HPLC法测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量

            作者：余晓晖，赵磊，吴福祥，刘本亮    

   摘  要：目的：建立黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法（HPLC）测定盐酸小檗碱的含量。结果：盐酸小檗碱在0.05～0.5 μg范围内呈良好的线性关系，r=0.9998，平均加样回收率为96.9 %，RSD=1.43 %(n=5)。结论：本法操作简便，结果准确、可靠，可用于黄柏胶囊的质量控制。

　　关键词：高效液相色谱法；黄柏胶囊；盐酸小檗碱

　    黄柏胶囊是由黄柏制成的单味中药制剂，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮等功效，临床上主要用于湿热泻痢、黄疸、带下、热淋等，收载于《卫生部药品标准》（中药成方制剂，第五册）。主药黄柏中的盐酸小檗碱为其抗菌成分之一〔1〕，其质量标准中仅有黄柏的定性鉴别，为有效控制该药品质量，本文采用RP-HPLC法测定了主药黄柏中的盐酸小檗碱的含量，该方法简便、准确、重现性好，结果较满意。

　　1  仪器与试药

　　SP 8810高效液相色谱仪、SP 200检测器、SP 4600数据处理仪（美国光谱物理公司）、盐酸小檗碱（药品生物制品鉴定所）、乙腈（色谱纯试剂）、重蒸水，其他试剂均为分析纯。样品为市售品（批号：20020316、20010806、20010908）。

　　2  方法与结果〔2-4〕

　　2.1  色谱条件

　　C18反相柱（10 μm,4.6 mm×250 mm，中国院大连化学物理所提供）；流动相：0.05 moL/L；磷酸二氢钾缓冲液-乙腈（76∶24）（用磷酸调解pH值至3.5）；紫外检测波长：270 nm；流速：0.8 mL/min；柱温：室温；理论板数（n）按盐酸小檗碱计不低于3000。在此条件下，样品中盐酸小檗碱与其他相关峰均能达到基线分离，盐酸小檗碱色谱峰的保留时间为3.77 min，有关色谱图见下图。黄柏胶囊的HPLC图图1  盐酸小檗碱对照品色谱图图2  样品色谱图注：A 盐酸小檗碱色谱峰

　　2.2  线性关系考察

　　精密称取盐酸小檗碱4.580 mg，加适量稀乙醇制成0.5 mg/mL的溶液，取适量微孔滤膜过滤后，精密吸取1 mL，置10 mL容量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度、摇匀，精密吸取1μL、3μL、5μL、7μL、10μL，测定峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标，进样量（μg）为横坐标进行回归，求得回归方程为Y=3592061X-30718.94，r=0.9998，表明盐酸小檗碱在0.05～0.5 μg范围内线性关系良好。

　　2.3  精密度试验

　　精密吸取同一对照品溶液（50 μg/mL）5 μL，连续进样5次，盐酸小檗碱峰面积的RSD=1.03 %。

　　2.4  重现性试验

　　精密称取同一样品5份，按样品制备方法制备，各吸取10 μL进样、测定，盐酸小檗碱含量的RSD=2.25 %。

　　2.5  稳定性试验

　　精密吸取同一样品溶液10 μL，每隔2 h测定一次，共测6次，盐酸小檗碱峰面积的RSD=2.51 %（n=6）。

　　2.6  回收率试验

　　取已知含量的样品适量，分别精密加入盐酸小檗碱对照溶液(0.5 mg/mL)适量，按样品测定方法制备和测定，回收率，结果见表1。   表1盐酸小檗碱回收率测定结果取样品溶液适量研细，精密称取样品0.5121 g，置索氏提取器中，加(1→100)盐酸甲醇100 mL，加热回流提取至无色，放冷至室温，滤过，滤液回收甲醇至5 mL,用稀乙醇定容到100 mL容量瓶中，摇匀，微孔滤膜滤过，精密吸取续滤液1 mL置10 mL容量瓶中，稀乙醇稀释至刻度，精密吸取该溶液10 μL和2.2项下的对照品溶液5 μL、7 μL，按上述色谱条件测定，用外标两点法计算盐酸小檗碱的含量，结果见表2。  表2含量测定结果

　　3  讨论

　　测定盐酸小檗碱含量的方法较多，有高效液相色谱法、薄层扫描法、分光光度法等。本文采用HPLC方法测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱含量，方法简便、快速、结果可靠，可作为该制剂定量控制指标。

　　：

　　〔1〕肖培根. 中药志［M］. 北京:化学出版社，2001：668.

　　〔2〕周元瑶，李芳.用反相高效液相色谱法考察盐酸黄连素的质量［J］.药物分析杂志，1984，4（3）：13.

　　〔3〕李宝明，何丽一.高效液相法测定制霉灭滴胶囊中盐酸小檗碱的含量［J］.药物分析杂志，2000，20（2）：128.

　　〔4〕张旭香，张兴运，许志红.薄层扫描法测定长安升白颗粒中小檗碱的含量［J］.中草药，2002，33（7）：619.