COX?2和bcl?2异常表达与鼻咽癌生物学行为的关系

           作者：许新华， 胡国清， 陈艳，李松， 戴德兰 薛峰， 李道俊， 蔡德鑫    

【摘要】  目的 探讨环氧化酶?2(COX?2)、bcl?2在鼻咽癌中的表达及其与生物学行为的关系。方法 选取临床资料完整并随访达5年以上的86例鼻咽癌患者，采用免疫组化技术检测活检标本中COX?2及抗凋亡蛋白bcl?2的表达,并分析其与临床病理及预后的相关性。结果 COX?2在鼻咽癌组织中阳性表达率为73.3%（63/86），与原发灶范围、颈淋巴结转移、肿瘤分级、生存期密切相关（P＜0.05）；bcl?2蛋白阳性表达率为84.9%(73/86)，与组织学类型、肿瘤分级、病灶范围、淋巴结转移均无相关性，但生存期≤5年组bcl?2蛋白表达阳性率显著高于生存期＞5年组(P＜0.05）。结论 COX?2在鼻咽癌组织中高表达，可能参与了鼻咽癌的发生过程，可作为判断预后的一种有用指标；bcl?2的表达可能与鼻咽癌病因学有关，在鼻咽癌病程中的作用有待进一步探讨。

【关键词】  鼻咽肿瘤；环氧化酶?2；bcl?2蛋白；免疫组化；预后

    COX?2 and bcl?2 Expression and Their Relations to the Behavior of Nasopharyngeal Carcinoma 

     Key words：Nasopharyngeal neoplasms（NPC）;  Cyclooxygenase?2;bcl?2 protein；Immunohistochemistry;  Prognosis

    近年研究显示，环氧化酶?2（Cyclooxygenase?2，COX?2）不仅是炎症过程中一个重要限速酶，还影响某些恶性肿瘤的发生、发展及预后。bcl?2作为一种重要的抗凋亡基因,其蛋白产物与许多肿瘤有密切关系。有关COX?2和bcl?2异常表达与鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)生物学行为的关系尚不清楚，我们采用免疫组化技术探讨86例NPC组织中上述基因的表达情况，旨在了解它们与NPC临床病理的关系。

    1资料与方法

    1.1资料选取1995年1月～1997年4月间在我院首程并有5年以上随访的鼻咽癌患者86例。其中男性65例，女性21例；年龄21～72岁，中位年龄46岁。均有明确病诊断，病理检查标本于初治前经鼻咽部活检取材。中～高分化鳞癌11例，低分化鳞癌65例，泡状核细胞癌6例，未分化癌4例。根据UICC1997年NPC临床分期标准，Ⅰ期8例，Ⅱ期19例，Ⅲ期35例，Ⅳ期24例。临床治疗以根治性放疗为主。照射范围包括鼻咽、颅底和颈部淋巴结，鼻咽原发灶肿瘤量66～76GY/6.5～7周。

    1.2免疫组化染色特异性一抗COX?2多克隆抗体、bcl?2单抗及免疫组化试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。采用免疫组织化学SP法染色，微波修复抗原，DAB显色，PBS代替一抗作阴性对照。

    1.3结果判定标准光镜下COX?2、bcl?2表达阳性的细胞膜及胞浆呈棕黄色。以随意5个400倍癌巢区阳性细胞所占比率的平均数≤10%计为阴性病例,>10%为阳性病例，见图1、2。

    1.4统计学处理采用SPSS10.0统计分析软件，根据数据特征进行χ2检验，Kaplan?meier方法分析生存情况，曲线比较用log?rank检验,用COX回归模型做多因素分析。

    2结果

    2.1临床随访结果至2002年4月，86例患者中有20例出现局部或颈部复发，39例远地转移，5年局部控制率和远地转移率分别为76.7%和45.3%，5年生存率为47.7%。

    2.2COX?2、bcl?2表达与鼻咽癌病理临床各因素关系  全组COX?2及 bcl?2阳性表达率分别为73.3%（63/86）、84.9%(73/86)，见表1。表1COX?2、bcl?2表达与鼻咽癌病理临床各因素关系

