养精种子汤对缺氧雄性大鼠生殖机能损伤的保护作用
作者：邓旭辉，张荣华，廖卫公，高钰琪，刘福玉
【摘要】 目的 观察中药养精种子汤(YJZZD)对缺氧雄性大鼠生殖机能损伤的保护作用。方法 45只雄性SD大鼠随机分为正常组、缺氧组、五子衍宗汤组、养精种子汤低剂量组和养精种子汤高剂量组。用模拟高原5 000米的低压舱，造成大鼠生殖系统损伤模型，观察服用养精种子汤、五子衍宗汤(WZYZD)前后动物的精液常规及FSH、LH、T水平的改善情况。结果 与正常组相比，缺氧组精子活率、活力、精子计数显著降低（P<0.01），精子畸形率显著增加（P<0.01），且血清LH、T含量均有显著下降（P<0.01）。与缺氧组相比，五子衍宗汤组、养精种子汤低剂量组、养精种子汤高剂量组能显著增加大鼠的精子活率、活力、精子计数（P<0.01），减少畸形率（P<0.05），显著增加LH及T的分泌（P<0.01）。且养精种子汤高剂量组与五子衍宗汤组比较差异显著（P<0.01）。各组FSH水平变化差异无显著性。结论 五子衍宗汤、养精种子汤都能改善对缺氧雄性大鼠的生殖机能，且高剂量养精种子汤疗效优于五子衍宗汤。
【关键词】 中药；养精种子汤；五子衍宗汤；高原；生殖机能;大鼠
Abstract:Objective To study the effects of Yangjing Zhongzi decoction(YJZZD) on reproductive function injury in hypoxia male rats. Methods 45 Sprague-Dawley(SD) male rats were randomly divided into normal group，hypoxic group，WZYZD group, high-dose YJZZD group and low-dose YJZZD group. The hypoxic group，WZYZD group, and large-dose YJZZD group and low-dose YJZZD group were raised in a hypobaric chamber simulating 5000 m altitude for four weeks respectively,and then observed the improvement of general seminal parameters and sex hormones.Results Compared to normal group,hypoxic group had significantly decreased in the sperm density,motility and viability（P<0.01）,and a significant increase in sperm deformity（P<0.01）,a significant decrease in LH and T（P<0.01）. Compared to hypoxic group,WZYZD group,large-dose YJZZD group,low-dose YJZZD group had significantly increase in the sperm density,motility and viability（P<0.01）,a significant decrease in sperm deformity（P<0.05）,and a significant increase in LH and T（P<0.01）. There was statistic significance(P<0.01）in high-dose YJZZD group compared with WZYZD group.Conclusions YJZZD and WZYZD might all ameliorate reproduction in hypoxia male rats,and YJZZD had better effect.
Key words:traditional Chinese medicine;Yangjing Zhongzi decoction;Wuzi Yanzong decoction，plateau;reproductive function
高原环境对男性生殖功能有抑制作用，主要原因是由高原缺氧引起的，一方面是直接作用于生殖细胞，引起生殖能力低下；另一方面则作用于生殖内分泌系统，间接影响生殖能力［1］。本实验利用动物高原缺氧模型评价临床验方养精种子汤的效果，并设五子衍宗汤作为阳性对照，探讨其作用机制，以期为相关研究及临床工作提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
成年健康雄性SD大鼠45只，体质量180～210 g，购自第三军医大学动物实验中心,许可证号：渝20020002，符合SPF级标准。常规饲养1周后使用。
1.2 药物与试剂
养精种子汤(由黄芪、熟地、山萸肉、菟丝子、枸杞子、肉苁蓉、桑葚、仙茅、仙灵脾、丹参、陈皮、茯苓组成)。五子衍宗汤(由枸杞子、菟丝子、覆盆子、五味子、车前子组成)。以上中药均购自第三军医大学西南。将上述药材按2005年版药典标准制成煎剂，五子衍宗汤每毫升含生药2 g，养精种子汤每毫升含生药2 g。人促卵泡生成激素放射免疫分析试剂盒、睾酮放射免疫分析试剂盒、人促黄体生成激素放射免疫分析试剂盒均购自北京北方生物技术研究所。
1.3 实验方法
