辛芷鼻敏胶囊对变应性鼻炎大鼠脾脏组织中IL
关键词：辛芷鼻敏胶囊 ；变应性鼻炎；EOS；IL5
AR为临床常见多发病，属IgE介导、EOS浸润为主的呼吸道I型变态反应性疾病。是体外环境作用于机体导致异常免疫反应、造成Th1和Th2免疫反应失衡而引发的以鼻腔黏膜Th2免疫反应为主的变应性炎症。随着化程度的及生态环境的恶化，AR的患病率在全球有增长的趋势，目前在西方国家成人中的患病率一般为10 %～20 %[1]，甚至高达40 %[2]，我国每年约有2000万人患病 [3]。因此，能否有效治疗AR受到广泛的关注。西药虽然能有效地控制AR的症状，但根治困难，经常复发，且有严重的毒副作用。中药复方制剂因治疗AR疗效肯定而持久，且不良反应低，正日益受到人们的重视。辛芷鼻敏胶囊是新疆医科大学研制开发的治疗AR的中药新药，临床实践证明具有疗效快、毒副作用小等优势。本实验通过观察IL5、EOS计数的变化，探讨辛芷鼻敏胶囊的药效机制，为临床应用提供实验依据。
1 材料
1.1 实验动物
健康Wistar大鼠40只，质量230±10.12 g，雌雄各半，由新疆医科大学动物实验中心提供。
1.2 药品和试剂
辛芷鼻敏胶囊由新疆医科大学中医学院实验中心提供；鼻炎康片由佛山德众药业有限公司生产（国药准字Z20023063，生产批号：04109）；卵清蛋白（OVA,Sigma公司产品，美国）；IL5 ELISA试剂盒（上海沃森医学生物有限公司提供）。
2 实验方法
2.1 动物分组
将40只大鼠随机分为4组，即正常对照组、模型对照组、阳性对照组、实验药物组，每组10只，雌雄各半,分笼饲养。
2.2 造模方法
采用卵清蛋白致敏的方法造模[4]，用30 mg卵清蛋白作抗原，氢氧化铝粉末3 g作佐剂，加生理盐水100 mL制成混悬液，除正常对照组外，其余3组每只1 mL腹腔注射，隔日1次，共7次，为基础致敏。之后再用2 %卵清蛋白生理盐水攻击双侧鼻腔，每侧0.05 mL，每日1次，共7次。空白对照组用等体积的生理盐水代替，方法同上。每次攻击后,观察包括喷嚏、搔抓、流涕等现象，均观察30 min,记录大鼠行为学得分[5]，评分标准见表1。每鼠超过5分且鼻分泌物涂片见大量EOS为造模成功[6]。
表1 评分标准（略）
2.3 给药方法
实验药物组灌服辛芷鼻敏胶囊混悬液，按生药2.3 g/(kg・d)给药，以0.23 g/mL的浓度灌胃，1次/d；阳性对照组灌服鼻炎康片混悬液，按生药1.80 g/(kg・d)给药，以0.18 g/mL的浓度灌胃；正常对照组、模型对照组灌服等体积蒸馏水。从造模完成后第2 d开始连续给药7 d。
2.4 标本采集
2.4.1 鼻分泌物涂片检查
微型小棉棒伸入大鼠鼻腔轻擦鼻甲表面3次，制作涂片，均匀涂抹在载玻片上，行Wright染色，10 min流水洗脱，悬挂晾干，在光镜下寻找EOS，见大量EOS为造模成功。所有动物实验前和造模完成后各计数1次。
2.4.2 脾脏组织及鼻黏膜
所有动物均以戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射后，腹主动脉放血处死，取脾脏组织，低温下（0～4 ℃）制备10 %匀浆，3000 r/min离心10 min，取上清液，置于-70 ℃冰箱备用。分离鼻骨前皮肤，咬除鼻骨，游离取出双侧鼻腔呼吸区黏膜，4 ℃ 0.1MPBS中洗去血液和黏液，-20 ℃冰箱备用。
2.5 指标测定
2.5.1 鼻黏膜EOS计数
