柴苓归芪汤对实验性肾病综合征大鼠脂质过氧化功能的影响

           作者：张芬芳 陈志强 张伟 范焕芳 尹智炜 丁奇峰 

【摘要】  　　目的 探讨柴苓归芪汤对脂质过氧化损伤的保护作用。 方法 SD大鼠36只随机分为模型组、辛伐他汀组、柴苓归芪组和正常组。模型组、辛伐他汀组和柴苓归芪组采用尾静脉一次性注射阿霉素5mg.kg复制肾病综合征大鼠模型，正常组注射等量0.9%氯化钠注射液。选模1周后开始灌胃，辛伐他汀组给予辛伐他汀1mg.（kg·d），柴苓归芪组给予柴苓归芪汤煎剂27g（kg·d），蚓激酶每日给予1次（2.5mg.100g，1500U.mg），共用药5周。正常组和模型组灌服等量蒸馏水。分别用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法检测血清及肾组织超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）含量。 结果 模型组血清及肾组织中SOD活性均较正常组明显降低（P<0.05，P<0.01），而MDA含量却较正常组升高（P<0.05，P<0.01），提示阿霉素肾病（AN）大鼠清除氧自由基能力降低;柴苓归芪组血清和肾组织SOD活性明显升高P<0.05，P<0.01），而MDA含量明显降低（P<0.05，P<0.01），提示柴苓归芪汤不仅能提高全身氧自由基清除能力，而且能改善肾脏局部脂质过氧化状态。 结论 柴苓归芪汤能够有效的增强肾病综合征大鼠血清及肾组织SOD活性，降低血清及肾组织MDA含量，从而提高机体抗氧化能力，减轻脂质过氧化损伤。

【关键词】  肾病综合征　大鼠　SD　脂质过氧化　超氧化物歧化酶;丙二醛

    【Abstract】 Objective To study the effect of Chailingguiqi decoction on injury of lipid peroxidation.Methods 36rat model of nephrotic syndrome were duplicated by injection of Adriamycin.Rats were divided into model group，Simvastatin group，Chailingguiqi decoction group and control group.Rats in model sroup and control group were tabken by distilled nater.Rats in Simvasfatin group and Chailimgguiqi group administrated separately Simvastatin（1mg.（kg·d））and Chailing-guiqi decoction.The contents of SOD and MDA in serum and tissue were detected by method of xanthinoxidase and thio-bar-bitone.Results SOD activity in serum and tissue in model group were decreased compared with those in control group.The content of MDA in serum and tissue in model group were increased compared with those in control group.The results showed that Adriamycin-induced nephropathy rat loss ability of removing oxygen free radical.SOD activity in serum and tis-sue in Chailingguiqi decoction group were increased.The content of MDA in serum and tissue in Chailingguiqi decoction group were decreased.Conclusion Chailingguiqi decoction can effectively increase SOD activity in serum and tissue and

    decrease content of MDA in serum and tissue，then elevate ability of antioxygen free radical.

    【Key words】 Nephrotic syndrome;Lipid peroxidation;SOD;MDA

    自由基是肾小球损伤的重要介质 ［1］ 。近年来，有关氧化损伤、氧自由基对肾脏损伤的机制备受关注［2～3］ 。我们已从实验研究证实了柴苓归芪汤通过降低血脂、减少蛋白 尿，保护阿霉素肾病（AN）大鼠的肾功能［4］ 。AN大鼠模型是经典的实验性肾病综合征大鼠模型，本研究采用该型 ［5］ ，观察柴苓归芪汤对AN大鼠血清及肾组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影响，探讨其对脂质过氧化损伤的保护作用。

