玉屏风总多糖的醇提水提工艺条件优化

【摘要】  目的优选提取玉屏风总多糖醇提水提的最佳工艺条件。方法采用正交实验法进行优选，正交实验中以乙醇浓度(A)、醇提温度(B)、醇提时间(C)3个因素，每个因素选取3个水平进行实验。以干浸膏收率和玉屏风总多糖含量为考察指标，对影响提取玉屏风总多糖醇提水提工艺的因素进行了研究。结果醇提水提过程中溶剂乙醇的浓度对玉屏风总多糖的提取有较大影响，影响提取效果的主次因素顺序为A>B >C。结论醇提水提提取玉屏风总多糖的最佳提取工艺为乙醇浓度为95%，醇提温度为50℃，醇提时间为2.5 h。

【关键词】  玉屏风总多糖； 正交实验； 醇提水提

    Abstract：ObjectiveTo seek out the optimum extract technology of total polysaccharides from Yu Ping Feng. MethodsThe optimum extraction conditions were obtained by the experiment with the orthogonal design. The ethanol concentration, extraction temperature and extraction time were the factors in orthogonal design, and each factor with three levels. The content of total polysaccharides of Yu Ping Feng was determined by spectraphotometry. ResultsIn the process of alcohol extracting and water extracting technology, the ethanol concentration significantly affected total polysaccharides of Yu Ping Feng. The effects of these factors decreased in the following order: the ethanol concentration, extraction temperature, extraction time. ConclusionThe optiacum condctions ofalcohol extracting and water extracting technology  are the ethanol concentration 100%, the extraction temperature  50℃, and the extraction time is 2.5 h.

    Key words：Yu Ping Feng total polysaccharides;   Orthogonal experiment;   Alcohol Extracting-Water Extracting

    复方中药“玉屏风散”是扶正祛邪的代表方，源自元代《丹溪心法》，具有益气固表、健脾止汗的作用。由黄芪、白术和防风3味药组成［1］。已经有报道，黄芪多糖、白术多糖及防风多糖均具有增强免疫功能、抗肿瘤等多种生物活性［2～4］。近年来，张磊等［5～7］研究了玉屏风散多糖类成分对免疫功能的影响，证明玉屏风总多糖(YTP)是玉屏风散免疫干预作用的主要有效部位，YTP的肠道过程与其对机体非特异性免疫和黏膜免疫功能的增强有关，YTP激活肠道粘膜免疫可能是免疫增强作用的始动环节。这可能是由于不同的多糖之间在免疫调节方面存在协同效应［8］，复合多糖比单一多糖对于免疫功能的增强作用更大。

    目前关于玉屏风多糖的研究，主要集中在药方面，而对玉屏风总多糖提取工艺却少见报道。采用醇提水提工艺提取玉屏风总多糖，既能保证多糖的得率和纯度，又能充分利用方药中的醇溶性活性成分，避免中药材的浪费。因此，本文以干浸膏收率和多糖含量为考察指标，对玉屏风总多糖醇提水提工艺进行优化。

    1   仪器与试药

    WFJ-2000型紫外可见光光度计（万尼柯上海仪器设备有限公司）；LABOROTA 4000型旋转蒸发仪；黄芪、白术和防风的饮片（均购自安国市昌达中药材饮片有限公司）； D-无水葡萄糖标准品（药品生物制品检定所）；其他实验所用化学药品、试剂均为分析纯。

    2   方法与结果

    2.1   改良苯酚-硫酸法［9］测定玉屏风总多糖的含量

    2.1.1   标准曲线的制备精确称取葡萄糖0.098 4 g，用蒸馏水配制成100 ml。分别吸取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，置10 ml具塞试管中，依次加入蒸馏水使终体积为2.0 ml，另取2.0 ml蒸馏水作空白对照，各管加入苯酚试液1.0 ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸各5 ml，摇匀后放置5 min，置沸水中加热15 min，取出放至室温，于490 nm处测定吸光度。以含量（μg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：A=0.059 2 C + 0.037 6（R2 = 0.999 3），葡萄糖在2.50～12.50 μg·ml-1线性关系良好。

    2.1.2   提取物中总多糖含量的测定精密称定提取物约10 mg，加蒸馏水定容至100 ml，取出1.0 ml置10 ml具塞试管中，按“标准曲线的制备”项下操作，测得样品的吸光度值，根据标准曲线求总多糖的含量。

    2.2   实验评价指标玉屏风总多糖的提取采用醇提水提，水提液过滤并浓缩，加入乙醇，静置过夜，抽滤得沉淀，沉淀冷冻干燥即得玉屏风粗总多糖干浸膏。

    本实验以玉屏风总多糖的干浸膏收率和含量为指标，其中干浸膏收率和多糖含量的权重系数均定为0.5［10］。

    综合评分＝（50/最大干浸膏收率）×干浸膏收率＋（50/最大多糖含量）×多糖含量

    2.3   正交设计考察乙醇浓度、醇提温度、醇提时间称取黄芪30g，防风和白术各10g，以干膏收率和多糖含量为考察指标，考察影响玉屏风总多糖提取工艺的因素，包括乙醇浓度、醇提温度和醇提时间。实验设计见表1，实验结果及方差分析见表2～3。表1   L9（34）因素水平设计由方差分析可见，各因素对玉屏风总多糖提取效果的影响程度依次为A>B>C，乙醇浓度对玉屏风总多糖得率有显著影响，而醇提温度和醇提时间无显著影响。因此，玉屏风总多糖的最佳提取工艺为A3B2C3，即乙醇浓度为95％，醇提温度为50℃，醇提时间为2.5 h。

    2.4   验证实验以上实验得出玉屏风总多糖的最佳提取工艺为：50℃用10倍量的95%的乙醇浸提2.5 h后过滤，将挥干溶剂的药渣在90℃下用12倍量的水提取2次，1.5 h/次，提取液经浓缩后加入乙醇使终浓度为80％，沉淀冷冻干燥即得。为考察上述提取工艺的稳定性，按该最佳工艺提取3批产品，分别测定总多糖的含量。得多糖的平均得率为（8.22±0.12）％。3次结果差异较小，说明该工艺稳定可行。表2  正交实验及结果综合评分为沉淀量与多糖各占50％表3   方差分析

    3  讨论

    由正交实验结果分析得出，乙醇浓度是影响玉屏风总多糖得率的主要因素。最佳工艺条件为乙醇浓度为95％，醇提温度为50℃，醇提时间为2.5 h。

    在进行化生产时，醇提过程及醇沉过程中所得的上清液经浓缩还可用于提取玉屏风总苷。

    多糖干燥时温度对产品的性状有明显影响，高温干燥产品色黑且较硬，冷冻干燥可得到白色粉状产品。

    由于白术含有大量淀粉，若颗粒太细进行浸提，淀粉呈糊状，较难过滤，因此浸提时药材应粉碎为粗颗粒。

【】
  ［1］ 邓 云,张 晋,王立金,等.加味玉屏风散对被动吸烟大鼠肺损伤的保护作用［J］. 实验方剂学杂志,2004,10（3）:21.

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［5］ 张 磊,吴 瑕,王 岚,等.玉屏风散多糖类成分对免疫功能的影响［J］. 中药药理与临床,2006,22（1）:2.

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［10］ 马 艳,杨安东,文 筱 .白术多糖提取工艺研究［J］. 中药材,2006,29（10）:1104.