胃癌组织中Survivin，Bcl?2，Bax蛋白的表达及意义

【摘要】  目的： 探讨Survivin，Bcl?2，Bax蛋白在胃癌中表达与临床病理的关系. 方法: 应用免疫组化方法观察Survivin，Bcl?2，Bax蛋白在胃癌(年龄30～82岁，男68例，女32例)中的表达. 结果: Survivin表达阳性率为47.0%；Bcl?2表达阳性率为57.0%；Bax表达阳性率为33.0%. 分化较好组的Survivin蛋白表达阳性率低于分化较差组，有显著性差异(30.0% vs 54.3%，P＜0.05). 分化较差组的Bcl?2阳性表达率(64.3%)明显高于分化较好组（40.0%），有显著性差异(P＜0.05). 分化较好组中Bax蛋白阳性率高于分化较差组，有显著性差异(56.1% vs 22.9%，P＜0.05). Survivin，Bcl?2表达率在淋巴结转移组高于无转移组，Bax表达率正相反. 结论: Survivin，Bcl?2和Bax在胃癌的发生、中起着不同程度的作用，它们的检测对胃癌恶性程度的判定、预后分析和进一步提供有效的依据.

【关键词】  survivin 基因 bcl?2 bax 免疫组织化学 胃肿瘤

　　0引言

　　胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展不仅有细胞的过度增殖，同时还存在细胞凋亡异常. Gobe等［1］ 研究认为，有多种癌基因参与细胞凋亡的调控，其中Bcl?2和Bax均与细胞凋亡密切相关. Survivin是新近发现的具有独特结构的凋亡抑制蛋白基因家族成员. 我们采用免疫组织化学方法检测了胃癌组织中Survivin，Bcl?2，Bax的表达关系，探讨其在胃癌发生发展中的作用.

　　1材料和方法

　　1.1材料2005?02/2007?05行胃癌根治术的患者100(男68，女32)例，年龄30～82（平均56.3）岁. 按组织学类型和分化程度分为两组，乳头状腺癌和管状腺癌列为分化较好组（30例）；低分化腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌和未分化癌列为分化较差组（70例）. 所有患者在施行根治术之前未接受任何放疗、化疗或其他针对胃癌的治疗. Survivin，Bcl?2，Bax鼠抗人mAb购自NeoMarkers公司，EnVision试剂盒购自Dako公司. SP试剂盒为北京中山生物技术公司产品.

　　1.2方法采用免疫组织化学（免疫组化）S?P法进行检测. 切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；3 mL/L H2O2封闭30 min阻断内源酶；100 mL/L正常羊血清封闭10 min；滴加Survivin，Bcl?2，Bax鼠抗人mAb，37℃孵育30 min；滴加生物素标记的二抗，37℃孵育10 min；DAB显色，苏木素衬染，脱水透明，封片. 用已知阳性切片作阳性对照，用PBS替代一抗作阴性对照. 光学显微镜下观察组织切片的显色反应，选择5个以上高倍视野，不少于1000个细胞，根据染色程度及染色细胞百分率进行分析评定［2］. 基本不着色为0分；着色淡为1分；着色较深为2分. 着色细胞占计数细胞百分率：≤5%为0分；6%～25%为1分；26%～50%为2分；≥51%为3分. 将每张切片染色程度与染色细胞百分率得分相乘的积为最后得分. 0～1分为阴性（-）；2～3分为弱阳性（+）；4～6分为中等阳性（?）；＞6分为强阳性（?）.

　　统计学处理：在Windows XP下使用SPSS13.0对统计资料进行统计学处理，统计阳性标本例数，阳性率，用χ2检验进行统计学分析.

　　2结果

　　2.1Survivin，Bcl?2，Bax蛋白在胃癌组织中的表达在100例胃癌组织中，Survivin在47例标本中表达阳性，阳性率为47.0%，同一胃癌组织中Survivin阳性表达主要在细胞质中为棕黄色细颗粒，显色强度也基本一致；Bcl?2在57例有阳性表达，阳性率为57.0%，胃癌及癌前病变中Bcl?2蛋白的表达阳性反应物质呈棕黄色，主要位于胞质中，个别病例在胞核中亦有表达；Bax在33例有程度不同的表达，阳性率为33.0%，Bax阳性反应物质呈棕黄色，主要位于胃癌细胞胞质中，个别病例在胞核中亦有表达（图1）.

