地中海贫血复合缺失型α?地中海贫血双重杂合子的分子检测及血液学分析

【摘要】  本研究对β?地中海贫血复合缺失型α?地中海贫血双重杂合子进行分子检测及血液学表型分析，以了解其检出情况及基因分布状况。 采用单管多重gap?PCR技术检测3种常见的缺失型α?地中海贫血基因；采用PCR结合反向点杂交法检测β?珠蛋白基因17个位点的18种突变；进行血细胞常规分析。结果表明： 81例β?地中海贫血杂合子中有15例复合缺失型α?地中海贫血，占18.52％。共有9种基因型，包括6例（7.41％）β?地中海贫血杂合子携带α?地中海贫血?1基因（??SEA/αα）；8例（9.88％）携带α?地中海贫血?2基因，其中6例（7.41％）为右侧缺失型（?α3.7/αα），2例（2.47％）为左侧缺失型（-α4.2/αα）；1例（1.23％）携带缺失型HbH基因（??SEA /?α3.7）。β?地中海贫血复合缺失型α?地中海贫血双重杂合子的各项红细胞参数与单纯β?地中海贫血杂合子比较差异无显著性意义（P>0.05）。结论：梧州市β?地中海贫血复合缺失型α?地中海贫血双重杂合子的发生率很高，而血液学指标缺乏特异性。采用gap?PCR作为临床上地中海贫血筛查的一线方法，可以有效减少β?地中海贫血复合α?地中海贫血双重杂合子漏检的可能，对遗传咨询和准确进行产前诊断具有重要意义。

【关键词】  地中海贫血 α?地中海贫血 β?地中海贫血 杂合子

    Molecular Detection and Haematological Analysis of Heterozygotes in β?Thalassemia Combining Deletional α?thalassemia

        Abstract    This study was aimed to investigate the prevalence and genotype distribution of  heterozygotes  in β?thalassemia   combining deletional α?thalassemia by using molecular detection and haematological methods.  Three common deletions of α?thalassemia were detected by using  gap?PCR. The mutations of β?thalassemia  were identified by using PCR with reverse dot blot hybridization. The routine analysis of blood cells was   carried out. The results indicated that 15 cases from  the 81 β?thalassemia traits  were found to be the compound  heterozygosity for β?thalassemia and α?thalassemia  with 9 different types of gene defects with  18.52% detection rate. There were 6 cases (7.41%) of β?thalassemia heterozygote combining α?thalassemia?1 gene(??SEA /αα), 8 cases (9.88%) combining  with α?thalassemia?2 gene including 6 (7.41%) right ward deletion(?α3.7/αα) and 2 (2.47%) left ward deletion(?α4.2/αα), and 1 case (1.23%) combining deletional HbH gene(??SEA /?α3.7).  No significant differences were found between β?thalassemia heterozygotes combining deletional α?thalassemia and pure β?thalassemia in all RBC parameters. It is concluded that the incidence of β?thalassemia  heterozygotes combining with deletional α?thalassemia is frequent in Wuzhou city. The hematological analysis can not give  specificity for diagnosing these dual heterozygotes. Gap?PCR as a routine method for thalassemia screening has the advantages in reducing the possibility of failing to detect the combining heterozygosity for β?thalassemia and α?thalassemia. It is more useful for genetic counselling and prenatal diagnosis of this disease.

    Key words    thalassemia; α?thalassemia; β?thalassemia；heterozygote

    地中海贫血是一种由珠蛋白基因缺失或突变导致肽链合成障碍而引起的溶血性贫血，是广西发病率最高的人类单基因遗传病之一。在广西α?地中海贫血和β?地中海贫血的发生率分别高达14.95％和1.52％-6.78％［1-3］。这两类地中海贫血基因携带者婚配，就有可能生育β?地中海贫血复合α?地中海贫血双重杂合子的后代。而这类双重杂合子个体无论与α?地中海贫血或者β?地中海贫血杂合子个体婚配，均有机会生育重型地中海贫血患儿。因此此类双重杂合子的准确检出对于做好优生优育及产前诊断尤为重要。我们应用新的地中海贫血筛查策略，在育龄人群中发现15例β?地中海贫血复合缺失型α?地中海贫血双重杂合子，对其基因型进行分子检测及血液学分析。

     标本来源

    标本来自2004年8月至2006年3月来我院进行孕前或产前检查的育龄个体，共检出β?地中海贫血杂合子81例，其中女性64例，男性17例，年龄18-38岁。

    调查策略

    对受检者均首先同时进行血液学表型分析及gap?PCR，血红蛋白电泳，发现HbA2≥3.5%和（或）HbF≥2.0%者，再对其进行β?地中海贫血基因检测。

    基因型分子检测

    标本制备  抽取受检者EDTA抗凝外周血2 ml，按本室常规的改良盐析法抽提基因组DNA。

    α?地中海贫血分析  采用单管多重gap?PCR技术检测3种常见的缺失型α?地中海贫血基因（??SEA 、?α3.7和?α4.2）。

    β?地中海贫血分析  采用PCR结合反向点杂交法检测β?珠蛋白基因17个位点的18种突变。试剂盒由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。

