参芪补血冲剂多糖含量的测定

          作者：辛春艳，秦向阳，何炜，李晓晔   

【关键词】  参芪补血冲剂；,,分光光度法；,,果糖

　　摘要：目的建立测定参芪补血冲剂多糖的含量的方法。方法于486 nm波长处用分光光度法测定参芪补血冲剂中果糖的含量。结果果糖在10～60 μg/ml之间与溶液吸光度值线性关系良好，r=0.999，果糖的平均加样回收率为102.2%，RSD为0.82%(n=5)。 结论 方法简便、快捷、可靠性高，准确性和重现性好，可用于复方制剂质量控制。

　　关键词：参芪补血冲剂；  分光光度法；  果糖

　　　Abstract：ObjectiveTo develop a method for determination of Polysaccharide in Shenqibuxue Granule.MethodsThe content of soluble Polysaccharide was determined by spectrophotometry at the wavelength of 486 nm.ResultsBetween fructose over the range of 10～70 μg/ml and the optical density,there existed a good linear relationship(r=0.999,n=6).The average recovery of the added sample was 102.5% and RSD was 0.82%(n=5).ConclusionThe proposed method  is convenient, economic, accurate and reproducible, and can be used for quantitative analysis of Polysaccharide in Shenqibuxue Granule.

　　Key words：Shenqibuxue Granule;  Spectrophotometry;  Fructose
   
　　参芪补血冲剂由熟地黄、黄芪、党参等中药组成，具有益气养血、滋阴健脾之功效；主治贫血、放射和化疗等引起的白细胞、血小板减少等血虚证。近年来，对于多糖在抗癌、提高免疫、抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、抗氧化作用、抗衰老、骨折愈合和抗贫血等方面都呈现出喜人的效果，国内外学者已作了大量研究工作［1］。参芪补血冲剂中的各味药材熟地黄［2］、黄芪［3］、党参［4］等的多糖类成分的免疫活性对造血功能的影响，国内的学者也做了大量的研究，结果表明多糖能使正常及化疗小鼠骨髓、脾及外周血中的造血干细胞有不同程度的增加［3］。因此，我们将果糖作为参芪补血冲剂的质量控制标准之一。对于多糖的含量较为经典的测量方法是苯酚-硫酸法［5］，但该方法用于测定复方制剂中多糖含量的报道较少。本实验用分光光度法测定参芪补血冲剂多糖的含量，以期为复方制剂质量控制的量化方法提供依据。

　　1  器材

　　BECKMAN DU640型分光光度计（美国），ZD85型恒温振荡器（国产），SK250 LH型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）。果糖对照品：药品生物制品检定所，批号100231200303；参芪补血冲剂由第四军医大学化学教研室研制；活性炭、硫酸、苯酚（AR）。

　　2  方法与结果

　　2.1  测定波长的选定以浓度为40 μg/ml的果糖标准品溶液显色后在200～800 nm范围内进行扫描，扫描结果表明，其最大波长位于486 nm处，因此本实验选用486 nm作为测定波长。

　　2.2  供试品溶液的制备取参芪补血冲剂粉末样品2.0 g,精密称定，置于100 ml圆底烧瓶中，加水50 ml，称定活性炭2.0 g，密塞，超声10 min，静置，过滤提取液，然后定容至100 ml容量瓶中，得到水溶性糖制备液。

　　2.3  线性关系的考察将果糖标准品于70℃下，减压恒重4 h，精密称取置于10 mg容量瓶中，加水至刻度，配成浓度为100 μg/ml标准品溶液。在7个100 ml的容量瓶中，用移液管分别移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml的果糖标准品溶液，然后用水定容至10 ml，摇匀。将上述溶液分别转移至100 ml干燥的圆底烧瓶中，加入50%的酚水溶液1 ml摇匀，再各加入30 ml浓硫酸，于恒温振荡器中在25℃条件下振荡20 min，静置10 min。用1 cm比色皿，以试剂为空白，于486 nm波长处测定吸光度。得回归方程 A=0.02+0.008 5C,r=0.999。

　　2.4  样品测定取制备得到的样品溶液1 ml置于100 ml容量瓶中，加水至刻度。然后取部分该样品用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液2 ml，按2.3项下方法操作，测定样品溶液的吸光度，样品中果糖的含量。结果见表1。

　　表1  参芪补血冲剂中果糖的含量测定（略）

　　2.5  精密度实验取质量浓度为100 μg/ml果糖标准品溶液2 ml，按2.3项下方法操作，连续6次测定溶液的吸光度，结果测得果糖标准品溶液吸光度RSD为0.2%，表明仪器有很好的精密度。

　　2.6  稳定性实验取上述制备的供试品溶液，室温放置，在0，2，4，6，8 h内各测定1次吸光度。结果表明，供试品溶液8 h内稳定，RSD为0.46%。

　　2.7  重现性实验取同一批参芪补血冲剂粉末样品6份，每份2.0 g，依2.2项下方法制备供试品溶液并测定，果糖平均质量分数为19.1 mg/g，RSD=1.1%。结果表明重现性良好。

　　2.8  加样回收实验移取参芪补血冲剂粉末样品制备液5份，每份2.0 ml，置10 ml量瓶中，然后再分别精密加入100 μg/ml的果糖标准品溶液2 ml，按2.3项下方法操作，测定吸光度，计算回收率。果糖的平均回收率为102.2%，RSD=0.82%。结果见表2。

　　表2  加样回收实验（略）

　　3  讨论

　　3.1  本实验的测定原理果糖在浓硫酸作用下，脱水生成羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100 mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在486 nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

　　3.2  蛋白质存在对实验的影响本文在实验过程中曾参照［5］方法进行了除蛋白质实验和不除蛋白质实验的比较，发现显色反应基本不受蛋白质存在影响，并且产生的颜色稳定8 h以上。因此，本方法简单，灵敏度高，可以作为参芪补血冲剂的质控指标之一。

　　文献：

　　［1］  韦  巍，李雪华.多糖的研究进展［J］.国外医学・药学分册，2005，32（3）：179.

　　［2］  黄  霞，刘  杰，刘惠霞.熟地黄多糖对血虚模型小鼠的影响［J］.中药杂志，2004，29（12）：1168.

　　［3］  翁  玲，刘学英，刘  彦，等.黄芪多糖对小鼠骨髓及外周血造血干细胞的增殖及动员作用［J］.基础医学与临床，2003，23（3）：306.

　　［4］  张晓君，祝  晨，胡  黎，等.党参多糖对小鼠免疫和造血功能的影响［J］.中药新药与临床药理，2003，14（3）：174.

　　［5］  邱细敏，卢岳华，沈  品，等.不同产地白术多糖含量测定［J］.药物鉴定，2005，14（4）：40.