青蒿水提物对兔VX2肺癌的体内效果

【摘要】  目的： 观察青蒿水提物对兔VX2肺癌的抗肿瘤效果. 方法： 将48只新西兰大白兔进行VX2肺癌造模后，随机分为6组，每组8只，即空白对照组、乙醇组、5?FU组、双氢青蒿素组、低剂量组和高剂量组. 分别对各组进行不处理、耳缘静脉注射1 mg/kg 的乙醇、25 mg/kg的5?FU，1 mg/kg双氢青蒿素、1 mg/kg和10 mg/kg的青蒿水提物，观察各实验组之间的一般情况表现、生命延长度、肿瘤抑制率和组织学表现. 结果： 实验组生命周期延长（vs对照组，P<0.05），肿瘤抑瘤率提高（vs对照组，P<0.05）. 一般情况和病表现符合恶性肿瘤VX2肺癌的特点. 结论： 青蒿水提物对VX2肺癌具有一定的抗肿瘤作用.

【关键词】  青蒿素类 分离和提纯 VX2 肺肿瘤

   0引言

    中药青蒿为菊科一年生草本植物，又名苦蒿、黄花蒿(Artemisia annua L.)，其内含有多种药物成分，比如青蒿琥酯（artemisunate），双氢青蒿素（dihydroartemisinin），蒿甲醚（artemether），蒿乙醚（arteether），青蒿酸（artemisinic acid）等. 它们不仅具有很好的抗疟作用且不产生耐药性，近年发现，青蒿素及其衍生物还有明显的抗肿瘤作用. 青蒿水提物是从青蒿叶中提取的一种新型青蒿素类衍生物，现对其抗肿瘤作用进行体内实验研究，为临床的应用提供一定的.

    1材料和方法

    1.1材料青蒿水提物，是由重庆医科大学基础研究所提供. 新西兰大白兔购于重庆医科大学动物中心，在重庆医科大学超声研究所进行VX2肺癌模型的建立［1］.

    1.2方法将VX2肺癌模型兔随机分为6组，每组8只，即空白对照组，不施加任何处理；乙醇组，耳缘静脉注射1 mg/kg乙醇；5?FU组，注射25 mg/kg 5?FU；双氢青蒿素组，注射1 mg/kg双氢青蒿素；低剂量组和高剂量组分别注射1 mg/kg和10 mg/kg青蒿水提物. 所有实验组于造模术后第3日开始从耳缘静脉注射药物，连续注射20 d，观察实验兔的生存情况，待实验兔死亡后对其解剖，称肺部原位肿瘤质量，记录生存时间，取其肺、心、肝、肾、淋巴结、睾丸、卵巢和脑组织常规固定保存. 各实验组动物给药后定期观察实验兔行为、饮食和排便等表现. 同时定期测量各组实验兔的体质量，动态观察其变化. 记录各组实验兔的存活天数并按公式各组兔生命延长度. 生命延长度=［(肿瘤组平均存活天数-对照组平均存活天数)/对照组平均存活天数］×100％. 称各组自然死亡兔的原位肿瘤质量（尽量去除血污、脂肪等非瘤组织），计算各组平均瘤质量及抑瘤率（IR）. IR=［(肿瘤对照组平均瘤质量-给药组平均瘤质量)/对照组平均瘤质量］×100％. 大体解剖观察各实验组VX2肿瘤的转移情况. 动物死亡后分别取各实验组的肺部原位肿瘤组织进行常规HE切片，光镜观察病理学表现. 同时进行免疫组化的VX2肺鳞癌鉴定.

    统计学处理：运用SPSS13.0统计软件，对计量资料组间均数比较进行方差分析及LSD?t检验，P<0.05为差异有统计学意义.

