不同炮制法的淫羊藿提取物对小鼠出血和凝血时间的影响

【关键词】  淫羊藿；,,抗凝作用；,,炮制方法

　　摘要：目的观察不同炮制法的淫羊藿提取物对小鼠出血时间和凝血时间的影响。方法采用断尾法测定小鼠的出血时间；用玻片法和毛细管法测定小鼠的凝血时间，并与阿司匹林进行比较。结果淫羊藿、炙淫羊藿Ⅰ、Ⅲ提取物均有延长出血时间和凝血时间的作用，尤以炙淫羊藿Ⅰ提取物作用最为明显（淫羊藿炒至吸尽油脂的提取物），而炙淫羊藿Ⅱ提取物有延长出血时间的作用，但对凝血时间无影响。结论 炙淫羊藿Ⅰ的炮制方法对小鼠出血和凝血时间影响最明显。

　　关键词：淫羊藿；  抗凝作用；  炮制方法

　　Effects of Extraction of Epimedy by Different Processed Methods on Bleeding and Coagulation Time in Mice

　　Abstract：ObjectiveTo observe the effects of extract of Epimedy by different processed methods on bleeding and coagulation time in mice.MethodsThe bleeding time was measured using tail-cutting method, and the coagulation time was measured using the slice method and the capillary method respectively.ResultsThe bleeding and coagulation time was prolonged significantly by Epimedy, Epimedy Ⅰ and Ⅲ of different processed methods. The bleeding time was only prolonged by Epimedy Ⅱ of different processed method, and the coagulation time was not affected.ConclusionEpimedy Ⅰ of different processed method has powerful effects on bleeding and coagulation time in mice.

　　Key words：Epimedy;  Anti-coagulation action;  Processed method
   
　　淫羊藿 Epimedium 是小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim. ），箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum（Sieb.et Zucc.）Maxim. ，柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.，巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分［1］。根据其炮制方法不同可分为淫羊藿和炙淫羊藿，将采集的淫羊藿除去杂质，摘取叶片，喷淋清水，稍润，切丝，干燥后即得淫羊藿；将淫羊藿与羊脂油用文火炒至不同程度，取出，放凉即得不同炮制法的炙淫羊藿。淫羊藿性辛、甘、味温，主要成分有淫羊藿黄酮、淫羊藿多糖等，具有补肾壮阳、祛风除湿等药理作用［2］。有关淫羊藿的药理作用研究很多，但尚未见不同炮制方法的淫羊藿提取物对小鼠出血和凝血影响的研究报道。本实验研究不同炮制方法的朝鲜淫羊藿提取物对小鼠出血和凝血时间的影响。

　　1  材料

　　1.1  主要药品淫羊藿由吉林省敖东药业集团股份有限公司提供： 将采集的淫羊藿除去杂质，摘取叶片，喷淋清水，稍润，切丝，干燥后的提取物（简称淫羊藿）；不同炮制法的炙淫羊藿提取物有：淫羊藿炒至吸尽油脂的提取物（简称炙淫羊藿Ⅰ）、淫羊藿炒至发亮有光泽的提取物（简称炙淫羊藿Ⅱ）、淫羊藿炒至微焦的提取物（简称炙淫羊藿Ⅲ），由延边大学基础医学院药理教研室提供。阿司匹林肠溶片：南京恒生制药厂出品，批号为980429-1。

　　1.2  动物   昆明种小鼠，雌雄各半，体重18~22 g，由延边大学医学部动物科提供。

　　2  方法和结果

　　2.1  不同炮制法的淫羊藿提取物对小鼠尾出血时间的影响 采用断尾法［3］。  取小鼠60只，随机分为6组。分别为生理盐水组、阿司匹林组、淫羊藿组、炙淫羊藿Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ组，按表1灌胃给药，1次／d，连续7 d。末次给药后1 h，将小鼠放置于固定器中，将其尾部垂直，用mm尺测量，并在距尾尖3 mm处作标记，然后用手术剪在鼠尾标记处剪断，待血液自行溢出开始计时， 每隔30 s用滤纸吸去血滴1次，直至血液停止（滤纸吸时无血为止），即为出血时间。用秒表记录出血时间。6组数据采用SPSS 10.0 软件进行单因素方差分析处理。结果小鼠出血时间与生理盐水组比较，炙淫羊藿Ⅰ有非常显著性差异（P<0.01），阿司匹林、淫羊藿、炙淫羊藿Ⅱ、Ⅲ有显著性差异（P<0.05）。结果见表1。

