TSG101在食管癌、胃癌及结直肠癌中的表达
作者：陈艳宇，曾子华，郑佩娥，李红，方力，郭莉，康小玲，蒋光愉
【摘要】 目的 探讨TSG101在人消化道恶性上皮性肿瘤中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学方法检测TSG101在食管癌、胃癌及结直肠癌石蜡包埋组织中的表达。结果 TSG101蛋白在25例食管癌、32例胃癌及40例结直肠癌中表达阳性率分别为52.0% (13/25)，28.1%（9/32），62.5%（25/40），三组之间差异无显著性；各组TSG101蛋白表达率随着肿瘤级别的增高而降低。结论 TSG101的表达与人消化道恶性上皮性肿瘤的分化程度有关，其表达率与肿瘤级别呈负相关。
【关键词】 TSG101；食管肿瘤；胃肿瘤；结肠直肠肿瘤；免疫组织化学
Key words：TSG101；Esophageal carcinoma；Gastric carcinoma；Colorectal carcinoma； Immunohistochemistry
肿瘤易感基因101(Tumor susceptibility gene 101, TSG101)由Li等[1]应用随机纯合子敲除技术(random homozygous knockout, RHKO)于1996年发现， TSG101功能失活可引起小鼠NIH3T3成纤维细胞的恶性转化, 给裸鼠皮下注射该转化细胞可形成肿瘤并发生转移； 恢复TSG101功能可逆转部分细胞的恶性表型, 因此它被认为是一个肿瘤抑制基因。 已有研究认为TSG101基因的表达异常可能与乳腺癌的发生有关， 其在人消化道恶性上皮性肿瘤发生、 过程中的可能作用国内仅见个别报道， 我们应用免疫组织化学方法检测TSG101蛋白在食管癌、 胃癌及结直肠癌组织中的表达。
1 材料与方法
1.1 材料
收集暨南大学第一附属2002～2004年，及暨南大学第四附属医院2004年9月～12月手术切除的食管癌、胃癌及结直肠癌石蜡包埋标本共97例。所有标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片备用。行HE染色复查诊断，根据WHO 2000年第3版消化道肿瘤分类[2]进行组织学分型、分级。
1.2 试剂与方法
鼠抗人单克隆抗体TSG101(1∶100)购自Santa Cruz公司，即用型非生物素免疫组化检测试剂盒及DAB显色试剂盒为福州迈新公司产品。免疫组化染色采用二步法，高温高压抗原修复，一抗4℃过夜，其余步骤按照试剂盒说明书操作，以TBS（Tris?HCl缓冲液）代替一抗作为阴性对照。
1.3 免疫组化结果判断
TSG101蛋白定位于癌细胞胞浆内，呈细或稍粗的棕黄色颗粒状。以着色强度高于背景非特异性染色者为阳性表达。参用[3]方法每张切片随机选取5个高倍视野，首先按染色强度评分：无色为0，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；再按阳性细胞所占百分比评分：阴性为0分，阳性细胞数≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；最后按二者乘积分数≥3定为阳性，<3为阴性。
1.4 统计学方法
采用SPSS10.0统计软件处理,四格表资料的χ2检验以及多个样本比较的秩和检验，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 TSG101蛋白在食管癌、胃癌及结直肠癌中的表达与其组织分化程度的关系，见表1。表1 TSG101在食管癌、胃癌、结直肠肠癌中的表达与其组织学分级的关系25例食管癌均为鳞状细胞癌，在高、中、低分化组中TSG101表达的阳性率分别为100%（3/3例），66.7%（8/12例），20%（2/10例），高、中分化组与低分化组之间进行比较，P=0.015（P<0.05），差异有统计学意义。
32例胃癌中TSG101表达的阳性率分别为：管状腺癌32%（6/19例），粘液腺癌30%（3/10例），未分化癌0（0/3例）, P=0.471（P>0.05），认为各组之间差异无显著性。而高、中分化组（8/14例）与低、未分化组（1/18例）间进行比较，P=0.004（P<0.05），差异有显著性。
40例结直肠癌中TSG101表达的阳性率分别为：乳头状腺癌100%（5/5例），管状腺癌59.3%（16/27），粘液腺癌50%（4/8例），P=0.108（P>0.05），认为各组之间差异无显著性。而高、中分化组（22/27例）与低分化组（3/13例）进行比较，P=0.001（P<0.05），提示差异有显著性。
2.2 TSG101蛋白在食管癌、胃癌及结直肠癌组织中表达的比较，见表2。表2 TSG101在食管癌、胃癌及结直肠癌中表达的比较
肿瘤类型例数TSG101表达阳性例数阴性例数阳性率（%）P食管癌25131252.0胃癌3292328.10.172大肠癌40251562.5
TSG101在食管癌、胃癌及大肠癌中表达的阳性率分别为52.0%（13/25）、28.1%（9/32）、62.5%（25/40），经统计学分析χ2=1.861，P=0.172（P>0.05），认为各组之间差异无显著性。
3 讨论
既往研究表明，在多种人类恶性肿瘤中,如乳腺癌、Wilm氏瘤、肺癌、膀胱癌、睾丸癌、肾上腺皮质瘤、肝胚细胞瘤和卵巢癌,染色体11p15区或其邻近区域常发生杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH)。Seizinger等[4]在171例散发性乳腺癌中发现约有30%的病例存在11p15.4～11pcen的杂合性丢失,而且研究也发现将正常的11号染色体或其片断导入乳腺癌细胞,可以逆转癌细胞的转移倾向以及其他的一些恶性特征。这些均强烈提示11号染色体短臂可能存在一个或多个肿瘤抑制基因。已克隆到的人TSG101基因(hTSG101)定位于染色体11p15.1～p15.2区[5]，正好位于上述区域内，故Li等认为TSG101基因很可能就是该区域所存在的抑癌基因，提示其功能缺失可能引起肿瘤发生。
