S100A4和E?cadherin在上皮性卵巢肿瘤中的表达及意义

             作者：邢兰瑛, 韩志红, 刘敏, 蔡东阁, 方晓荷 

【摘要】  目的： 研究S100A4蛋白和上皮钙粘蛋白（E?cadherin，E?cad）在人类上皮性卵巢肿瘤中的表达情况，探讨并分析两者与上皮性卵巢癌的浸润、转移发生的关系及其生物学意义. 方法： 采用免疫组织化学法SP法检测S100A4蛋白和E?cad在上皮性卵巢肿瘤中的表达与分布，结合临床病理情况分析两者与临床病理参数之间的关系. 结果： 上皮性卵巢癌中S100A4的表达率比卵巢良性肿瘤和上皮性卵巢交界性肿瘤中的表达率增高（P<0.05)；S100A4在上皮性卵巢癌中的表达与组织学分级、有无转移、有无腹水有关（P<0.05），与临床病理分期无关（P>0.05）；E?cad在上皮性卵巢癌的表达与临床分期、有无转移、有无腹水有关（P<0.05），而与组织学分级无关(P>0.05)；S100A4, E?cad在上皮性卵巢癌中的表达与有无绝经、肿瘤大小、临床病理类型无关（P>0.05）；上皮性卵巢癌中S100A4和E?cad的表达呈负相关（r=－0.385，P<0.05）. 结论： S100A4和E?cad的相关表达与上皮性卵巢癌的发生关系密切，是判断上皮性卵巢癌生物学行为、预测侵袭转移的重要指标.

【关键词】  卵巢肿瘤；S100A4；钙粘着糖蛋白类；肿瘤转移

　　【Abstract】AIM：To study the expressions of  S100A4 and E?cadherin(E?cad) in human epithelial ovarian tumor，and to explore its roles in ovarian carcinoma invasion and metastasis and its biological significance. METHODS:  The expressions of S100A4 and E?cad were detected by S?P immunohistochemistry in histological section of ovarian tumor, and the relationship between the results and clinical pathological parameters were assessed. RESULTS:  The expression rate of S100A4 in epithelial ovarian carcinoma was higher than that in borderline cystadenoma and benign tumors and normal ovarian tissues（P<0.05）. The expression of  S100A4 had a relation  with histological grade, metastasis and ascites of the ovarian cancer(P<0.05), but it had no association with clinical stages（P>0.05）. The expression of  E?cad had a relation  with clinical stages, metastasis and ascites of the ovarian cancer(P<0.05), but had no association with histological grade（P>0.05）.The expressions of S100A4 and E?cad had no correlation with pathologic types，tumor  size  and menopause. The negative correlation was observed between S100A4 expression and E?cad expression (r=-0.385, P<0.05) CONCLUSION:  The correlated expression of S100A4 and E?cad is closely related to the development of epithelial ovarian carcinoma，which is valuable markers in predicting biological behavior and trend of metastasis in epithelial ovarian carcinoma.

