鼻炎的动物模型国内研究进展

【摘要】  　　对于医学的研究来说，动物模型的建立是不可或缺的部分。本文综述了国内近十年来包括变应性鼻炎、萎缩性鼻炎和慢性鼻炎在内的鼻炎动物模型的研究进展，探讨其造模机制和理论依据，以供实验。

【关键词】  变应性鼻炎 萎缩性鼻炎 慢性鼻炎 动物模型

　　动物模型的建立对于医学的研究发展来说有重要意义，对于疾病的成因、病理变化以及的研究都是以其为基础的，他是医学研究不可或缺的组成部分。因为试验动物和人类之间在生上没有本质差异，两者都是通过释放实质上相同的内分泌激素来控制他们内部的一系列胜负反应过程，都是从中枢神经系统和外周神经系统发出相似的化学传递介质，都是以相同的方式对感染或组织损伤起反应的[1]。鼻炎是病毒、细菌、变应原、各种理化因子以及某些全身性疾病引起的鼻腔粘膜的炎症。根据不同的病因、发病机制、病理改变等可分为急性鼻炎、慢性鼻炎、萎缩性鼻炎、变应性鼻炎等多种，困扰着大多数人的工作学习及休息。而鼻炎的动物模型的建立为人类探索和治疗鼻炎提供了有力的保证。本文仅就鼻炎的动物模型在国内的研究进展综述如下。

　　1  变应性鼻炎

　　1.1  真菌性抗原致敏 

　　根据张氏[2]试验，经互隔交链孢菌为真菌性抗原。取健康白色断毛豚鼠雌雄不限，4～5周龄，体重250g～300g，清洁级标准。每只豚鼠腹腔注射抗原1.0ml加等量FCA，第15天开始鼻腔激发：豚鼠鼻腔分别滴注互隔交链孢霉40μl激发，每日一次，共5次。激发后采取记分法记录鼻分泌物量、喷嚏次数及鼻痒程度。记录评分标准参见[3]。自鼻腔激发开始观察30分钟，采用叠加法记分，总分超过5分为动物模型成功。

　　1.2  通过注射卵清蛋白（OVA）变应原致敏 

　　1.2.1  经典方法[4]  Wistar大鼠，雌雄各半，体重150～200g。将卵白蛋白0.3mg，辅以氢氧化铝30mg作佐剂，加生理盐水1ml形成混悬液，行腹腔注射，隔日1次，共7次，为基础致敏。再用0.5%卵白蛋白的生理盐水攻击双鼻腔，每侧0.05ml，每日1次，共7次。每次攻击后均观察30min，内容包括喷嚏、搔抓、流涕，记录评分标准参见文献[3]。按标准叠加法记总分，每只超过5分为模型成功。

　　1.2.2  肾阳虚型变应性鼻炎动物模型的建立 

　　根据邱氏[5]试验，选用3～4月龄健康雄性花色豚鼠，体重300～400克，以卵清蛋白（OV）0.3mg，辅以氢氧化铝30mg作佐剂，加生理盐水1ml形成混悬液，行腹腔注射，隔日1次，共7次。腹腔注射完成后的第2天，行被动皮肤免疫反应（passive-cut aneous-anapliylasi s,PCA）试验，确定OVIgE抗体效价升高后，将OV（OV20mg＋0.9%NS 20ul）用微量加样器滴入双侧鼻腔，每侧10ul，每日一次，共7次。同时每日肌注醋酸强的松龙注射液剂量为50mg/kg体重，连续7天，第8天开始将剂量减为40mg/kg，连续7天，第15天将剂量减为30mg/kg，连续7天。

　　1.2.3  经鼻致敏 

　　根据赵氏[6]试验取成年Hattley豚鼠，体重400～600g，以每侧鼻孔20nl卵白蛋白+0.5mgAI（OH）3胶+0.1ml生理盐水，每天2次，连续10天予豚鼠双鼻孔喷滴，每次喷滴前用4%利多卡因先喷鼻腔，以抑制鼻腔纤毛运动，延长过敏原在鼻腔停留时间。间隔5天后，以1%卵白蛋白生理盐水溶液，每侧鼻腔0.1～0.5ml激发，每3天激发一次，连续激发11次。