常规切片4 μm，HE染色。选取5个高倍视野（×1000）计数EOS，其平均值作为该切片的代表值。
2.5.2 IL5的测定
采用ELISA法检测脾脏组织匀浆中IL5的含量，具体步骤按说明书进行。
2.6 统计学方法
计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用方差分析，使用SPSS 11.0统计软件处理。
3 结果
3.1 行为学评分结果
除正常对照组外，其余各组第一次鼻腔攻击后都出现变应性鼻炎症状，如频繁搔抓、连续喷嚏、大量鼻涕等。每鼠按评分标准评分，均超过5分，说明造模成功。
3.2 鼻黏膜EOS计数和脾脏组织中IL5含量比较 见表2。
表2 四组大鼠鼻黏膜EOS计数、脾脏组织中IL5含量比较（略）
注：与正常对照组比较*P＜0.01；与模型对照组比较ΔP＜0.01；与阳性对照组比较ОP＜0.05
实验结果显示：模型对照组大鼠鼻黏膜EOS计数及脾脏组织中IL5含量较正常对照组明显升高（P＜0.01)；经用药，阳性对照组和实验药物组鼻黏膜EOS计数及脾脏组织中IL5含量均明显低于模型对照组（P＜0.01）；且实验药物组鼻黏膜EOS计数及脾脏组织中IL5含量低于阳性对照组（P＜0.05)。
4 讨论
变应性鼻炎是特异性个体接触致敏原后由lgE介导的以炎性介质释放为开端的有免疫活性细胞和促炎细胞以及细胞因子等参与的鼻黏膜慢性炎症反应性疾病。
本病属中医“鼻鼽”的范畴，其外因为风寒邪气入侵，内因为素体虚寒、肺虚不固及脾肾阳虚，病位在肺之鼻窍，病本在肺、脾、肾三脏，其证虚寒居多。病机为肺、脾、肾三脏气虚，卫表不固，腠理疏松，风寒外邪乘虚而入，犯及鼻窍，邪正相搏，肺气不得宣通，津液停聚，清窍壅塞,遂致喷嚏、流清涕等。
辛芷鼻敏胶囊处方源于南宋严用和《严氏济方》中的“苍耳散”。由白芷、辛夷花、苍耳子等八味中药组成，方中白芷祛风散寒、宣肺通窍为君药；辛夷、苍耳子、鹅不食草散风寒、通鼻窍，葱白散寒解表通阳，共为臣药；黄芪益气健脾，百部润肺止咳，五味子敛肺固津，一枝蒿祛风解毒活血，共为佐药。医学研究证明，白芷有解热、镇痛与抗炎等作用；黄芪具有增强免疫力和抗病毒作用；苍耳子对免疫功能有调节作用，使辅助型T细胞（Th）和抑制型T细胞（Ts）数减少，并使Th/Ts比值降低。此外 ,苍耳子尚能降低白细胞介素-2 (IL2)活性和IL2受体含量 ,能明显降低细胞内组胺的释放 ,此为苍耳子用来治疗过敏性疾病的机制之一。辛夷具有局部收敛作用，治疗鼻部炎症时能产生收敛作用而保护黏膜表面,使微血管扩张，局部血液循环改善，促进分泌物的吸收，以致炎症减退,鼻道畅通，从而缓解或消除症状。
IL5主要由活化的CD4T细胞和活化的肥大细胞产生，又称嗜酸粒细胞分化因子。IL5能诱导嗜酸粒细胞活化、增殖、分化，而嗜酸粒细胞被认为通过释放毒性蛋白而在变应性鼻炎发病中起重要作用。IL5的主要生物学作用是维持和延续速发型变态反应形成的炎症，形成AR的典型病理改变，使AR鼻黏膜中EOS等炎症细胞数目升高并持续存在，延续临床症状。IL5在迟发相反应中占有重要作用，慢性变应性炎症反应主要通过抑制IL5来控制，在鼻黏膜的变应性反应迟发相中最重要的病理改变如EOS的浸润、分化、活化等均通过IL5来维持和延续，所以IL5决定着AR慢性炎性反应的。
本实验证明辛芷鼻敏胶囊能减少IL5表达，进而减少EOS的浸润从而控制症状，治疗变应性鼻炎。
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