　　【Keywords】 ovarian neoplasms; S100A4;  cadherins; neoplasm; metastasis

　　0引言

　　侵袭和转移是恶性肿瘤患者死亡的重要原因，肿瘤的转移包括细胞骨架的丢失、癌细胞的脱落等过程，此过程与E?cad和转移相关蛋白S100A4有非常密切的关系. S100A4蛋白是最近从S100蛋白家族筛选的一个与恶性肿瘤预后相关的一个因子［1］，E?cad分布于细胞?细胞黏附连接处，是介导相邻细胞的同型黏附，其异常表达促使恶性肿瘤的转移［2］. 我们探讨S100A4和E?cad的表达与上皮性卵巢癌的侵袭转移之间的关系，为临床上上皮性卵巢癌的诊断、预后评估提供依据.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　标本取自陕西省妇幼保健院和渭南市中心2004?01/2007?03手术切除的上皮性卵巢肿瘤48例，均经40 g/L甲醛固定、常规脱水、包埋. 其中良性上皮性卵巢肿瘤10例（浆液性囊腺瘤6例，黏液性囊腺瘤4例），交界性卵巢肿瘤8例（浆液性交界性囊腺瘤5例，黏液性交界性囊腺瘤3例），上皮性卵巢癌30例（浆液性卵巢癌18例，黏液性卵巢癌12例），在卵巢癌患者中，所有患者术前均无化疗放疗及免疫治疗史，无烟酒毒物接触史，无癌症家族史，按照国际妇产科联盟（FIGO）2000年标准，其中Ⅰ期6例，Ⅱ期8例，Ⅲ期9例，Ⅳ期7例；组织学分级：按WHO分级标准：其中Ⅰ级10例，Ⅱ级8例，Ⅲ级12例，并取同时期手术因其他良性疾病而切除的正常卵巢组织6例，所有患者年龄在30~69岁之间.

　　1.2方法

　　S100A4多克隆抗体和E?cad mAb购自北京中杉生物技术公司，组化染色按SP试剂盒提供的说明书进行，中杉公司提供的阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗行阴性对照. 每张切片随机选择5个高倍视野，采用半定量计分法判定结果［3-4］. E?cad以胞膜呈黄色或棕黄色为阳性细胞，按阳性细胞所占比例阳性细胞百分数，膜着色连续清楚且阳性细胞数>75%定义为4分，着色淡不连续且阳性细胞数50％～75%定义为3分，阳性细胞数25％～50％定义为2分，阳性细胞数<25%为1分，着色为棕黄色为3分，着色为黄色为2分，着色为淡黄色为1分，基本不着色为0分，>10%的细胞质或胞核出现棕黄色颗粒定义为异位表达，将每张切片平均着色程度得分与平均着色细胞百分率得分相乘为其最后得分，总分≥6者为阳性表达，总分＜6者为膜表达减弱，膜表达减弱或异位表达统一定义为阴性表达. S100A4的染色结果判定：S100A4以胞质或胞核出现黄色颗粒为阳性细胞，高倍镜下将阳性细胞数＜10%为1分，阳性细胞数在10%~50%为2分，阳性细胞数＞50％为3分，将＜3分者为S100A4阴性表达，等于3分为阳性表达.

　　统计学处理：采用统计学软件SPSS11.5进行分析，样本率的比较用χ2检验或Fisher确切概率法，S100A4与E?cad表达的相关性分析用Spearman等级相关法，P＜0.05为有统计学意义.

　　2结果

　　2.1S100A4及E?cad在正常卵巢组织和上皮性卵巢肿瘤中的表达S100A4在胞质中表达，E?cad在胞膜中表达，且都在相应部位呈棕黄色或棕褐色. S100A4和E?cad在正常卵巢组织无表达，E?cad表达从良性组、交界性组、恶性组呈逐渐减低的趋势，而S100A4呈现逐渐升高的趋势，恶性组分别与良性组交界性组间有统计学差异（P<0.05，表1，图1）. 表1S100A4和E?cad在上皮性卵巢肿瘤中的表达（略）

　　2.2S100A4，E?cad的表达与上皮性卵巢癌临床病理参数的关系S100A4的表达与组织分化、有无腹水、转移有关（P<0.05）；而与其他参数无关（P>0.05）；组织分化越低，S100A4的表达越高（P<0.05）；虽然S100A4在晚期卵巢癌的表达比早期卵巢癌增高，但无统计学意义（P>0.05）；E?cad的表达与临床分期、有无转移以及有无腹水有关（P<0.05, 表2).表2S100A4和E?cad表达与上皮性卵巢癌临床病理参数的关系（略）

　　2.3S100A4和E?cad表达的相关性30例上皮性卵巢癌组织中S100A4阳性表达和E?cad阴性表达的共有 15 例，相关性分析结果显示，卵巢癌组织中S100A4和E?cad的表达呈负相关(r=-0.385，P＜0.05）.