    血液学表型分析

    红细胞参数测定采用日本Sysmex XT?1800i自动血细胞分析仪，血红蛋白电泳采用意大利英特雷勃696PC全自动电泳分析仪。

    统计学处理

    应用SPSS 10.0统计分析软件，成组统计采用独立样本t检验，检验水准α＝0.05。

    结    果

    在检出的81例β?地中海贫血杂合子中，发现15例复合缺失型α?地中海贫血，占18.52％。这些双重杂合子中共有9种基因型，涉及5种β?地中海贫血突变类型；检出6例（7.41％）携带α?地中海贫血?1基因（??SEA /αα）；8例（9.88％）携带α?地中海贫血?2基因，其中6例（7.41％）为右侧缺失型（?α3.7/αα），2例（2.47％）为左侧缺失型（?α4.2/αα）；1例（1.23％）携带缺失型HbH基因（??SEA /?α3.7）（表1）。

    对15例β?地中海贫血复合缺失型α?地中海贫血双重杂合子的红细胞参数进行统计学分析，并与其他66例单纯β?地中海贫血杂合子的数据进行比较，结果见表2。MCV、MCH、MCHC及Hb各项参数两者之间差异均无显著性意义（P>0.05）。

     讨    论

    β?地中海贫血发生的分子基础主要是由于β?珠蛋白基因点突变，在我国南方以CD41?42(?TCTT)、TATAbox ?28(A→G)、CD17(A→T)、IVS?II?654(C→T)及CD71-72(+A)最为常见。引起α?地中海贫血的分子基础则以α?珠蛋白基因缺失为主，在主要是东南亚型α?地中海贫血?1（??SEA ），α?地中海贫血?2则多为右侧缺失型（?α3.7）及左侧缺失型（?α4.2）。本研究检出的81例β?地中海贫血杂合子中上述5种突变类型占92.59％，与以往的报道相符［2］。我们发现，在β?地中海贫血杂合子中有15例（18.52％）同时携带有α?地中海贫血基因，其检出率与蔡稔［3］报道的柳州市为18.0％（16/89）相似，说明β?地中海贫血复合α?地中海贫血双重杂合子在本地区的发生率高，较为常见，在临床工作中不容忽视。

    另外，本研究发现1例少见的β?地中海贫血复合HbH病（β?28/βA复合??SEA /?α3.7）。该患者除各项红细胞参数均较低外，血红蛋白电泳却未见HbH带。我们认为，这可能是由于该患者同时存在α?及β?珠蛋白基因缺陷，导致其α?及β?珠蛋白链的合成均相应减少，从而使其α?链/β?链比例失衡状态较单纯HbH病为轻，以至于不出现大量β?珠蛋白链过剩的情况，HbH含量很低，因而在电泳时难以发现。

    有学者认为，β?地中海贫血复合α?地中海贫血双重杂合子由于α?链和β?链的相对不平衡较单纯α?或β?地中海贫血杂合子有所减轻，其贫血症状也会因此有所减轻［4］。但是，本研究检出的15例β?地中海贫血复合α?地中海贫血双重杂合子 的各项红细胞参数与单纯β?地中海贫血杂合子比较，差异并无显著性意义（P>0.05），显示血液学分析方法对于诊断此类双重杂合子并无帮助。

    传统的地中海贫血血液学筛查方法是基于红细胞参数和血红蛋白电泳等多指标的综合分析法，来判定是α?地中海贫血还是β?地中海贫血。β?地中海贫血复合α?地中海贫血时，多表现为HbA2和（或）HbF水平升高和红细胞脆性改变等β?地中海贫血的特征，而α?地中海贫血的特征被掩盖，因此临床上多诊断为β?地中海贫血。而β?地中海贫血复合α?地中海贫血双重杂合子个体无论是与α?地中海贫血或者β?地中海贫血杂合子个体婚配，均有机会生育重型地中海贫血患儿。因此，准确诊断β?地中海贫血复合α?地中海贫血双重杂合子对遗传咨询和准确进行产前诊断具有重要意义。本研究将gap?PCR作为临床上地中海贫血筛查的一线方法，即可首先检查出受检者是否携带有缺失型α?地中海贫血基因，根据血红蛋白电泳结果再进行β?地中海贫血基因检测，便可大大减少β?地中海贫血复合α?地中海贫血双重杂合子漏检的可能，为遗传咨询和产前诊断提供更为准确可靠的信息。

【】
  1 Wang SW, Wang LM, Zhang BH, et al. A survey of Hb Bart in cord blood and the alpha?globin gene in South China. Birth Defects Orig Artic Ser, 1987； 23: 23-30

2Zeng YT, Huang SZ. Disoders of haemoglobin in China. J Med Genet, 1987； 24: 578-583

3蔡稔, 李莉艳, 梁昕等. 柳州市城镇人群α和β地中海贫血的发生率调查和基因型鉴定. 中华流行病学杂志, 2002； 23: 281-284

4徐葵, 曾瑞萍. 对142例β地中海贫血基因携带者进行缺失型α地中海贫血1基因分析. 中华血液学杂志, 1999； 20: 206-207?