黄芩素体内抗甲型流感病毒作用的研究

                        作者：吴修华,刘妮,杨丽,沈海容 

【摘要】  　　【目的】观察黄芩素的体内抗甲型流感病毒作用。【方法】选用NIH小鼠，随机分为正常对照组，模型组，病毒唑组（剂量为0?07g·kg-1·d-1）,黄芩素高、中、低剂量组（剂量分别为100、10、1μg·kg-1·d-1）;采用甲1型流感病毒肺适应株FM1滴鼻感染复制模型后，检测各组肺指数、肺指数抑制率、存活率及死亡保护率，并行肺组织病理检查。【结果】模型组肺指数和存活率显著性降低，与正常对照组比较差异有显著性意义（P＜0?01），肺组织出现明显炎性突变；黄芩素高剂量组可显著性升高肺指数和存活率，与模型组比较差异有显著性意义（P＜0?05）,并可明显改善模型小鼠的肺组织炎性突变，作用与阳性对照药病毒唑相仿。【结论】黄芩素具有一定的体内抗甲型流感病毒作用。

【关键词】  黄芩素/药；病毒性肺炎/中药疗法；流感病毒，甲型；肺组织/病理学；疾病模型，动物；小鼠

　　Abstract: ObjectiveTo investigate the anti?virus effect of baicalein on influenza A virus in vivo．MethodsNIH mice were randomized into the normal control group，model group，virazole group (at the dose of 0?07g·kg-1·d-1)，high?，middle? and low?dose baicalein groups (100，10 and 1 μg·kg-1·d-1 respectively). Mice infected models were induced by intranasal drip of influenza A virus strain FM1. The lung index，inhibitory rate of lung index，survival rate and death prevention rate as well as the pathological changes of lungs were observed.ResultsCompared with the normal control group，the lung index and survival rate were decreased (P＜0?01)，and inflammatory changes were shown in the lungs；the lung index and survival rate were markedly increased in high?dose baicalein group(P＜0?05 compared with the model group)，and the lung inflammatory changes were relieved，the above effects being similar to those of virazole.Conclusion Baicalein exerts certain in?vivo anti?virus effect on influenza A virus．

　　Key words:BAICALEIN/pharmacology；VIRAL PNEUMONIA/TCD therapy;INFLUENZA A VIRUS;LUNG/pathology；DISEASE MODELS，ANIMAL；MICE

　　黄芩是常用中药，具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效［1］。黄芩素(baicalein，BAI)是其主要有效成分之一，化学结构属黄酮类，具有多种药理作用，如：抗菌、抗病毒、抗炎、抗变态反应、抗氧化、清除氧自由基、抗癌、抗肿瘤、抗凝、抗血栓形成和保护肝脏、心脑血管、神经元等作用［2］。目前临床主要用于抗炎和抗菌，但其抗流感病毒作用尚未见报道。本研究选择甲1型流感病毒FM1株，观察BAI的体内抗病毒作用，现报道如下。

　　1材料与方法

　　1?1药物

　　黄芩素购自药品生物制品检定所，批号：071012；病毒唑由湖北医工所提供，批号：060408。

　　1?2动物

　　NIH小鼠由广东省医学实验动物中心提供，雌雄不拘，体质量14～16g,符合清洁级实验标准，合格证号：SCXK(粤)020030002，粤监证字2004A018。

　　1?3流感病毒株

　　甲1型流感病毒株由广东省防疫站病毒室提供，在狗肾细胞（MDCK）中传代，以病变及公鸡红血球血凝法来判断其滴度［3］，在35℃、体积分数5%CO2的培养箱中培养。

　　1?4对小鼠流感病毒性肺炎的影响

　　［4］将NIH小鼠随机分为正常对照组、模型组、病毒唑组（剂量为0?07g·kg-1·d-1）及黄芩素高、中、低剂量组（剂量分别为100、10、1μg·kg-1·d-1），于感染前1d开始灌胃给药，0?2mL/次，连续5d，对照组给予等容积蒸馏水灌胃。各组在乙醚轻度麻醉下感染甲1型流感病毒鼠肺适应株FM115个半数致死剂量（LD50），感染后96h处死，称体质量后取肺称质量，逐个算出肺指数(lung index，LI）：wLI=mlung/mboby×100，以及肺指数抑制率：pLI抑制=（w模型对照组-w给药组）/w模型对照组×100%。

　　1?5对小鼠体内感染流感病毒的死亡保护作用

　　［5］将小鼠随机分为正常对照组、模型组、病毒唑组及黄芩素高、中、低剂量组，分别以流感病毒FM1株2个LD50滴鼻感染，给药组自感染病毒1d开始到感染后4d灌胃给药,0?2mL/次，对照组灌胃给予等容积蒸馏水，逐日观察动物发病和记录死亡数，共观察14d，死亡保护率：p死亡保护=（p模型组死亡-p给药组死亡）/p模型组死亡×100%。

