蜂胶抗菌作用的实验室研究

【关键词】  抗菌活性

    摘 要  目的:探讨蜂胶在体外实验条件下的抗菌作用。方法:采用琼脂挖沟法与琼脂绝对浓度法，对20种临床常见的病原菌和条件致病菌进行了实验室条件下的蜂胶抗菌活性研究。结果:通过琼脂绝对浓度法与琼脂挖沟扩散法，蜂胶对金黄色葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌，结核杆菌、肺炎球菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、丙型副伤寒杆菌、白色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌等都有抑制生长的作用，对结核杆菌、白色念珠菌，新型隐球菌也有明显的抗菌活性。结论:蜂胶在体外实验条件下有明显的抗细菌、抗真菌以及抗结核分枝杆菌的作用，而且这种作用不受实验方法的影响。

    关键词  蜂胶;抗菌活性;结核分枝杆菌;细菌

    随着生物饮食的盛行，天然的蜂胶俨然成了捍卫健康的守护神，蜂胶的特殊抗菌、杀菌成分，提供给了人们人工抗生素之外的另一选择。蜂胶（Bee Propolis），在希腊文中是“都市捍卫者”的意思，因为蜂胶具有防御外来的入侵者及感染病原菌扩散的作用，为了解蜂胶在实验条件下的体外抗菌活性，本文对天然的蜂胶进行了实验研究，现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1  菌种:下列细菌的24h培养物:金黄色葡萄球菌、变形杆菌、白色葡萄球菌、大肠杆菌、乙型副伤寒杆菌、伤寒杆菌、丙型副伤寒杆菌、志贺氏痢疾杆菌、炭疽杆菌、鼠疫杆菌、黄色微球菌、枯草杆菌、白喉杆菌、乙型链球菌、甲型链球菌、肺炎链球菌、丙型链球菌、产气杆菌、白色念珠菌、新型隐球菌。

　　1.1.2  培养基制备:常规制备沙氏培养基、常规准备普通营养培养基、常规准备血培养基或血清培养基，将制备好的上述培养基按下列的方法进行药物（蜂胶）稀释（按表1的方法进行稀释）。沙氏培养基10磅10min灭菌;普通营养培养基15磅20min;血培养基或血清培养基用间歇法进行灭菌，结核培养基使用改良的罗氏培养基，制备后采用间隙灭菌法进行消毒灭菌，备用。

    1.1.3  蜂胶的来源与稀释:采集状态下的蜂胶，经95%的酒精稀释后，再用生理盐水按表1方 法进行稀释后，按比例加入各种培养基中，灭菌，并进行去菌实验后使用。挖沟琼脂扩散法，使用1∶10的浓度进行试验。表1 各种加药培养基的稀释方法

    1.2 方法

    1.2.1  菌液的制备:将上述细菌的24h培养物，用生理盐水稀释成20亿/mL～30亿/mL的菌悬液，在制备的过程中要严格进行无菌操作。

    1.2.2  接种与培养:将上述制备好的培养基，做无菌试验后，每管接种菌液0.1mL，接种后的培养基要平面放置，使菌液平铺在斜面，待干后直立于试管架上，37℃恒温培养。细菌培养18h～24h，真菌培养24h～48h。结核分支杆菌培养20d～30d。 1.2.3  对照的设计:每种实验菌设计一管空白（不加蜂胶）对照。

　　 1.3 判断方法

    经过上述培养后，将每种菌种管的培养结果，以菌落数的多少来判断该菌对蜂胶的敏感或不敏感。实验结果用“+”“-”号来表示，“+”表示细菌生长，为不敏感，“-”表示细菌不生长，为敏感。

    2 结果

    琼脂绝对法蜂胶对20种细菌与真菌结果见表2;挖琼脂扩散法，蜂胶对20种细菌与真菌抗菌谱均为敏感。 表2 琼脂绝对浓度法蜂胶对20种细菌与真菌抗菌结果记录

    3 讨论

    蜂胶是一种天然的抗菌物质，名为Proo-lis，pro.是防御之意，-po1is是城市（蜂群之意），其字面上即明白表示为蜂群的防御物质，根据研究显示蜂胶的主要成分有:①类黄酮（Flavonoids）;②维生素B 1 ，B 2 ，B 6 ，维生素C，维生素P及维生素A;③芬多精（Phyton）;④香豆素（预防血栓及各种酸痛）;⑤曼杞（抑制癌细胞增殖，扩散及发生）;⑥有机酸，石碳酸，芳香醛及三十四种微量元素;⑦密蜡;⑧花粉;⑨天然树酯（Balsam）。根据1995年巴西生化学家Marcucci的报道，蜂胶萃取物含有二百多种物质，包括黄酮类（Flavonoids）已分析出34种，醇类8种，醛类6种，酮类6种，脂肪酸与酯类21种，氨基酸27种，芳香酸17种，芳香酯类37种，花青素类10种，松烯类（Terpenoids）15种，固醇类4种，多醣聚合体4种，维生素5种和20种矿物质。其中，以黄酮类的含量最高，也是蜂胶的精华所在，约占萃取物的40%～50%，种类包括黄碱素（Flavones）、黄碱醇（Flavonols）、类黄酮（Flavanones）和类黄酮醇（Flavanonols），为蜂胶中最具药理与抗生活性的主成份。此外，蜂胶中尚有维生素B 1 、B 2 、B 6 、维生素C、维生素E，微量元素如铁、钾、钠、镁、铬、钙、锶、铜、锰、锌、硅、钴、铝、镍及钡等。

    与抗菌、杀菌有关的成分为有机酸:蜂胶所具 有的特殊有机酸，例如:龙胆酸、安息香酸、咖啡酸、 香豆素酸、单酚酸等，均具有抑制细菌及抵抗炎症反应的作用。生物类黄酮类:约可细分成20种～30种，是蜂胶中最主要的有效成份，可协助人体组织细胞进行抗氧化、抗炎症、抗组织胺等作用。并具有促进胶原蛋白合成，帮助组织修复、再生的功效。经研究发现蜂胶的效用主要表现在下列几个方面:蜂胶是国内外专家公认的最伟大的“天然抗生物质”，具有强力的抗炎性、抗菌性、抗氧化、抗老化、抗病毒、细胞活性化、强化精力、定神、解热解毒与强化免疫力（抵抗力）、自疗力等作用。

    本实验研究表明，蜂胶在体外实验条件下有明显的抗细菌、抗真菌以及抗结核分枝杆菌的作用，而且这种作用不受实验方法的影响。在目前，细菌特别是结核分支杆菌存在着广泛耐药性的情况下，对于蜂胶在抗菌即抗感染方面的使用，将有着广阔的前景。

    ［1］ 郑汉臣.药用植物学.第3版.北京:人民卫生出版社，1999，310～320.

    ［2］ 陈新谦.新编药物学.第1版.北京:人民卫生出版社，2000，296～305.

    ［3］ 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程.第2版.南京:东南