丹皮活性成分综合提取工艺的研究
【摘要】 目的：综合提取制备丹皮内丹皮多糖、丹皮酚、丹皮总苷三种活性成分。方法：丹皮破碎后，水提醇沉，冻干后得丹皮多糖。剩余药渣用水蒸汽蒸馏法提取丹皮酚。蒸馏所剩残渣有机溶剂法提取丹皮总苷。结果：依次提取出三种活性物质，其中丹皮多糖得率1.27%，丹皮酚得率为1.76%，丹皮总苷得率为3.92%。结论：该提取方法切实可行，丹皮内各活性物质均得到较完全分离，为大化生产提供了理论依据。
【关键词】 综合提取 丹皮多糖 丹皮酚 丹皮总苷
Study on multible-extracting techology of cortex moudan
【Abstract】Objective: To study on the multible-extracting technology of Cortex moutan.Methods:Polysaccharide could be extracted by water.The other ethanol component could be extracted after it has dried.The paeonol can distilled by steam distillation method,the remains can excract the third component.Results:The content of polysaccharides was 1.27%,the paeonol was 1.73% and the total glucoside is 3.84%.Conclusion:The technology of multible-extracting is available for the industrialization.Every component can be distilled by this method.
【Key words】multible-extracting techology;polysaccharide;paeonol;total glucoside of cortex moutan
牡丹皮（Cortex Moutan）为毛茛科植物Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮[1]。广泛应用于医药、香料和化学领域。丹皮中主要活性成分包括丹皮多糖、丹皮酚、丹皮苷、芍药苷元、白桦脂酸、白桦脂醇等。其中丹皮苷、芍药苷元、白桦脂酸、白桦脂醇合称为丹皮总苷。研究表明，丹皮多糖具有降血糖和免疫作用[2]。丹皮酚具有抗菌、抗变态和抗肿瘤作用[3]。丹皮总苷具有抗炎、免疫调节作用[4]。
丹皮作为我国一种传统中药，常年来未得到较完全的利用。大部分丹皮产品只进行其中丹皮酚的提取就废弃了。随着对丹皮研究的日益广泛，丹皮内其他活性成分的提取也越来越受到重视。所以充分提取丹皮内各种活性物质显得非常必要。本实验根据丹皮内三种活性物质不同的理化性质，依次分级分离三种活性物质，达到一次性提取丹皮内三种活性物质的目的。节约资源，提高产品利用率。
1 材料与仪器
安徽青阳三年生牡丹皮，9月份采集，离心机（上海医用分析仪器厂）、电热鼓风干燥箱（南京实验仪器厂）、SHZ-3循环水多用真空泵（上海青浦沪西仪器厂）、旋转蒸发仪（上海青浦沪西仪器厂）、DK-S26型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）、ALPHA1-2冷冻干燥机（德国Christ），HPLC（美国Agilent 1100）。Dextran T40(Phamacia 公司)，95%乙醇、浓硫酸、苯酚等均为国产分析纯。丹皮酚标准品（购自药品鉴定所，产品批号：11070-200205）。芍药苷标准品（购自中国药品鉴定所，产品批号：1107036-200731）。
2 实验方法
2.1 提取方法
丹皮粉碎
图1 综合提取实验流程图
丹皮经粉碎机粉碎后，取丹皮粉末分别放入重蒸水中浸泡。然后收集浸泡液加入乙醇，醇沉过夜，于次日离心析出沉淀。加少量水溶解后冰箱冷藏12h。冷冻干燥得丹皮多糖粗品，苯酚硫酸法检测糖含量。
丹皮残渣→蒸馏水浸泡→水浴锅调节温度→水蒸汽蒸馏→冷藏蒸馏液过夜→过滤→10%乙醇重结晶→干燥得丹皮酚结晶，HPLC法检测丹皮酚含量。