    2结果

    2.1一般情况各组实验兔初期由于手术创伤导致精神、饮食和行为等表现稍差，但2 d后精神状态即好转，双眼有神，呼吸，活动敏捷，被毛亮而有光泽，饮水、饮食和大小便正常，个别兔偶尔发现有拉稀现象须及时注射青霉素，次日即好. 实验兔在死亡前几天体质量均明显下降，精神状态差，活动减少，食欲大大降低，呼吸逐渐出现异常改变，死亡前1 d出现明显的喘式呼吸、鼻翼煽动、唇鼻紫绀和呼吸困难等症状，但鼻部未见分泌物. 其中5?FU组、双氢青蒿素组、低剂量组和高剂量组平均生存期长于对照组，原位肿瘤比对照组质量减轻(表1). 实验兔平均体质量基本呈先升后降的趋势即早中期因适应而体质量逐渐增加，到肺癌晚期因恶病质而体质量逐渐下降，甚至非常消瘦，符合恶性肿瘤的表现特点(图1).表1各组实验兔主要指标变化

    2.2生命延长度与空白组比较，乙醇组、5?FU组、双氢青蒿素组、低剂量组和高剂量组的生命延长度分别为3.6％,31.8％,43.5％,37.4％和58.9％(表1)，以高剂量组效果较好. 说明青蒿水提物在较高剂量时能够有效提高实验兔的平均存活时间，并随剂量的增加提高实验兔的生命延长度.

    2.3肿瘤抑制率与空白组比较，乙醇组、5?FU组、双氢青蒿素组、低剂量组和高剂量组的肿瘤抑瘤率分别为5.7％，15.5％，18.9％，21.5％和34.5％(表1)，以高剂量组最佳. 说明青蒿水提物对VX2肺癌的抗肿瘤作用随剂量的增大而增强.

    2.4肿瘤转移情况大体解剖发现，空白组和乙醇组的VX2肿瘤转移比较广泛，在胸壁、肝脏、肾脏、心包膜等处均见明显的转移瘤；而其余4组则转移较少，除胸壁和部分肝脏见转移瘤外，其余脏器未见明显的VX2转移瘤. 说明用药组具有不同程度抑制肿瘤增殖和转移的作用.

    2.5组织学观察各组瘤组织，包括空白组、乙醇组、5?FU组、双氢青蒿素组、低剂量组和高剂量组，均见VX2瘤细胞呈浸润性生长，异型性明显，大小不等，形状不一，组织结构紊乱，细胞核大而着色深，符合VX2肿瘤细胞形态［6］. 空白组的瘤细胞生长旺盛，堆积状增生，聚集成团(图2A). 双氢青蒿素组瘤细胞明显减少，组织结构异常紊乱，局部呈空泡状(图2B). 低剂量组瘤细胞亦为堆积状，但与对照组比已经明显减少，并出现少量空泡状(图2C). 高剂量组肿瘤细胞明显减少，空泡状结构比较明显(图2D)，说明青蒿水提物对VX2肿瘤细胞表现出更好的抗肿瘤作用. 免疫组织化学观察到肺组织细胞质中抗细胞角蛋白（CK）免疫组织化学染色阳性（图3）.

    3讨论

    在天然药物中筛选抗肿瘤药物已成为当前抗癌研究的热点与重点. 近几年的研究使青蒿素类药物的抗肿瘤作用越来越受到人们的关注，青蒿水提物是采用传统方法从优质青蒿中分离提取的一种新型高水溶性青蒿素衍生物，实验研究证实其不仅可以选择性的抑制和杀死多种肿瘤细胞，而且极少有临床常用化疗药物对正常细胞的毒副作用，甚至不产生耐药性［2］. 同时它比青蒿素、双氢青蒿素等青蒿素衍生物（醇溶性）更容易被机体吸收，有更强的抗肿瘤活性，因此其有很好的开发前景. 本实验显示，青蒿水提物组的原位瘤质量与其他各组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，生存天数与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.05)，但在实验观察期间，各实验组体质量、呼吸、活动、大小便等方面相比较，未发现有意义的变化. 本实验研究显示,乙醇组也表现出较小的抗肺部肿瘤作用,这与［3-4］报道是一致的. 但乙醇组的抑瘤率(5.7%)和生命延长度(3.6%)比较低，可能是无水乙醇有限的细胞毒作用，使肿瘤组织细胞脱水、蛋白质变性和血栓形成，导致肿瘤组织发生凝固性坏死，从而产生抑制肿瘤的作用. 本实验中设置乙醇组的目的和意义是因为采用了乙醇溶解双氢青蒿素后再注入兔体内，为了鉴别是双氢青蒿素还是乙醇有抗肿瘤作用，或者是二者产生协同的抗肿瘤作用而设立的.