　　1?6病毒检查

　　取各组肺组织，行苏木素—伊红（HE）染色，光镜下观察各组肺组织病理改变情况。

　　1?7统计学方法

　　采用SPSS10?0统计软件包进行数据处理。

　　2结果

　　2?1黄芩素对小鼠流感病毒性肺炎的影响

　　表1结果显示，模型组肺指数显著性降低，与正常对照组比较，差异有显著性意义（P＜0?01）;黄芩素高剂量组肺指数与模型组比较差异有显著性意义（P＜0?05），表明黄芩素对小鼠流感病毒性肺炎有作用。表1黄芩素对小鼠流感病毒性肺炎的影响（略）

　　2?2黄芩素对体内感染流感病毒小鼠的死亡保护作用

　　表2结果显示，黄芩素高剂量组存活率与模型组比较差异有显著性意义（P＜0?05），表明黄芩素具有一定的死亡保护作用。表2黄芩素对体内感染流感病毒小鼠的死亡保护作用（略）

　　2?3肺组织病理检查结果

　　正常对照组肺泡结构清晰；模型组肺泡大量炎性细胞浸润，浆液浸润，肺泡出现实性炎变；病毒唑组可见肺泡内炎性渗出物明显减少，与正常对照组相近；黄芩素高剂量组肺泡壁有所增厚，但肺泡浸润不明显，较模型组肺泡浸润情况明显减轻；黄芩素中、低剂量组可见部分正常肺泡结构消失，出现浸润及炎性实变。结果见图1(彩图见第200页)。

　　3讨论

　　我国的感冒病人中除鼻病毒外，以流感病毒感染较为多见，并且呈周期性大流行，严重威胁着人类健康。国内外临床用于抗A型流感病毒的药物有金刚烷胺(amatadine)、甲基金刚烷胺(rimantadine)、病毒唑(virazole)和干扰素等，前两者可引起中枢性眩晕和迅速耐药毒株的出现［5］；而低剂量口服病毒唑（1?0g/d）无明显抗病毒作用，大剂量口服对无并发症流感患者退热与症状消除的作用较快［6］，但其毒性较大。黄芩素毒性极低，煎剂10g/kg给兔灌胃,醇提取液2g/kg静脉注射,仅呈活动减弱,黄芩浸剂4g/kg给狗灌胃8周,也未见任何毒性反应［7］。目前在人群中流行的甲型流感病毒为甲3型(H3N2)和甲1型(H1N1 )。其中H1N1流感病毒源自禽流感病毒，是记载中引起人类大规模瘟疫的元凶。在其进化过程中反复在人群中出现或消失，引起小范围传播或局部散发。其与人类宿主适应的过程也是其进化演变、选择的过程，因此对甲1型流感病毒进行研究具有重要的现实意义。研究表明：425种中草药在体外细胞水平对流感病毒有抑制作用者达67种，占15?5％ ［8］，而体内的动物实验与机体免疫等因素有着密切的联系，可更可靠的评价抗病毒药效。目前单味黄芩抗甲型流感病毒作用未见报道，张丛梅［9］报道含有黄芩的双黄连复方（金银花、连翘、黄芩）具有抗甲型流感病毒作用。前期实验表明双黄连也具有抗甲型流感病毒作用。但也有研究显示［10］银翘散（金银花、连翘）对甲型流感病毒无抑制作用。本研究结果显示口服黄芩素（100μg/kg）具有良好的体内抗甲1型流感病毒作用及死亡保护作用，效果与阳性对照药病毒唑相仿。表明黄芩素对病毒性感冒的病因治疗具有良好的前景，安全有效，值得进一步开发。

【】
  　　［1］张喜平，李宗芳，刘效恭.黄芩素的药研究概况［J］.药理学通报,2001，17(6)：711.

　　［2］许文杰，丁启龙.黄芩素的药理学研究进展［J］.江苏药学与临床研究,2006,14 (2):103.

　　［3］杨子峰，刘妮，黄碧松，等.牛蒡子甙元体内抗甲1型流感病毒作用的研究［J］.中药材，2005，11（28）：1012 .

　　［4］富航育，卢长安，贺玉啄，等．清肺饮抗小鼠流感病毒性肺炎的实验研究［J］．中华实验和临床病毒学杂志，1996，10(4)：381.

　　［5］Wang T，Wade R C．Comparative binding energy(COMBINE)analysis of influenza neuroaminidase?inhibitor complexes［J］.J Med Chem，2001，44(6)：961.

　　［6］邓学龙，朱宇同，陈征途，等．中药病毒宁滴剂抗呼吸道病毒作用的研究［J］．广州中医药大学学报，1999，16(2)：130.

　　［7］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海技术出版社，1994：813.

　　［8］胡起.从国外抗病毒化学药物研究的经验展望我国抗病毒中草药的研究［J］．中草药通讯，1978，12：43.

　　［9］张丛梅.双黄连粉针的主要临床应用［J］．广西医学，2001，6（23）：1562.

　　［10］Kobayashi M,Davis S M,Utsunomiva T,et al.