蒸馏剩余残渣→索氏抽提，石油醚脱脂→加入乙醇-水溶液温浸→离心取上清→旋转蒸发→冷冻干燥→甲醇溶解，HPLC法测总苷含量。
2.2 样品含量测定
2.2.1 苯酚硫酸法检测多糖含量[5]，丹皮多糖得率=
丹皮多糖总量/原料质量×100%。
2.2.2 HPLC法检测丹皮酚含量[1]，丹皮酚得率=丹皮酚总量/原料质量×100%。
2.2.3 HPLC法检测丹皮总苷含量[6]，丹皮总苷得率=丹皮总苷总量/原料质量×100%。
3 结果与分析
3.1 丹皮多糖的提取工艺 根据单因素初步试验，影响丹皮多糖提取率的主要因素有浸提时间、浸提温度、料水比、醇沉浓度，为综合分析各因素的影响，以多糖提取率为指标，采用L9（34）正交实验设计，确定最佳提取工艺。正交实验设计方案及结果见表1。表1 丹皮多糖正交实验设计方案及结果从上表可以看出影响丹皮多糖得率的各因素排序为浸提温度＞浸提时间＞醇沉浓度＞料液比。综合各因素K值和极差分析，得出丹皮多糖的最佳提取工艺为：温度45℃，提取时间11h，料液比1:9，醇沉浓度80%，此工艺条件下丹皮多糖的得率为1.27%。
3.2 丹皮酚提取工艺 在单因素实验的基础上，选择影响丹皮酚溶出的4个主要因素：料液比、浸泡时间、浸泡温度和溶液PH，以丹皮酚得率为指标采用L16（45）正交试验设计，确定最佳提取工艺。正交实验设计方案及结果见表2。表2 丹皮酚正交实验设计方案及结果对上述正交实验结果进行分析，浸泡温度为丹皮酚得率的主要影响因素。综合各因素K值和极差分析，丹皮酚的最佳提取工艺为料水比为1:11，浸泡温度40℃。浸泡时间3h，溶液PH6。此工艺条件下丹皮酚的得率为1.76%。
3.3 丹皮总苷提取工艺
根据单因素初步试验，影响丹皮总苷提取率的主要因素有浸提时间、浸提温度、料水比、乙醇浓度，为综合分析各因素的影响，以总苷提取率为指标，采用L9（34）正交实验设计，确定最佳提取工艺。正交实验设计方案及结果见表3。 表3丹皮酚正交实验设计方案及结果通过以上数据综合得出，影响丹皮总苷得率的各因素排序为浸提温度＞浸提时间＞料液比＞乙醇浓度。综合各因素K值和极差分析，得出丹皮总苷的最佳提取工艺为：温度70℃，提取时间6h，料液比1:10，醇沉浓度90%。此工艺条件下丹皮总苷的得率为3.92%。
4 结论
首先进行丹皮多糖的提取，在温度45℃，提取时间11h，料液比1:9，醇沉浓度80%条件下，多糖得率为1.27 %。浸提药渣烘干后，在溶液PH6，料水比1:11，温度40℃，浸泡时间3h条件下进行水蒸汽蒸馏提取丹皮酚，得率为1.76%。蒸馏后所剩余药渣用乙醇提取法提取丹皮中剩余的总苷类物质，在1:10料水比，温度70℃，浸泡6h，90%乙醇条件下，总得率为3.92%。
经此工艺连续提取出的各活性物质，多糖得率与报道[7]相近，丹皮酚含量与文献报道[8]相接近。总苷类含量略低于文献报道[6]。可能原因是在第一部分水提多糖时，有部分小分子苷类物质溶入水中，致使后期总苷类物质有小部分的损失。
笔者采用连续提取工艺，实现了丹皮内各活性物质的连续分离。本工艺的特点就是根据丹皮内各活性物质不同的理化性质，分步分离出三种主要活性成分，既节省了时间，又实现了单一原料多产物的问题，大大提高了原料的利用率。
【文献】
[1] 国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[S]．北京：化学出版社，2005：119．
[2] 刘丽萍，洪浩．丹皮多糖-2b降血糖作用的实验研究[J]．临床药与学，2002，7（5）：424～427．
[3] 章灵华，尚陪根，黄艺，等．丹皮酚的药理与临床研究进展[J]．中国中西药结合杂志，1996，16（3）：187～189．
[4] 汤文路，李俊，徐叔云，等．丹皮总苷的抗炎免疫作用及部分机制研究[J]．中国药理学通报，2002，18（6）：656～660．
[5] 张惟杰．糖复合物生化研究技术[M]．浙江大学出版社，1994：11．
[6] 刘成红，程斌，曹红，等．大孔树脂吸附法精制丹皮总苷的研究[J]．中国新药杂志，2006，15（21）：807～808．
[7] 李湘玲．丹皮的综合提取工艺探讨[J]．中药研究与实践，2005，19（4）：58～59．
[8] 康业斌，商鸿生，成玉梅，等．水蒸汽蒸馏法提取丹皮酚工艺的研究[J]．西北农林科技大学学报，2006，34（11）：132～135．
