益智宁煎剂改善SHR大鼠持续性主动注意力的实验研究

                   作者：赖东兰，李宜瑞，陈晓刚，田慧，唐彦

【摘要】  　　【目的】观察益智宁煎剂对注意缺陷多动障碍（ADHD）模型动物——自发性高血压大鼠（SHR）的主动注意力的影响。【方法】选用SHR大鼠36只，随机分为益智宁高、低剂量组（剂量分别为14?54、7?27g·kg-1·d-1)和空白对照组，采用“五项选择的连续反应时间任务”方法检测给药前后大鼠持续性主动注意力的变化。【结果】益智宁高、低剂量组大鼠持续性主动注意力显著提高，与给药前及空白对照组比较均有显著性差异（P＜0?01），但两剂量组间比较无显著性差异（P＞0?05）。【结论】益智宁煎剂可改善SHR大鼠的持续性主动注意力。

【关键词】  注意缺陷多动障碍/中药疗法；益智宁煎剂/药；疾病模型，动物；大鼠

　　Abstract: ObjectiveTo observe the active attention influence of Yizhining Decoction(YD) on the spontaneous hypertensive rats(SHR), which are used as the animal model of attention deficit hyperactivity disorder(ADHD). MethodsThirty?six SHR were equally randomized into high?dose YD group (at a dose of 14?54g·kg-1·d-1), low?dose YD group (at a dose of 7?27g·kg-1·d-1) and control group. The changes of sustained active attention in SHR were observed by the method of 5-choice serial response time task before and after treatment. ResultsThe sustained active attention in both high?dose and low?dose YD groups were presented obviously in advance, and the difference was significant (P＜0?01) compared with the control group, but the differencewas insignificant (P＞0?05)between high?dose and low?dose groups. ConclusionYizhining Decoction can improve the sustained active attention of SHR.

　　Key words:ATTENTION DEFICIT HYPERACTIVITY DISORDER/TCD therapy;YIZHINING DECOCTION/pharmacology;DISEASE MODELS,

　　注意缺陷多动障碍（attention deficit hyperactivity disorder, ADHD），又名儿童多动症，以注意缺陷、多动、冲动为主要表现，是常见的儿童行为精神障碍，患病率高，且常伴有学习障碍、品行障碍、抽动障碍及某些情绪障碍，严重危害儿童的身心健康，但目前医学尚缺乏治愈方法［1］。迄今已有不少中医药ADHD取效的临床报道，但动物实验方面有待进一步研究。自发性高血压大鼠（SHR）作为遗传动物模型,是目前研究ADHD使用最为广泛的模型动物［2］。本实验采用“五项选择的连续反应时间任务”（5?CSRTT）的方法［2］，观察益智宁煎剂对ADHD模型动物——自发性高血压大鼠的持续性主动注意力的影响，现报道如下。

　　1材料与方法

　　1?1动物

　　SHR大鼠36只,雄性,周龄11周,体质量245~290g，购于四川省医学院实验动物研究所，合格证号：0018751。每只大鼠均生活在空间为41cm×25cm×15cm的动物笼内，实验开始前可自由饮水及摄食。

　　1?2药物

　　益智宁煎剂由龟板、生龙骨、远志、石菖蒲、夜交藤、熟地、党参、云苓、浮小麦、五味子等组成。生药由广州中医药大学第一附属门诊部药房提供，制备成水煎剂后，含生药1?154g/mL，贮存于4℃冰箱中备用。

　　1?3实验装置

　　1?3?1实验箱为本课题组自制，实验箱大小 25cm×25cm×25cm，箱顶可在放入大鼠后封闭，前壁正中通过一有机玻璃活动门连接一饲料盒，由一个通过程序控制的投放装置供给饲料颗粒，大鼠可以推开活动门在饲料盒内觅得饲料。箱顶悬挂一照明灯，可以通过程序控制其开关。实验箱后壁为弧形，壁上等距设置5个小孔，各孔距离前壁正中线的距离相等，孔内各设置一信号灯，作为大鼠的视觉刺激光源，可通过程序控制其开关，每孔前各设置一红外感应器，大鼠用鼻触小孔时可触发感应，自动记录并在相应条件下控制饲料投放装置投放饲料。

