降香与红景天对心肌梗塞大鼠心肌组织AngⅡ含量及AGT mRNA表达的影响

【摘要】  目的：观察“药对”降香、红景天对心肌梗塞大鼠心肌组织血管紧张素ⅡAngⅡ含量、血管紧张素原(AGT)mRNA表达的影响，探讨其改善心肌重塑作用机制。方法：结扎大鼠冠状动脉左前降支制备心肌梗塞模型，分别给予降香、红景天煎剂和卡托普利溶液灌胃，连续6周后取梗塞区心肌，分别用放射免疫法和荧光定量PCR检测心肌组织血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达量。结果：模型组血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达量高于假手术组和正常组(P<0.05);药对组、药对联合卡托普利组血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达量较模型组降低(P<0.05)，与卡托普利组接近(P>0.05);联合用药组血管紧张素原mRNA含量较药对组降低(P<0.05)。结论：“药对”降香、红景天能够改善心肌梗塞后大鼠心肌重塑，其作用机制可能与降低梗死区心肌组织血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达有关。

【关键词】  心肌梗塞 心肌重塑 降香 红景天 血管紧张素Ⅱ 血管紧张素原

心肌重塑系心肌损伤后基因组表达改变，导致分子、细胞和间质的改变，其主要形态学变化表现为梗塞区膨展、心室肥厚和心室总体扩张。急性心肌梗塞后均有不同程度的心肌重塑[1]，且伴随着疾病的而进展。心肌重塑的发生与循环和局部肾素?血管紧张素?醛固酮系统(RAS)的激活有关[2]。本实验拟通过“药对”降香、红景天干预心肌梗塞后大鼠，观察其对梗塞心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量、血管紧张素原(AGT)mRNA表达的影响，探讨其改善心肌梗塞后心肌重塑的作用机制。

　　1 实验材料

　　1.1 实验动物 SPF级雄性SD大鼠共41只，体重300g±20g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号SCXK(沪)2003?0003。

　　1.2 仪器和试剂 心电图机、动物呼吸机、Real?time检测仪，血管紧张素Ⅱ试剂盒(北京北方生物技术研究所)，Superscript Ⅱ反转录酶(广州达晖生物技术有限公司)，逆转录试剂盒(广州达晖生物技术有限公司)，PHY，Tyr和?actin引物(上海英俊生物技术有限公司)。

　　1.3 实验药物及制备 降香产自四川，红景天产自西藏，均由上海中医药大学附属普陀中药房提供;卡托普利由上海施贵宝公司提供;药物制备：红景天、降香各2kg，先煎红景天1.5小时，后入降香，共煎2次制成药液4000ml(每毫升含生药1g),大鼠灌胃剂量为3g/(kg·d)。卡托普利制成1.515g/L的溶液，灌胃剂量为10.5mg/(kg·d)。

　　2 实验方法

　　2.1 动物模型建立 大鼠用1%戊巴比妥钠腹腔麻醉，气管插管后接人工呼吸机辅助呼吸。在左胸第4～5肋骨间作横切口打开胸腔，在肺动脉圆锥与左心耳交界稍下1～2mm处用无创性缝线结扎冠状动脉左前降支，开胸前后即时记录Ⅱ导联心电图，以结扎部位以下心肌变白、搏动减弱且心电图出现ST段弓背向上抬高为造模成功。假手术组开胸后仅在相应部位用无创缝针空穿一次即缝合胸壁。术后庆大霉素预防感染3天。

　　2.2 分组及给药 大鼠随机分为药对组、卡托普利组、联合用药组、模型组、正常对照组，各7只，假手术组6只。药对组在心肌梗塞造模后次日按2ml/300g鼠重给予中药煎剂灌胃;卡托普利组在心肌梗塞造模后次日按2ml/300g鼠重给予卡托普利溶液灌胃;联合用药组在心肌梗塞造模后次日按2ml/300g鼠重给予中药煎剂和卡托普利溶液，分上下午灌胃;模型组在心肌梗塞造模后次日按2ml/300g鼠重给予生理盐水灌胃;假手术组：开胸后不结扎冠状动脉，而以无创缝针在相应部位空穿一次即缝合胸壁，次日起按2ml/300g鼠重给予生理盐水灌胃，以上各组均连续给药6周;正常对照组不给予任何干预，正常饲养6周。6周后处死动物摘取梗塞区心肌，放入冻存管，置液氮中保存备用。

　　2.3 检测指标及方法

　　2.3.1 血管紧张素Ⅱ含量 采用放射免疫法测定。取梗死心肌组织标本，每100mg组织加生理盐水1ml，低温匀浆，低温高速离心(4000bpm)20min，提取上清液，严格按照血管紧张素试剂盒说明进行操作。

