　　3.2  本法中供试品溶液制备的试验研究，原样品采用甲醇超声，滤过直接进高效液相，结果杂质含量测定有影响，分离度不合要求，将样品进行前处理再进入高效液相，即将样品过柱子，现对吸附剂进行了考察，用氧化铝作为吸附剂时极性大的成分多对主峰有影响，且峰出完时间长；用硅胶作为吸附剂，对其规格、用量及洗脱剂均作了考察，确定硅胶的粒度及用量；又对洗脱剂的选择、配比及用量作了试验研究，经过大量的筛选试验，以氯仿-甲醇体系不同比例洗脱，用氯仿-甲醇（40∶1）洗脱，继用氯仿甲醇（15∶1）洗脱去除杂质多且将测定成分连翘苷洗脱完全，能达到峰出完时间缩短，且主峰符合要求。

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　　［1］  国家药典委员会.药典［S］.北京：化学出版社，2000：附录Ⅵ D.

　　［2］  中华人民共和卫生部药典委员会.中国药典（第二增补本）［S］.北京：化学工业出版社,1993：19.

　　［3］  梁文藻. 连翘成分分析［J］.药物分析杂志，1985，5（2）：67.