　　1.3  豚草花粉变应原致敏

　　根据余氏[7]实验，取清洁级近交系Strain2豚鼠，雌雄各半，鼠龄10周，体重350～450g，42只，每只豚鼠用豚草花粉变应原0.75ml与等量的佛氏完全佐剂（FCA）进行人工免疫接种。先采用变应原加佛氏完全佐剂于腹腔注射0.5ml，四肢皮下（腋下、腹股沟）各注射0.25ml共1.5ml。两周后改为豚草花粉变应原加佛氏不完全佐剂免疫，每周一次，连续两周，注射剂量、部位与首次相同。免疫后第四周行鼻腔过敏原激发，配置0.5%豚草花粉变应原生理盐水溶液，用加样器滴入致敏组豚鼠双侧鼻孔（每侧10ul），每日一次，连续5天。从鼻腔滴入变应原开始观察，记录评分标准参见文献[3]。

　　1.4  以甲苯——2，4二异氰酸脂（TDI）致敏

　　1.4.1  根据赵氏[3]试验方法，取豚鼠雌雄各半，体重250g～300g。10%TDI溶液滴入豚鼠鼻腔致敏，每次0.3ml，每日一次，连续7天，然后每2日一次，共4次，致敏时间共15天，从第一次给药开始观察，记录评分标准参见文献[3]。所致敏动物于用药第7日后得分均超过5分，表明动物模型制作成功。

　　1.4.2  根据张氏[8]试验方法取豚鼠雌雄各半，体重270g～330g。用小棉签点10%TDI涂双鼻腔，对照组用乙酸乙酯，每日1次，连续4天，休息2周后再每周2次激发，共5周。

　　2  萎缩性鼻炎

　　根据戚氏[9]造模方法，选用健康、雌性SD大鼠，月龄2～3月，体重250g～300g。动物麻醉后行双侧卵巢切除术。术前15d心脏穿刺采血2ml，术后15、30、45、60天分批断头处死，每次15只。动物处死后，立即断头取鼻粘膜，以10%福尔马林液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察。双侧卵巢切除术后15天，鼻粘膜未发生明显的形态学改变。鼻粘膜的萎缩性改变发生于术后30天，与术后45天、60天鼻粘膜萎缩性改变一致。

　　3  慢性鼻炎

　　3.1  二氧化硫肺气虚慢性鼻炎模型的建立。根据熊氏试验[10]，取健康花斑豚鼠，体重350g～400g，雌雄各半。将豚鼠放入染毒箱染毒5分钟，1次/日。每7天休息1次，共30天，至23天在染毒同时开始肌注苯甲酸雌二醇。

　　3.2  二氧化氮肺气虚慢性鼻炎模型的建立。根据杨氏[11]试验，取Wistar大鼠32只，体重80～90g，雌雄各半，其试验过程与熊氏试验相同，但以0.092mol/m3的二氧化氮代替0.5%浓度的二氧化硫染毒。

　　4  讨论

　　综上所述，在国内对鼻炎动物模型的研究中，以变应性鼻炎模型的研究最多。变应性鼻炎是发生在鼻黏膜的变态反应性疾病，属于Ⅰ型变态反应[12]。以此理论为依据，其造模过程均可分为基础致敏和激发两步。国内变应性鼻炎的造模以注射OVA和TDI两种致敏为主，也有采用诸如豚草花粉等其他过敏。张氏[2]即以互隔交链孢菌为真菌性抗原，成功制出豚鼠变应性豚鼠模型。以OVA作为变应原致敏过程中，可分为腹腔注射致敏和经鼻致敏两种途径。其中徐叔云主编的《药理实验方法学》[4]所记载的腹腔注射致敏方案被作为经典实验方案而广泛沿用，其造模方法简便，时间一个月。而邱氏[5]将此方法与经典的肾阳虚造模方法加以有机结合，造成了带有中医证型的变应性鼻炎模型，使的传统医学和西方医学在实验动物的基础上得以结合，为中医对该病的提供了空间。经鼻致敏以赵氏[6]的实验方法为代表。但无论是腹腔注射或者是经鼻致敏，都是采用OVA为变应原，以氢氧化铝作佐剂，所不同之处只是基础致敏的部位和致敏时间，所以不同的实验也应该按照各自实验的特性而选择实验方法。另外，余氏[7]根据豚草花粉成为我国许多地区的变应性鼻炎的主要病因之一，而采用豚草花粉致敏，以其与FCA做基础致敏同样造模成功。这个实验为我们研究不同的变应原所致的变态反应模型研究带来重大提示，无论是方法还是研究思路都是值得借鉴的。变应性鼻炎的另外一个较常用的造模方案就是TID致敏。赵氏[3]和张氏[8]以此涂鼻为基础致敏。不同的是赵氏的致敏时间短，致敏激发一共15天，而张氏在此基础上调整致敏过程，研究出慢性变应性鼻炎模型，更接近人类实际的发病过程。
萎缩性鼻炎是一种以鼻黏膜萎缩或退行性变为其病理特征的慢性炎症[12]。戚氏[9]通过摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法而巧妙的成功制出此模型，值得以后的类似实验借鉴。