　　1 材料与方法

    1.1 实验动物与药物

    1.1.1 实验动物 选用清洁级健康雄性SD大鼠36只，体重为（180±10）g，由河北医科大学动物中心提供（编号DK0311-0102）。

    1.1.2 实验用药 阿霉素:由汕头特区明治医药有限公司生产（批号:020702），10mg.支。柴苓归芪汤（由柴胡10g、黄芩10g、当归15g、黄芪30g、茯苓15g、猪苓12g地龙等组成）按比例称取后，水煎、过滤、浓缩，每mL含生药1.8g。鉴于地龙中主要活性成分蚓激酶在65℃以上酶活性开始下降，85℃30min酶活性完全丧失 ［6］ ，不能入煎剂，故用其提取物蚓激酶替代地龙冲服。蚓激酶:由北京百奥药业有限责任公司生产（批号:20030706），30万单位.粒;辛伐他汀:由杭州默沙东制药有限公司生产（批号:N1027），10mg.片。SOD、MDA试剂盒:南京建成生物工程研究所。

    1.2 模型制备、分组与给药 实验动物用普通饲料适应性喂养1周后，分别置于代谢笼里取尿，检测尿蛋白和尿红细胞，结果全部为阴性。按体重随机分为正常组、模型组、辛伐他汀组和柴苓归芪组。正常组为6只，其他3组均为10只。模型组、辛伐他汀组、柴苓归芪组按5mg.kg进行一次性尾静脉注射阿霉素，正常组注射等量0.9%氯化钠注射液。造模1周后开始灌胃，辛伐他汀组给予辛伐他汀1mg.（kg·d）;柴苓归芪组给予柴苓归芪汤煎剂27g.（kg·d），用药量为成人剂量的15倍;蚓激酶用量按报道每日给予1次（2.5mg.100g，1500U.mg）［7］ 。共用药5周。正常组和模型组灌服等量蒸馏水。

　　1.3 血清及组织制备

    1.3.1 血清制备 在实验第7周末用10%水合氯醛按30mg.kg的剂量将大鼠腹腔注射麻醉，心脏采血，离心，取血清备用。

    1.3.2 肾组织匀浆制备 在实验第7周末杀检动物，取部分肾组织液氮冻存。取适量冻存的肾组织，在0℃用0.9%氧化钠注射液漂洗，滤纸拭干，称重。用0.9%氯化钠注射液做匀浆缓冲液，制成10%组织匀浆。将玻璃匀浆器置于冰水中，上接电动匀浆机充分研碎组织，使组织匀浆化。匀浆液于4℃，15000r.min，离心30min。取上清液-70℃冰箱冻存备用，行SOD、MDA检测。

　　1.4 检测项目与方法

    1.4.1 血清SOD、MDA检测 SOD检测用黄嘌呤氧化酶法，MDA检测用硫代巴比妥法，严格按照试剂盒操作规程进行。

　　1.4.2 肾组织SOD、MDA检测 测定方法同血清。但肾组织SOD、MDA测定结果须用上清液中蛋白质含量进行校正。蛋白质测定按福林-酚法（Lowry氏法）进行。

    1.5 统计学处理 使用SPSS10.0for windows统计软件，所有数据均用均数±标准差（ˉx±s）表示，采用单因素方差分析法对实验结果进行统计学分析。

　　 2 结 果

    2.1 动物死亡情况 正常组在实验中未出现死亡;辛伐他汀组于实验第6周死亡1只，模型组和柴苓归芪组于实验第7周各死1只，可能是由于尾部感染所致。尾部感染与注射部位阿霉素渗漏引起局部缺血坏死有关。

　　 2.2 各组大鼠血清SOD、MDA的测定 见表1。 表1 各组大鼠血清SOD、MDA的比较由表1可见，模型组大鼠血清SOD活性明显低于正常组（P<0.01），MDA含量明显高于正常组（P<0.01），提示AN大鼠全身抗氧化功能受损，存在脂质过氧化损伤;辛伐他汀组与模型组相比，SOD活性明显增强（P<0.05），MDA含量显著降低（P<0.01），表明柴苓归芪汤和辛伐他汀有抗氧化损伤作用。辛伐他汀组与柴苓归芪组比较差异无统计学意义（P>0.05）。