　　1?3?2相关电脑配件及“大鼠主动持续性注意力”控制软件由本课题组自编（待发表）。

　　1?4持续性主动注意力和冲动行为的检测方法（5?CSRTT）［3］

　　1?4?1实验条件在以下实验阶段，每只大鼠均于禁食16～18h后开始训练或检测，并于完成30min后喂给18g饲料颗粒，可自由饮水。

　　1?4?2观测指标大鼠的持续性主动注意力以正确率衡量：p正确＝n正确反应/(n正确反应＋n不正确反应)。

　　1?4?3实验步骤

　　(1) 适应训练：共3d，每只大鼠每天训练15min。将禁食16～18h后的SHR大鼠放入实验箱中，让其熟悉箱内的环境，并通过程序使饲料投放装置每15s供给饲料1粒。此阶段训练的目的是让大鼠熟悉饲料盒的位置及饲料通过投放装置供给饲料颗粒的方法。(2) 预备训练：共7d，每只大鼠每天训练15min。在此训练阶段，将禁食16~18h后的大鼠放入实验箱中，5个信号灯中的某一信号灯亮（按随机顺序），若大鼠至该信号灯前触发红外感应，则饲料投放装置自动投放饲料1粒，大鼠可通过活动门从饲料盒获取饲料，否则饲料投放装置不会投放饲料。此阶段训练的目的是让大鼠在光源信号与饲料颗粒的投放之间建立稳定的条件反射。（3） 正式训练：约50d，大鼠在禁食16~18h后放入实验箱，在设定时间后（间歇期），某一信号灯亮，但亮的时间只持续设定时间（信号期），大鼠只有在该段时间内及信号灯熄灭后的设定时间内（后续期），到此信号灯前触发红外感应，才能使饲料投放装置投放饲料；如大鼠在信号灯还未亮（间歇期内）时到某一信号灯前触发红外感应，视其为冲动不成熟反应，该反应将被自动记录并触发照明灯熄灭，一直持续到大鼠打开活动门触发下一次实验。每只大鼠每天训练1次，每次15min。开始时将信号期设为4s，后续期设为1s；随着大鼠对信号反应能力的提高，逐渐将信号期缩短至1s，后续期相应延长到4s。直到大鼠均能够达到如下标准：正确反应率超过50%，遗漏率小于15%，每15min实验时间内（一个实验序列）完成超过20次实验，并表现稳定。（4） 正式检测：在所有大鼠均达到以上基准后开始正式测试，测试时间为15min，每天测试1次，每次20min。连续记录3d大鼠的不成熟反应率以作分析。

　　1?5分组与给药

　　将36只SHR大鼠随机分为益智宁煎剂高、低剂量组（剂量分别为14?54、7?27g·kg-1·d-1）和空白对照组，每组12只。每组大鼠在完成上述训练及检测后，于每天上午9∶00～10∶00 灌服药液1次，空白对照组灌服生理盐水25mL/kg，连续灌药14d后，按正式检测方法再次检测大鼠连续3d的正确率以作分析。

　　1?6统计学方法

　　采用SPSS11?5软件包进行统计分析。前后比较用配对t检验，组间比较用单因素方差分析。

　　2结果

　　益智宁煎剂对SHR大鼠持续性主动注意力的影响表1结果显示，益智宁煎剂高、低剂量组均可改善SHR大鼠的持续性主动注意力（P＜0?01），且与给药前比较差异有显著性意义（P＜0?01），但组间比较无显著性差异（P＞0?05）。表1不同剂量益智宁煎剂对SHR大鼠持续性主动注意力的影响（略）

　　3讨论

　　研究显示［4］，中医药治疗ADHD的临床疗效与中枢兴奋剂大致相当，虽起效较慢，但长期疗效肯定，且未发现明显毒副反应，反跳少，也无成瘾性形成，因此，中医药治疗儿童多动症引起越来越多的关注。本研究所采用的自发性高血压大鼠（SHR）能同时表现出注意缺陷、冲动、多动等ADHD的核心症状，神经病理、生化和药理研究也支持其作为ADHD动物模型的合理性，是大多数学者公认的目前最好的ADHD动物模型［5］。此外，本研究所采用的“五项选择的连续反应时间任务”（5?CSRTT）方法，也是目前同时检测实验动物持续性主动注意力的优秀方案，故其能作为评价疗效的客观准确的指标［2］。益智宁煎剂以补肾平肝、健脾养心、益智宁神为法，是由《千金方》中的孔圣枕中丹加味而成，临床观察其治疗200多例ADHD患儿疗效确切［6］。本项研究结果表明，益智宁煎剂能显著改善SHR大鼠的持续性主动注意力行为，在动物实验中验证了该方的疗效。但高、低剂量的益智宁煎剂组间比较无显著性差异，其原因和意义何如，还需更大样本量及进一步的量效关系研究以明确。

【】
  　　［1］Foy JM, Earls MF. A process for developing community consensus regarding the diagnosis and management of attention?deficit/hyperactivity disorder［J］. Pediatrics， 2005，115(1):97.

　　［2］李英,刘爱敏.注意缺陷多动障碍的治疗研究现状［J］.儿童保健杂志,2003,11(2):44.

　　［3］Robbins TW. The 5?choice serial reaction time task: behavioural pharmacology and functional neurochemistry［J］. Psychopharmacology (Berl)，2002,163:362.

　　［4］赖东兰，陈晓刚，李宜瑞,等.中药治疗儿童多动症的探讨［J］. 辽宁中医杂志,2004,10：826.

　　［5］Russell VA, Sagvolden T, Johansen EB. Animal model of attention ?deficit hyperactivity disorder［J］. Behav Brain Funct,2005,1:9

　　［6］陈晓刚, 练文华, 廖永州, 等. 益智宁方治疗224例注意缺陷多动障碍患儿的临床观察［J］. 中华临床医药杂志, 2004,11:20.