　　慢性鼻炎是鼻腔黏膜和黏膜下层的慢性炎症性疾病，临床表现以鼻腔黏膜肿胀、分泌物增多，无明确致病微生物感染，病程持续4周以上或反复发作为特征[12]。熊氏[10]以中医理论“久病咳喘，耗伤肺气”为理论基础，而二氧化硫是空气中的主要污染物，且空气污染是慢性鼻炎的主要原因之一，故采用二气化硫熏的方法成功的做出了肺气虚慢性鼻炎模型。而杨氏[11]以同样为大气中主要污染物之一的二氧化氮重复实验，得出同样结果，更加验证了熊氏的理论。但这样的实验，包括上面所提及的肾阳虚型变应性鼻炎动物模型，其意义不仅仅是一个模型的建立，更是西医的实验方法同中医理论的紧密结合。

　　总而言之，鼻炎动物模型近年来在国内的迅速发展为疾病的病因病理探讨和治疗提供了更有利的保障。我们在使用这些既有模型的同时也应该思考怎样改良它们，使之更符合疾病的发生发展过程，使之与中医的证型更好的结合，为攻破医学上的壁垒发挥更大作用。

【】
  　　[1] Menzies-Cow A,Robinson DS.Eosinophilis eosinop:hilis cyto-kines(interleukin-5) and antieosinophilic therapy in asthma[J].Curr pin Med,2002,8:33～38.

　　[2] 张志明．真菌性抗原致变应性鼻炎豚鼠模型建立[J]．中国耳鼻咽喉头颈外科，2005，12（5）：313．

　　[3] 张秀杰，董 震，杨 占．鼻超敏反应实验模型建立[J]．中华耳鼻喉科杂志，1993，28（1）：17．

　　[4] 徐叔云，卞如廉，陈 修．药理实验方法学[M]．第2版．北京：人民卫生出版社，1994，2．

　　[5] 邱宝珊，王士贞．肾阳虚型变应性鼻炎动物模型的建立[J]．中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志，2002，10（1）：16．

　　[6] 赵 宇．卵白蛋白经鼻致敏建立变应性鼻炎动物模型[J]．中华耳鼻咽候头颈外科杂志，2005，40（3）：176．

　　[7] 余洪猛，文三立．豚草花粉变应性过敏性鼻炎豚鼠模型的建立[J]．上海实验动物，2001，21（4）：212．

　　[8] 张世平，程 靖，何步东．慢性变应性鼻炎的新型动物模型研制[J]．广东医学，2003，23（3）：246．

　　[9] 戚本明，王正强，郑明秀．维尼安治疗萎缩性鼻炎的动物实验研究[J]．华中科技大学学报（医学版），2003，32（1）：86．

　　[10] 熊大经，李 平．肺气虚慢性鼻炎模型的建立[J]．中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志，1999，7（1）：12．

　　[11] 杨聪娴，李振华，史 雪．应用NO2和雌激素建立慢性鼻炎动物模型[J]．山东大学耳鼻喉眼学报，2005，19（6）：364．

　　[12] 田勇泉，孙爱华．耳鼻咽喉——头颈外科学[M]．第6版．北京：人民卫生出版社，2004，8．