　　2.3.2 血管紧张素原mRNA表达 采用免疫荧光法检测。从基因库中查得大鼠血管紧张素原的基因bank号为BC019496。①靶基因的扩增与纯化：总RNA的抽提，RNA样品定量，逆转录，聚合酶链反应(RT?PCR)。②PCR扩增产物的克隆：连接，转化，重组质粒的筛选，基因测序鉴定阳性克隆。③荧光定量PCR：TaqMan probe：TaqMan probe：5′?CCA TCT ACG AGC GGG ACT CAG GTG C?3′ 67.6 25 64;Sense primer：5′?CTG AGC AGT CCG TTC CTG TTC?3′ 59.2 21 57.1;Antisense primer：5′?GGA GGC ATC ACA CCA CAT TTT G?3′ 58.9 22 50;制作标准曲线：质粒抽提，质粒定量，建立标准曲线。样本检测：由标准曲线得到每一个样本中目的基因的初始浓度。

　　2.4 统计学方法 检测结果均用(±s)表示，多组间计量资料，各组间进行方差分析并两两比较，用SPSS11.0软件进行统计分析。

　　3 实验结果

　　与模型组比较，药对组、联合用药组和卡托普利组梗塞心肌组织的血管紧张素Ⅱ含量、血管紧张素原mRNA表达均显著降低(P<0.05)。血管紧张素Ⅱ含量药对组、联合用药组与卡托普利组，差异无显著性意义(P>0.05);药对组与卡托普利组比较，差异无显著性意义(P>0.05)，联合用药组与卡托普利组比较，差异无显著性意义(P>0.05)， 但联合用药组优于药对组(P<0.05);从绝对值上看，对血管紧张素Ⅱ含量、血管紧张素原mRNA表达的改善作用依次为联合用药组、卡托普利组和药对组，见表1。表1 各组AngⅡ含量、AGT mRNA表达比较与模型组比较，*P<0.05;与药对组比较，△ P<0.05

　　4 讨 论

　　心肌重塑是造成心梗后心衰的主要原因，是心梗后发生心衰和不良预后的独立危险因素。冠心病心肌梗死后均伴有RAS系统的激活，尤其是心脏局部RAS系统的激活造成心肌重塑，心脏外形球形化，心肌组织纤维化，心脏收缩功能和舒张功能减退，心功能显著下降。目前对于心肌重塑的统一认识为RAS系统尤其是血管紧张素Ⅱ及其受体起了最为重要的作用[3,4]。而肾素血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂对改善心肌重塑的效果肯定且已得到证实[5]。

　　冠心病和心肌梗塞据其临床表现属于中医“胸痹”、“心痛”、“真心痛”、“厥心痛”等范畴。中医认为，冠心病是本虚标实之证，气血阴阳不足是其本，阴寒、痰浊、瘀血痹阻是其标。药理研究证实，很多冠心病的中药及复方具有良好的促血管新生和减少心肌重塑的作用。华山对治疗冠心病的12味常用中药进行研究发现，降香和红景天在一定剂量范围内促血管新生作用最强[6]。降香辛温，具有芳香温通，行气活血定痛的作用;红景天性寒味甘涩，具有活血止血，益气固本，通脉养心的功效[7]，二药合用则具有益气养心、活血通脉之功，起到协同增效作用，属中医“药对”相须配伍，符合中医理论组方原则，应用于治疗心肌梗塞契合其本虚标实、气滞血瘀的病机。

　　实验结果证实，“药对”降香、红景天能够改善心肌梗塞后大鼠心肌重塑，其作用机制可能与降低梗塞区心肌组织血管紧张素Ⅱ含量和血管紧张素原mRNA表达有关。

【】
  　　1 Tani S,Naqao K,Watanabe I,et al.Increasingly well?preserved left ventricular function in hospital survivors with acute myocardial infarction:effect of early and complete reperfusion strategy on left ventricular remodeling.Circ J，2007,71(2):180?185

　　2 Sun Y,Weber KT.Infarct scar:a dynamic tissue.Cardiovasc Res，2000,46(2): 250?256

　　3 El?Sabban ME,Hassan KA,Birbari AE,et al.Angiotensin II binding and extracelluar matrix remodeling in a rat model of myocardial infarction.J Renin Angiotension Aldosterone Syst，2000,1(4):369?378

　　4 Ulgen MS,Ozturk O,Alan S,et al.The relationship between angiotensin?converting enzyme (insertion/deletion) gene polymorphism and left ventricular remodeling in acute myocardial infarction.Coron Artery Dis，2007,18(3):153?157

　　5 Patten RD,Aronovitz MJ,Einstein M,et al.Effects of angiotensin II receptor blockade versus angiotensin?converting?enzyme inhibition on ventricular remodeling following myocardial infarction in the mouse.Clin Sci (Lond)，2003,104(2):109?118

　　6 蒋 霞,李 勇,范维琥.部分冠心病常用中药对鸡胚尿囊膜的促血管生成作用研究.中西医结合心脑血管病杂志,2006,4(11):972?973

　　7 李 刚,张述禹,赵国君.藏药红景天的药研究进展.民族医药杂志,2004,7(3):38?40