    本实验研究中，阳性对照组5?FU组和双氢青蒿素组的肿瘤抑瘤率分别为15.5％，18.9％；生命延长度分别为31.8％，43.5％，二者均显示出较好的抗肿瘤作用. 其中5?FU是临床上常用的抗肿瘤药物，双氢青蒿素是近几年才研究证实的具有抗肿瘤作用的药物［5］，分析其抗肿瘤的主要作用机制可能为诱导细胞凋亡，主要包括两条通路：线粒体通路和细胞表面死亡受体通路，而前者是抗肿瘤药物诱导细胞凋亡的一种核心通路［6］. 病研究显示，对照组肿瘤细胞呈实体条索样［7］，弥漫性浸润，成堆积状，结构异常紊乱. 而实验组显示能够有效抑制肿瘤细胞的生长浸润，使瘤细胞减少，尤其是双氢青蒿素组、低剂量组和高剂量组，抗肿瘤作用比较明显，说明该药对VX2肺癌的确具有一定的抗肿瘤作用.

    青蒿水提物抗肿瘤的作用可能是通过以下几个途径实现的：① 直接作用于细胞膜系统或氧化细胞膜的不饱和脂肪酸，引起质膜过氧化的细胞毒作用［8］; ② 青蒿素化学结构中含有具有抗癌活性的α?次甲基内酯环结构的萜类化合物，该化合物作用于转铁蛋白影响细胞铁代谢从而抑制其DNA合成来产生抗肿瘤作用；其促进肿瘤细胞调亡的作用只占20％，这与一般的双氢青蒿素、青蒿琥酯等其他青蒿素衍生物的抗肿瘤机制不完全相同，尤其是对肺癌细胞具有抑制增殖作用，并随药物剂量的增大和作用时间的延长对肿瘤细胞的抑制作用更加明显. 虽然青蒿水提物的抗肿瘤作用得以实验证实，但青蒿类药物之间具体抗肿瘤的作用机制可能有所不同，还有待进一步的实验证实.

【文献】
  ［1］ 苏畅，张惠中，李文海,等. 兔VX2肿瘤的离体培养及有关生物学特性［J］. 第四军医大学学报，2006，27（9）：844-847.

［2］ 周生伟，王莎莉，王亚平. 青蒿酸对人红白血病K562细胞增殖抑制的体外研究［J］. 重庆医科大学学报，2006，31（2）：159-162.

［3］ 张峰，田建明，康德强,等. 不同浓度乙醇消融VX2兔移植性肝肿瘤的实验研究［J］. 介入放射学杂志,2005，14(6):629-633.

［4］ 刘新发,胡建军,郭立芳,等. 经纤维支气管镜无水乙醇瘤体内注射晚期肺癌［J］. 河北医药,2006，28(10):924-925.

［5］ Lee J, Zhou HJ, Wu XH. Dihydroartemisinin downregulats vascular endothelial growth factor expression and induces apoptosis in chronie myeloid leukemia K562 cells［J］. Cancer Chemother Phamacol,2006,57(2)：213-220.

［6］ 谢红,陈立军,姚丽,等. 双氢青蒿素诱导人肿瘤细胞凋亡及其分子机制的研究［J］. 药房,2007,18(24):1850-1852.

［7］ 刘险峰,任乐荣,苏广彦,等. 兔VX2肿瘤细胞系的建立及其生物学特性的观察［J］. 中华病理学杂志,2005,34(10):661-663.

［8］ 金晓红，朱宁岳，王永刚. 青蒿素类药物抗肿瘤作用的研究［J］. 医药导报，2004，23（6）：388-389