HPLC法测定腰痛片中芍药苷含量

【摘要】  目的 建立腰痛片中芍药苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，Shimpack VP-ODS C18(4.6 mm×150 mm,5 μm）为色谱柱，甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，检测波长为230 nm，流速为1.0 ml/min。结果 芍药苷线性范围为0.1448～2.8960 μg，平均回收率为100.4％，RSD为1.53％（n＝6）。结论 该方法操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，能有效控制腰痛片的质量。

【关键词】  腰痛片；芍药苷；高效液相色谱法

　　腰痛片收载于《部颁标准》中药分册第5册，由杜仲叶、续断、赤芍等12味中药组成，具有强腰补肾、活血止痛的功效，临床效果较好［1］。部颁标准中没有收载该制剂的含量测定指标。已有采用HPLC法测定该制剂中补骨脂素和异补骨脂素的含量［2，3］。赤芍具有清热凉血，散瘀止痛的功效，能反映腰痛片活血止痛的功效，因此本文选择芍药苷作为腰痛片含量测定的指标，采用HPLC法测定制剂中芍药苷的含量［4］，为制订该制剂的质量标准提供实验依据。

　　1  仪器与试药
    　　
　　Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国，Agilent）； Branson SB3200超声波清洗仪（上海，Branson）；色谱柱为Shimpack VP-ODS C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)。
    　　
　　腰痛片（桂林三金药业股份有限公司，基片重0.35 g）；芍药苷对照品（供含量测定用，药品生物制品检定所提供，批号为110736-200423）；甲醇、磷酸均为色谱纯（天津四友）；水为去离子纯化水；其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1   色谱条件 
   
　　色谱柱：Shimpack VP-ODS C18(4.6 mm×150 mm,5 μm）；以甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相；流速为1.0 mL/min；检测波长为230 nm；进样量10 μL；理论板数按芍药苷峰应不低于3 000。

　　2.2   对照品溶液的制备 
   
　　精密称取经五氧化二磷减压干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。

　　2.3   供试品溶液的制备 
   
　　取本品10片，去糖衣，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为50%的甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率400 W，频率50 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用体积分数为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.4   阴性对照品溶液的制备 
   
　　取处方组成中除赤芍外的其余成分，按“2.3”项处理，制成阴性对照品溶液。

　　2.5   专属性检查
   
　　吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL注入色谱仪，测定。结果表明，阴性对照品在供试品相应的位置没有干扰。

　　2.6  线性及范围 
   
　　精密称取芍药苷对照品3.62 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇制成0.724 mg/mL的贮备液。精密吸取上述贮备液配成一系列对照品溶液（0.01448、0.0362、0.0724、0.1448、0.2896 mg/mL），分别精密吸取10 μL注入液相色谱中，测定。以芍药苷质量（m）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，回归方程为：A＝11937m＋22.9，r＝0.9999。结果表明芍药苷进样量在0.1448～2.8960范围内线性关系良好。

　　2.7  精密度试验
   
　　精密吸取对照品溶液（0.0724 mg/mL）10 μL，重复进样6次，芍药苷峰面积RSD为1.82%。

　　图1  对照品（A）、样品（B）、阴性（C）HPLC图谱（a为芍药苷峰）（略）

　　Fig. 1  HPLC chromatograms of control (A),sample(B) and negative control(C)

　　2.8  稳定性试验 
   
　　分别于0，1，2，3，5，12，24，48 h精密吸取同一批号（批号为20070201）供试品溶液10 μL，按“2.1”项下测定，结果芍药苷峰面积RSD为1.25%，表明供试品在48 h内稳定。

　　2.9   重复性试验
   
　　取同一批号腰痛片（批号为20070201）6份，按“2.3”项下方法制备，并按“2.1”项色谱条件测定芍药苷的含量。结果芍药苷平均含量为3.57 mg/g，RSD为1.93%。

　　2.10   加样回收率试验 
   
　　取本品（批号为20070201，含量为3.57 mg/g）约0.3 g，精密称定，加入芍药苷溶液（1.0190 mg/mL）1 mL，按“ 2.3”项方法制备，分别测定，回收率，结果见表1。

　　2.11  样品含量测定 
   
　　取3批腰痛片分别按“2.3”项方法制成供试品溶液，进样测定芍药苷含量，结果见表2。

　　表1  芍药苷加样回收率测定结果（n＝6）（略）

　　Tab.1  Results of sample recovery test (n=6)

　　表2  腰痛片中芍药苷的含量测定结果（n＝3）（略）

　　Tab.2  Results of paeoniflorin content in Yaotong tablets

　　3  讨论

　　3.1  在供试品溶液制备中，考虑到处方中含有药材细粉、树脂及挥发油等低极性的成分，参照2005年版药典中“赤芍”的方法，采用体积分数为50%的甲醇作为提取溶媒。

　　3.2  在流动性的选择上，参照2005年版药典中“赤芍”及“白芍”项，分别以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(体积比40∶65)、甲醇-0.05 moL/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇(体积比67∶173∶4∶4)为流动相进行试验。结果以甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，芍药苷峰有很好的分离度和重现性。

【】
  　　［1］ 尹锦绣.腰痛片腰肌劳损76例疗效观察［J］.上海中医药杂志，1999（3）：17.

　　［2］ 陈斌，陈伟，杨根金，等.SPE-GC法测定腰痛片中主要成分的含量［J］.药学杂志，2000（10）：572-573.

　　［3］ 田永华，钱叶,俞圆.HPLC法测定腰痛片中补骨脂素和异补骨脂素的含量［J］.中成药，2007（8）：452-453.

　　［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：化学出版社，2005：4.