　　3讨论
 
　　S100A4是一个与恶性肿瘤侵袭、转移等病理过程密切相关的蛋白，Kerisebilck等［5］报道S100A4基因转染小鼠乳腺细胞系后，细胞E?cad基因的表达减低，且细胞中catenin分布状态发生紊乱，使E?cad不能正常介导同型细胞间的黏附，肿瘤细胞易脱离母体肿瘤而发生转移. S100A4蛋白以共价键二聚体和非公价键二聚体存在于体内，以共价键二聚体存在于细胞间质中的S100A4蛋白的存在是细胞间信号传导，细胞与细胞基质相互作用的基础，也是肿瘤细胞侵袭和转，也是肿瘤细胞侵袭和转移的病理基础［1］. Cho等［6］研究发现S100A4的表达与结直肠癌的肿瘤分期及淋巴结转移率密切相关，但与肿瘤的定位、大小及患者的生存时间无关. 随后对癌组织进行S100A4基因突变的检测，结果无S100A4基因突变的存在.
　　Jenkinson等［7］研究发现S100A4蛋白的表达与细胞的异常增生及肿瘤的发生、有关. 本试验研究结果显示S100A4的阳性表达与临床分期无关，虽然有报道S100A4在肺癌、结直肠癌的表达与临床分期有关，但与Kikuchi等［4］的研究结果一致，而且在Kikuchi 的研究中发现对于同一期别的卵巢癌患者，S100A4在胞核的表达越高，与无胞核表达的组织相比，患者的生存期明显缩短，特别是对于Ⅰ/Ⅱ期的卵巢癌患者.

　　现有研究表明E?cad表达变化可能与以下机制有关，如E?cad基因突变，基因启动子的甲基化，基因启动子上单个核苷酸的多态性以及肿瘤部位的蛋白酶活性升高等［8］. 本研究证实正常卵巢上皮细胞不表达E?cad，而在卵巢良性肿瘤中E?cad表达增高，可能E?cad在卵巢新生物的形成及向恶性发展过程中行使某种功能［9］. 本研究中我们发现E?cad的阳性表达与临床分期有关，分期为Ⅰ,Ⅱ期者表达高于Ⅲ,Ⅳ期，表明E?cad与肿瘤的浸润、转移有关. E?cad表达下调将使同种细胞失去黏附，正常组织不能发育成形. 对于恶性肿瘤而言则细胞极性丧失、呈现恶性细胞形态并具备侵袭性生长的特性. 当E?cad活性正常瘤细胞不易从原发灶上脱落下来，而当E?
　　cad失活导致细胞间黏附作用下降和极性紊乱，促使肿瘤的转移［10］. 研究发现，在膀胱癌、肺癌、肾癌、大肠癌等大多数肿瘤中均有E?cad的表达减弱或缺失，且与肿瘤的临床分期，组织分化、浸润转移及复发有密切关系，是预示肿瘤进展及预后的重要指标之一［11］，本试验中我们发现分化程度低者，E?cad的阳性表达也偏低，但无统计学意义，可能与我们的结果判断标准不同有关. 我们研究发现E?cad在恶性肿瘤中部分在胞质表达可能是无功能的E?cad经蛋白水解，产物释放入胞质所致. 虽然S100A4和E?cad的表达呈负相关有待进一步研究，但S100A4可能通过肌动蛋白细胞骨架动力促进细胞运动，引起E?cad表达下调，使其不能介导同种细胞的黏附，使肿瘤细胞脱离母体肿瘤而发生转移［12］.

　　近几年对S100A4蛋白与肿瘤生物学行为的研究已受到重视，其在多种肿瘤的研究已相继开展，然而S100蛋白促肿瘤发生发展作用的具体机制尚未完全阐明，有待进一步研究. S100A4蛋白和E?cad的关系密切，可能成为判断肿瘤预后的一个指标，为指导临床提供一定的依据.

【】
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