1.3.1 动物分组 将实验动物随机等分为5组：正常组、缺氧组、五子衍宗汤组、养精种子汤低剂量组和养精种子汤高剂量组，每组9只。正常组平原200 m正常饲养；缺氧组、五子衍宗汤组、养精种子汤低剂量组和养精种子汤高剂量组，在模拟高原5 000 m的低压舱（第三军医大学高原军事医学系提供）中饲养4周，每天早上8点钟停止减压60 min，以便进行药物灌胃、更换食物和打扫卫生。
1.3.2 实验给药 五子衍宗汤组予五子衍宗汤12 g/kg·d-1灌胃4周，养精种子汤高剂量组予养精种子汤35 g/kg·d-1灌胃4周，养精种子汤低剂量组予养精种子汤10 g/kg·d-1灌胃4周。4周后，处死动物。
1.4 观察指标及检测方法
1.4.1 睾丸、附睾系数 大鼠称重后断头，取出双侧睾丸和附睾称重。并睾丸重量／体质量为睾丸系数，附睾重量／体质量为附睾系数。
1.4.2 精子活力和活率测定 采用［2］方法取精子悬液。取少许精子悬液滴于载玻片上，在倒置显微镜下镜检100个精子(5个视野)，分别计算快速前向运动精子数、慢速前向运动精子数、非前向运动精子数和不活动精子数。计算精子活力及精子活率。
1.4.3 精子计数 采用牛鲍氏计数板，参照红细胞计数方法，进行精子计数，以悬液精子数×稀释倍数／右侧附睾尾重量表示，单位为（精子数／100 mg 附睾尾组织）。
1.4.4 精子畸形率检查 取一滴精子悬液置洁净载玻片一侧，推片，晾干，甲醇固定5 min，2%伊红染色2 h，冲洗，晾干，高倍镜下（×400）检查200个完整的精子，记录无钩、香蕉、无定形、双尾畸形及其他尾部畸形精子数。畸形率以畸形精子总数／200表示。
1.4.5 内分泌激素的测定 用10％乌拉坦麻醉后，1 000～1 500 mg/kg腹腔注射(ip)，用促凝负压管直接心脏取血。血液置4 ℃冰箱中凝固，然后离心10 min，分离出上层血清，置于-20 ℃冰箱中保存。用放射免疫法测定促卵泡生长激素(plasma follicle stimulating hormone，FSH）、促黄体生成激素(luteinizing hormone，LH）和睾酮(testosterone，T)值，操作按试剂盒说明书进行。
1.4.6 统计学分析 所有数据应用SPSS13.0分析软件进行单因素方差分析。P<0.05表示差异有显著性，P<0.01表示差异有非常显著性。
2 结果
2.1 睾丸、附睾系数 缺氧组睾丸、附睾系数较正常组偏高，正常组与缺氧组比较，P<0.05，见表1。
2.2 精子活率、精子活力 缺氧组精子活率、活力明显降低，各组与缺氧组比较，P<0.01。养精种子汤能提高精子活力，养精种子汤高剂量组的精子活率与五子衍宗汤组比较，P<0.01，见表1。
2.3 精子计数 缺氧组精子计数明显减少，各组与缺氧组比较P<0.01。养精种子汤高剂量组与五子衍宗汤组比较，P<0.01，见表1。
2.4 精子畸形率 缺氧组畸形率增高，各组与缺氧组比较，P<0.05，见表1。
2.5 内分泌激素测定
FSH各组相比较差异无显著性；缺氧组LH、T含量明显下降，各组与缺氧组比较,P<0.01；养精种子汤高剂量组LH、T含量与五子衍宗汤组比较，P<0.01,见表2。
表1 养精种子汤对缺氧雄性大鼠附睾精子参数变化的影响（略）
Tab.1 Effects of Yangjing Zhongzi decoction on sperm paramet
与正常组比较:a P<0.05，b P<0.01；与缺氧组比较:c P<0.05，d P<0.01；与五子衍宗汤组比较:e P<0.01
表2 养精种子汤对缺氧雄性大鼠血清FSH、LH、T水平水平变化的影响（略）
Tab.2 Effects of Yangjing Zhongzi decoction on the level of plasma follicle stimulating hormone(FSH),luteinizing hormone(LH),and testosterone(T) of the hypoxia male rats
与正常组比较:a P<0.01；与缺氧组比较:b P<0.01；与五子衍宗汤组比较:c P<0.01
3 讨论
高原缺氧环境不仅能造成睾丸、精子的损伤［3］，而且影响内分泌激素的分泌。有报道认为高原低氧可抑制LH分泌，可能对FSH分泌无影响［4］，可使T含量降低［5］。本实验表明，大鼠在模拟高原缺氧环境下，精子活率、活力、精子计数均下降，精子畸形率增加，精子质量下降。且LH、T含量均下降，从而引起生精障碍。
五子衍宗汤是著名的补益中药，具有添精补髓、疏利肾气、种嗣衍宗之功，主治肾气不足、阳痿早衰、遗精等症。医学证明，本方能提高小鼠的血睾酮水平，增强精子数，加强精子活动能力［6］。本实验也表明，五子衍宗汤能明显改善缺氧环境下大鼠的精子活力、活率，提高精子数目，减少畸形率，增加促性腺激素LH及雄性激素T的分泌。
在临床中研究发现，生精障碍临床可表现为少精子症、弱精子症、畸形精子症，甚至无精子症及无精液，属中医“精冷、精空、精少、无子”范畴。本病与肝肾精血不足、脾虚湿胜、湿淤阻络有关，肾虚、血淤、湿热为其主要病机，因此本研究确立了补肾填精、益气养血、化淤利湿的原则。养精种子汤是临床中医验方，该方既用菟丝子、枸杞子、仙茅、桑葚等滋补肝肾，又用黄芪、熟地益气养血，还以丹参活血化淤，茯苓、陈皮健脾利湿。诸药合用，滋补肝肾，填精养血，兼活血通络之功，对治疗男性生精障碍有较好疗效。本实验表明，养精种子汤能明显提高高原缺氧下大鼠的精子活力、活率，提高精子数目，减少畸形率，增加LH及T的分泌（见表1、2），且养精种子汤高剂量组与五子衍宗汤组比较差异有显著性。
本研究结果表明，五子衍宗汤与养精种子汤均能改善模型大鼠的精液质量和血清LH、T水平,且既能补肾又能活血、利湿的养精种子汤疗效优于单纯补肾的五子衍宗汤。
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