　　表1  不同炮制法的淫羊藿提取物对小鼠尾出血时间的影响（略）

　　与生理盐水组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=10

　　2.2  不同炮制法的淫羊藿提取物对小鼠凝血时间的影响

　　2.2.1  玻片法［4］ 实验分组与给药方法同断尾法，末次给药1 h后，将5号注射针头插入小鼠眼眶内使血液自行流出，用干棉球擦去第1滴血，再分别将血滴滴于清洁载玻片的两端，血滴直径5～10 mm，立即开始计时。此后每隔30 s，用干燥的针头挑动血液1次，至针头能挑起纤维蛋白丝为止，即为凝血时间，另1滴血供最后复试。6组数据采用SPSS 10.0 软件进行单因素方差分析处理，结果小鼠凝血时间与生理盐水组比较，阿司匹林、炙淫羊藿Ⅰ有非常显著性差异（P<0.01），淫羊藿、炙淫羊藿Ⅲ有显著性差异（P<0.05），而炙淫羊藿Ⅱ无显著性差异（P>0.05）。结果见表2。

　　2.2.2  毛细管法［5］实验分组与给药方法同断尾法，末次给药1 h后，用内径为1 mm，长15 cm的玻璃毛细管插入小鼠内眦球后静脉丛取血，血液注满后取出，平放于桌面，每隔30 s折断毛细管约0.5 cm，并缓慢向左右拉开，观察折断处是否有血凝丝。自血液流入毛细管内开始计时，至血凝丝出现为止，即为凝血时间。6组数据采用SPSS 10.0 软件进行单因素方差分析处理。结果小鼠凝血时间与生理盐水组比较，阿司匹林、淫羊藿、炙淫羊藿Ⅰ、炙淫羊藿Ⅲ有非常显著性差异（P<0.01），而炙淫羊藿Ⅱ无显著性差异（P>0.05）。结果见表2。

　　表2  不同炮制法的淫羊藿提取物对小鼠凝血时间的影响（略）

　　与生理盐水组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=10

　　3  讨论

　　凝血时间是指血液自离体至凝固所需要的时间，血液离体后，接触带阴电荷的表面如玻璃器材时，Ⅻ凝血因子被激活，其后一系列凝血因子相继活化，最后使纤维蛋白原转变为纤维蛋白而凝血。其时间的长短主要与各种凝血因子的含量和功能有关。出血时间是指穿破毛细血管，自出血到止血所需要的时间。其长短与毛细血管功能、组织收缩力、组织因子、血小板的数量和功能、纤溶等因素有关。其中影响最大的是血小板和毛细血管功能。淫羊藿、炙淫羊藿Ⅰ、Ⅲ提取物均有延长出血时间和凝血时间的作用，尤以炙淫羊藿Ⅰ作用最为明显（淫羊藿炒至吸尽油脂的提取物），而炙淫羊藿Ⅱ有延长出血时间的作用，但对凝血时间无影响。提示淫羊藿、炙淫羊藿Ⅰ、Ⅲ可抑制凝血因子、血小板和毛细血管功能，具有明显的抗凝作用，且以炙淫羊藿Ⅰ抗凝作用最为明显（淫羊藿炒至吸尽油脂的提取物)。其抗凝作用机理尚有待于进一步研究。

　　：

　　［1］  国家药典委员会.药典，Ⅰ部［S］.北京：化学出版社，2005：229.

　　［2］  王  访，张有权. 抗衰老中药的药理研究近况［J］.时珍国医国药，2002，13（4）：236.

　　［3］  李仪奎. 中药药理实验方法学［M］. 上海：上海技术出版社，1991：496.

　　［4］  高  尔，李华洲，康  白. 妇血宁促凝血机制的实验研究［J］. 中草药，1987，18（3）：24.

　　［5］  陈  真，蒋建勤，于忠晓. 四妙勇安提取物对血液凝固和血栓形成的影响［J］.中国药科大学学报，1999，30（6）：441.