    2.3COX?2、bcl?2表达与鼻咽癌预后的关系按鼻咽癌活检组织中COX?2和bcl?2细胞阳性率≤10%组和>10%组绘制生存曲线，两者阳性表达组生存期明显较阴性者短（P=0.042、P=0.032）,见图3、4。COX模型多因素分析显示，COX?2、bcl?2均与鼻咽癌预后有相关性,见表2。表286例鼻咽癌多因素COX模型分析结果

    3讨论

    COX?2是前列腺素合成过程中重要的限速酶，哺乳动物至少有两种同工酶，即COX?1和COX?2，它们在表达调控、定位分布和功能上有明显不同。COX?1在大多数组织和细胞中稳定表达，属结构型表达蛋白。有多种生理功能如保护胃粘膜、维持肾血流等，被称为“管家基因”。而COX?2一般只在受刺激时迅速合成，静息时并不表达，被称为“快反应基因”。这种刺激因子可为细胞因子、生长因子、促癌剂等。近年来研究表明，COX?2不仅是启动炎症反应的关键酶，而且还参与某些恶性肿瘤的发生和发展过程。临床研究证实，80%～95%的结肠腺癌有COX?2蛋白及mRNA水平的增高，而COX?1水平无明显变化[1]。除结肠癌组织中COX?2高表达外，在胃癌、乳腺癌、肺癌、食管癌等恶性肿瘤中，COX?2高表达也常见[2?5]。本研究表明73.3%的鼻咽癌组织中存在COX?2蛋白的过度表达。与组织学类型无关，但与肿瘤分化程度、较短的生存期呈正相关，尤其值得注意的是与原发灶范围和颈淋巴结转移显示出密切关系。NPC颈淋巴结转移率约为70%～80%，咽旁间隙受侵率可达45%～91%，诸多研究表明，原发灶超腔和颈淋巴结转移的局控率和5年生存率明显低于未超腔和无淋巴结转移者，是影响NPC疗效及预后的重要因素[6]，提示有超腔和颈淋巴结转移者在生物学特性上可能有所不同。本组有淋巴结转移和原发灶超腔者COX?2阳性表达率明显高于无淋巴转移及未超腔者（P<0.05）,提示COX?2可能参与NPC发生发展过程,其机制尚有待进一步探讨,可能与促进细胞增殖、肿瘤血管形成和促进肿瘤细胞浸润等有关[7]。

    bcl?2基因是20世纪80年代初从滤泡型B细胞淋巴瘤中分离出来的原癌基因,是一种重要的细胞凋亡调节基因/蛋白。目前已经发现bcl?2蛋白在一些非造血系统肿瘤中呈异常表达，发挥着抑制细胞凋亡的作用[8]。有关bcl?2蛋白表达和鼻咽癌发生及预后的关系尚存在较多争论。较多研究认为bcl?2原癌基因表达可抑制细胞凋亡。Kenney等[9]证实LMP1可以通过诱导bcl?2的表达而抑制p53介导的凋亡。也有研究认为NPC中bcl?2表达与LMP1无相关性,也不能抑制鼻咽癌细胞凋亡。本研究结果显示，bcl?2蛋白在NPC中表达率与众多一致，但值得关注的是bcl?2阳性表达与组织学类型、病理分级、原发灶范围、颈淋巴结转移均无明显相关性，但生存≤5年组bcl?2阳性率显著高于生存期＞5年组(P<0.05)，说明bcl?2在NPC病程中的调控机制较复杂，推测bcl?2蛋白的高表达可能与NPC的病因学有关。 

    综上所述，COX?2、bcl?2蛋白在鼻咽癌组织中高表达，前者与肿瘤分级、原发灶大小、淋巴结转移及较短的生存期有显著相关性，是一种重要的预后指标，随着COX?2选择性抑制剂的临床运用，COX?2可望成为鼻咽癌防治的新靶点。bcl?2也在一定程度上影响着NPC的预后，但其机制有待深入探讨。

【文献】
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