大孔树脂纯化白芷总香豆素工艺研究

                      作者：何芳辉，尹蓉莉，刘杨，赖庆宽，施明毅  

【摘要】  　　目的　通过筛选实验，优化大孔树脂纯化白芷总香豆素的工艺。方法采用A，B，C 3种大孔树脂对白芷提取液进行纯化，用紫外分光光度法测定白芷总香豆素含量，对工艺进行评价。结果A型树脂效果较好。最佳工艺：白芷提取液（相当于原生药0.1 g/ml），动态吸附后，静置30 min，用相当于原生药7倍量水，8倍量30%乙醇、8倍量80%乙醇以流速1.0 ml/min依次洗脱，收集80%乙醇洗脱液，回收乙醇，真空干燥得产物为黄棕色粉末。结论A型树脂适合分离纯化白芷总香豆素，优化后的纯化工艺稳定可行。

【关键词】  大孔树脂；白芷；总香豆素

　　白芷药材原载于《神农本草经》，具有解表散风、通窍止痛、燥湿止带、消肿排脓之功效，主治外感风寒所致头痛、鼻渊、带下过多、疮痈肿毒等证［1］。药理研究表明，白芷主要活性成分为总香豆素类，具有解热镇痛、抗炎、解痉、降压、抗菌等作用［2］。本实验主要以总香豆素含量为指标，对大孔树脂的种类及相应纯化工艺进行筛选，为确定生产工艺参数提供依据。

　　1  器材

    UV-VIS8500紫外/可见分光光度仪；白芷（产于四川省遂宁市，购于成都市荷花池中药材市场）；异欧前胡素对照品（批号0827-9904，药品生物制品检定所）；试剂均为分析纯。

　　2  方法及结果

　　2.1  提取液中白芷总香豆素含量的测定白芷乙醇提取液回收至无醇味，加水稀释后用醋酸乙酯萃取，萃取液蒸干，残渣加乙醇定容(相当于0.15 g药材/100 ml)。以异欧前胡素为对照品，按《中国药典》2005版附录ⅤA紫外-分光光度法项下操作于311 nm处测定。标准曲线方程为Y=0.060 3X-0.035 1，R=0.999 0。

　　2.2  白芷提取液纯化工艺优化研究

　　2.2.1 上柱液的制备称取白芷药材200 g，加6倍量70%乙醇渗漉，渗漉液回收至无醇味，加水定容至1 000 ml。

　　2.2.2  树脂型号的筛选将白芷上柱液（0.2 g药材/ml）分别通过不同型号的的树脂，以总香豆素的比吸附量（mg/ml），解吸率（%），纯度（%）为评价指标筛选树脂类型。结果见表1。表1  树脂筛选结果
树脂型号总香豆素比吸附量C/mg·g-1解吸率（%）纯度（略）

    比吸附量（mg/g）=（上柱总香豆素量-残留液中总香豆素量）/树脂重量

    解吸率（%）=〔醇洗脱液中总香豆素量×100/（上柱总香豆素量-残留液中总香豆素量）〕×100%

    纯度（%）=(醇洗脱液中总香豆素量×100/醇洗脱物干膏重量)×100%由表1可得,A型树脂纯化白芷总香豆素效果较好。

　　2.2.3  A型树脂纯化白芷提取液的工艺研究

　　2.2.3.1 上样浓度和吸附流速的考察以乙醇洗脱液中总香豆素含量为指标，通过单因素实验考察上样浓度和吸附流速对纯化工艺的影响。结果见表2～3。表2  上样浓度考察结果（略）表3  吸附流速考察结果（略）

    由表2～3可知，上样浓度为0.1 g生药/ml，吸附流速为1.0 ml/min效果较佳。

　　2.2.3.2  水洗脱用量的考察水洗液（流速为1.0 ml/min）进行molish反应和总香豆素含量检测，当收集到8倍量柱体积时，molish反应为阴性，且紫外311 nm处无吸收，故确定水洗脱量为7倍量水。

　　2.2.3.3  最大上样量的考察将浓度为0.1g生药 /ml的白芷样品液通过树脂柱（树脂干重为5g），分段收集残留液，测定总香豆素含量，结果见表4及图1。表4  最大上样量考察结果（略）

    泄漏百分数（%）=(该流份的残留液中总香豆素量*100/该流份上柱液总香豆素量)×100%

    从泄漏曲线图可得：第8份残留液中总香豆素明显增多，说明上样至第7份时总香豆素开始明显泄漏，故确定白芷样品液的最大上样量为5 g生药/g干树脂。

　　2.2.3.4  洗脱剂种类的考察分段收集不同浓度乙醇洗脱液，稀释后测定吸光度，结果见表5，并绘制洗脱曲线，见图2。表5  洗脱剂种类考察结果（略）

    由洗脱曲线可知，80％乙醇解吸力较强，因此选其为洗脱剂；30%醇几乎不洗脱总香豆素，考虑作为除杂用。

　　2.2.3.5  洗脱流速和洗脱剂用量考察以洗脱液中总香豆素量为指标，通过单因素实验考察洗脱流速和洗脱剂用量对纯化工艺的影响，结果见表6～7。表6  洗脱流速考察（略）表7  洗脱剂用量考察（略）

    由表6～7可知，洗脱流速为1.0 ml/min，洗脱剂用量为200 ml效果较佳。

　　2.3  小试取白芷药材粉末25 g的渗漉液减压回收至无醇味，加水定容至250 ml，置已处理好的A型大孔树脂，静态吸附30 min，按1.0 ml/min的流速，以175 ml水和200 ml 30%乙醇依次洗涤，弃洗涤液，再用200 ml 80%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，真空干燥得产物为黄棕色粉末。平行实验3份，结果见表8。表8  小试结果（略）

    经验证实验，RSD<2%，优化工艺稳定可行。

　　3 讨论

    本实验中白芷总香豆素在树脂上的保留率偏低，后用液相色谱证明了总香豆素流失的原因是使用单一种类树脂纯化，因此考虑用混合树脂对其进行纯化，实验正在进行中。

    以30%乙醇除杂过程中，对乙醇用量没有进行考察，只是依据洗脱至无色进行判定，实际上可以结合乙醇洗脱液中的含量确定。

【】
  　　［1］张廷模.中药学［M］.北京:高等出版社，2001：64.

　　［2］郑虎占,董泽宏,佘 靖，等.中药研究与应用［M］.北京:学苑出版社，1997：1151.