TSG101在多种生物学过程中起作用,但其与肿瘤发生的关系尚未完全阐明。Bennett等[6]进行的相关研究发现TSG101蛋白表达下降与一些卵巢癌、子宫内膜腺癌发生有关。Liu等[ 7, 8]在甲状腺乳头状癌等多种肿瘤中发现有TSG101基因的表达异常或异常转录本, 这些都与经典理论上抑癌基因的基本条件相符。也有研究报道，在乳腺癌组织及细胞株中未发现TSG101发生点突变、基因重排和基因内缺失,可检测到完整的TSG101蛋白[9?11]，表明TSG101基因缺失不是常发事件。
我们的研究结果显示，在食管癌、胃癌以及结直肠癌组织中TSG101的表达均呈现随着肿瘤级别的增高而降低的趋势，与肿瘤的组织学类型无明显相关性。此外，本课题组另文发表的研究表明，与其在消化道恶性上皮性肿瘤中的表达相比，TSG101蛋白在肉瘤中表达率明显较低（17.5%）。因此，我们认为TSG101表达与人消化道上皮性恶性肿瘤的分级有关，与其在软组织肉瘤的发生中扮演的角色可能不同。
TSG101基因在多种人类肿瘤发生中的作用仍尚存争论。该基因作为新的抑癌基因候选者,其在肿瘤发生、发展过程中的变化及其作用的阐释必将为人类肿瘤的发生机制及早期筛查提供重要线索,为肿瘤的防治工作带来新的契机。
【】
［1］ Li L, Cohen SN. TSG101: a novel tumor susceptibility gene isolated by controlled homozygous functional knockout of allelic loci in mammalian cells[J]. Cell, 1996, 85(3):319?329.
[2] Hamilton SR, Aaltonen LA. World Health Organization Classification of Tumours: Pathology & Genetics of Tumours of the Digestive System[M]. Lyon:IARC Press，2000.9?144.
[3] 许良中，杨文涛. 免疫组织化学反应结果的判断标准[J].癌症杂志，1996，6（4）：229?231.
[4] Seizinger BR, Klinger HP, Junien C, et al. Report of the committee on chromosome and gene loss in human neoplasia[J]. Cytogenet Cell Genet, 1991, 58(3?4):1080?1096.
[5] Li L, Li X, Francke U, et al. The TSG101 tumor susceptibility gene is located in chromosome 11 band p15 and is mutated in human breast cancer[J]. Cell, 1997, 88 (1):143?154.
[6] Bennett NA, Pattillo RA, Lin RS, et al. TSG101 expression in gynecological tumors: relationship to cyclin D1, cyclin E, p53 and p16 protein[J]. Cell Mol Biol, 2001, 47 (7):1187?1193.
[7] Liu RT, Huang CC, You HL, et al. Over expression of tumor susceptibility gene TSG101 in human papillary thyroid carcinomas[J]. Oncogene, 2002, 21(31): 4830?4837.
[8] Lin SF, Lin PM, Liu TC,et al. Clinical implications of aberrant TSG101 transcripts in acute myeloblastic leukemia[J]. Leuk Lymphoma, 2000, 36(5?6): 463?466.
[9] Steiner P, Barnes DM, Harris WH, et al. Absence of rearrangements in the tumour susceptibility gene TSG101 in human breast cancer[J]. Nat Genet, 1997, 16(4):332?333.
[10]Ponting CP, Cai YD, Bork P. The breast cancer gene product TSG101: a regulator of ubiquitination?[J]. J Mol Med, 1997, 75(7):467?469.
[11]Zhong Q, Chen Y, Jones D, et al. Perturbation of TSG101 protein affects cell cycle progression[J]. Cancer Res, 1998, 58(13):2699?2702.