    2.3 各组大鼠肾组织SOD、MDA测定 见表2。表2 各组大鼠肾组织SOD、MDA的比较 由表2可见，模型组大鼠肾组织SOD活性明显低于正常组（P<0.01），MDA含量明显高于正常组（P<0.05），提示AN大鼠肾组织中抗氧化功能受损，存在过氧化损伤;柴苓归芪组和模型组相比，肾组织中SOD活性明显增强（P<0.05），MDA含量显著降低（P<0.05）;而辛伐他汀组和模型组相比，虽然SOD数值有所升高，MDA数值有所降低，但无统计学意义。提示在肾组织中柴苓归芪汤抗氧化损伤作用优于辛伐他汀。

　　 3 讨 论

    NS属于中医学水肿范畴。其形成机理与正气不足，气滞、血瘀、水停等有关。治宜行气利水，益气活血，化瘀通络。柴苓归芪汤就是在此法指导下，结合中药药理，由柴苓汤（NS水肿、蛋白尿的效方）和补阳还五汤（抗凝、降脂的效方）加减化裁而成，旨在从多方位、多靶点治疗NS。本实验中，我们用柴苓归芪汤进行干预性治疗，结果表明:柴苓归芪汤能够有效的增强AN大鼠血清及肾组织SOD活性，降低血清及肾组织MDA含量，从而提高机体抗氧化能力，减轻脂质过氧化损伤。

    自由基及其所引发的脂质过氧化反应，在肾脏疾病中发挥着重要作用。在正常情况下，机体内有低分子清除剂（如维生素E）和复合酶系统（如SOD），其抗氧化能力与不断产生的氧自由基的氧化能力之间保持着动态平衡，不会引起组织损伤 ［8］ 。若自由基产生异常增多或肾脏的抗氧化能力下降，出现脂质过氧化反应，将导致肾组织细胞损伤，出现肾小球内皮细胞肿胀，上皮细胞足突融合，肾小球基底膜降解一系列病变［9］ ，从而加重蛋白尿。肾病综合征时，过量脂质沉积于肾脏系膜区，内皮细胞、肾小球系膜细胞均能通过活性氧分子修饰低密度脂蛋白，使氧化的低密度脂蛋白（OX-LDL）更具肾毒性。这种过氧化的脂质及其过氧化产物（如MDA）能从多方面加重肾小球硬化和间质纤维化的进程。同时OX-LDL能使引起肾损伤的氧自由基增加，形成肾损伤的恶性循环。自由基和不饱和脂肪酸作用而引发脂质过氧化反应，由于脂质过氧化物的形成使膜受体、膜蛋白酶和离子通道的脂质微环境改变，从而也使其功能改变 ［10］ 。MDA是脂质过氧化的终产物之一，其生成与脂质过氧化平行，MDA的含量可代表脂质过氧化程度，并能从多方面加重肾小球硬化的进程。SOD是高效清除剂，可专一清除超氧阴离子，减少MDA的形成，维持机体正常生理功能，SOD浓度及活性降低必将引起自由基所致的细胞损伤。

    本实验中，我们不仅对血清SOD活性、MDA的含量进行了测定，而且对肾组织局部SOD的活性、MDA的含量进行了定量分析。结果表明:AN大鼠血清及肾组织中SOD活性均较正常组明显降低，而MDA含量却较正常组升高，提示AN大鼠清除氧自由基能力降低，脂质过氧化可能参与肾脏疾病进展，与国外学者研究结果一致［11］ 。柴苓归芪组血清和肾组织SOD活性明显升高，而MDA含量明显降低，提示柴苓归芪汤不仅能提高全身氧自由基清除能力，而且能改善肾脏局部脂质过氧化状态，并减少OX-LDL的形成，减轻OX-LDL肾毒性。方中柴胡、黄芩、黄芪、当归均具有清除氧自由基的作用  ［12～14］ 。提示本方抑制脂质过氧化的机理，与这些药物可提高氧自由基清除剂SOD活性、阻止或清除氧自由基的产生、抑制脂质过氧化有关。这一作用使肾小球细胞和组织免受脂质过氧化的破坏，从而保护了基底膜和组织结构的完整性，改善了脂质微环 境，提高机体抗氧化能力，减轻脂质过氧化损伤。

【】
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