　　2.2Survivin，Bcl?2，Bax蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系在30例分化较好组中，Survivin蛋白表达阳性例数为9例（30.0%）；而在70例分化较差组中，Survivin蛋白表达阳性例数为38例（54.3%）. 分化较好组的Survivin蛋白表达阳性率低于分化较差组，有显著性差异(P＜0.05). 分化较好组的Bcl?2阳性表达率(40.0%)明显低于分化较差组的Bcl?2阳性表达率(64.3%，P＜0.05). Bcl?2蛋白在淋巴结转移病例中阳性表达率为46.4%，在淋巴结未转移病例中阳性表达率为62.5%，淋巴结转移病例中Bcl?2阳性表达率高于无淋巴结转移，差异有显著性(P＜0.05)，Bcl?2蛋白表达特征与患者年龄、性别、肿瘤浸润深度等均无明显相关性(P＞0.05).30例分化较好组中，Bax蛋白表达阳性率为56.7%，70例分化较差组中Bax蛋白表达阳性率为22.9%，分化较好组中Bax蛋白阳性率高于分化较差组，有显著性差异(P＜0.05). 在淋巴结转移的病例中，无淋巴结转移病例的Bax蛋白表达阳性率高于有转移病例，均有显著性差异(P＜0.05，表1). 表1Survivin，Bcl?2，Bax蛋白表达与胃癌临床病理特征之间的关系［n（略）］

　　3讨论

　　胃癌的发生、是多因素、多阶段、多基因变异的病理过程，Survivin在胃癌的发生、发展中起着不同程度的作用. 张建娜等［3］研究发现，在低、未分化胃癌中Survivin表达率显著高于中、高分化胃癌；肌层或浆膜层受侵的胃癌Survivin表达率显著高于黏膜和黏膜下层受侵者；淋巴结有转移者Survivin表达率显著高于淋巴结无转移者. 我们的研究结果显示胃癌组织中的分化差的Survivin阳性表达率高于分化好的，淋巴结有转移者Survivin表达率高于淋巴结无转移者，与其研究结果相一致. 因此，对胃癌患者在前应用免疫组化方法检测Survivin表达可能有助于确定合适的治疗方案，正确估计预后，提高治愈率. bcl?2，bax是重要细胞凋亡调控基因，这些基因产物的异常表达可促使细胞恶性增殖并阻止细胞凋亡. 刘海峰等［4］研究认为Bcl?2在低分化胃癌中的表达明显高于高、中分化胃癌. 我们发现，在胃癌组织中分化较差组的Bcl?2阳性表达率明显高于分化较好组的Bcl?2阳性表达率，与其相似. 检测Bcl?2的检测对胃癌的治疗及预后判断有一定的帮助.

　　bax基因属bcl?2相关基因，具有对抗Bcl?2蛋白抑制凋亡的作用. 姚国栋等［5］研究发现在正常胃粘膜、胃癌前病变及胃癌中bax基因在mRNA和蛋白水平有不同程度的表达，在高分化癌表达率显著高于低分化癌，有淋巴结转移组表达率低于无淋巴结转移组，但与胃癌的浸润程度无明显相关性. 我们的研究显示分化较好组中Bax蛋白阳性率高于分化较差组(P＜0.05)，有淋巴结转移病例的Bax蛋白表达阳性率明显低于无转移病例(P＜0.05)，这说明Bax蛋白表达与胃癌临床病理特征和生物学行为有密切关系. 经研究显示Bax和Bcl?2在胃癌组织中呈反向表达，说明胃癌发生发展过程中两者存在相互抑制倾向［6］. 从细胞凋亡的机制出发，通过诱导细胞凋亡来治疗恶性肿瘤，可减少或消除化疗药物所带来的副作用，是目前研究的热点.

【】
  　　［1］Gobe G，Rubin M，Williams G，et al. Apoptosis and expression of Bcl?2，Bcl?XL，and Bax in renal cell carcinomas［J］. Cancer Invsese，2002，20:324-332.

　　［2］张声，李莉，林华等. 胃癌淋巴结转移相关因素的多元分析［J］. 中华肿瘤杂志，2001，23(5):399-402.

　　［3］张建娜，刘倩，王丽华. Survivin在胃癌中的表达及临床意义［J］. 山东医药，2004，44（10）：29-30.

　　［4］刘海峰，刘为文，房殿春，等. Bcl?2蛋白在胃癌组织中的表达和意义［J］. 肿瘤防治研究，1997，24(5):271.

　　［5］姚国栋等. Bcl?2、Bax基因与胃癌［J］. 肿瘤，2003，12(11):656-658.