黄芩茎叶总黄酮对大鼠气囊滑膜炎抗炎作用机制的研究

【摘要】  研究黄芩茎叶总黄酮的抗炎机制。方法：制作大鼠气囊滑膜炎模型，测定各组大鼠炎性渗出物中蛋白质总量。采用酶联免疫分析方法，定量检测白三烯（LTB4 ）的生成量。结果：黄芩茎叶总黄酮组可明显抑制炎性渗出物中蛋白质及LTB4的生成。结论：黄芩茎叶总黄酮的抗炎作用机制与抑制5?脂氧合酶活性有关。

【关键词】  黄芩茎叶总黄酮 抗炎 蛋白质总量 白三烯B4

    AbstractObjective:To study the mechanism of the anti?aerocyst arthromeningitis effect of total flavonoids of Baical Skullcap Stem and Leaf.Methods:Rat model of aerocyst arthromeningitis was made and the total proteins and leukotriene B4 in the rat inflammatory exudates using enzyme?linked immuno assay were determined.Results: Total flavonoids of Baical Skullcap Stem and Leaf could effectively inhibit the formation of LTB4 in polymorphonuclear leucocytes.Conclusion:Its anti?inflammatory action might be resulted from its inhibition of 5?lipoxygenase.

    Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓtotal flavonoids of Baical Skullcap Stem and Leaf; anti?inflammatory action; total protein amount;leukotriene B4

    承德的野生黄芩因为质地坚实，颜色纯正，成为中药材的优势产品。以其根入药，中医认为黄芩味苦性寒，入肺、心、胆、大肠经，有清热燥湿、泻火解毒、安胎的功能。从黄芩茎叶中提取的黄芩茎叶总黄酮，实验研究已经证实它具有很强的抗炎作用[1]，本试验将进一步对其抗炎机制进行探讨，以期为黄芩茎叶总黄酮的开发利用提供试验依据。

    1  材料与方法

    1.1  实验动物  健康雄性Wistar大鼠，体重180～200g，由沈阳医学院实验动物中心提供。

    1.2  药品与试剂  黄芩茎叶总黄酮，纯度为66.78％ 的粉剂，由承德医学院中药研究所提供；LTB4大鼠检验试剂盒（美国ADL）；醋酸、Hank's液、乙醚、磷酸缓冲液(pH=7.4)实验室配制。

    1.3  实验仪器  全自动酶标仪（西班牙 TRITURUS）；日立7170全自动生化分析仪；德国SIGMA高速台式冷冻离心机。

    1．4  实验方法[2]  随机将大鼠分成3组，对照组、实验组1（小剂量黄芩茎叶总黄酮）、实验组2（大剂量黄芩茎叶总黄酮）。于实验第1天在各组大鼠背部皮下注射经过滤器过滤的空气20ml，使大鼠背部形成气囊，待第3天在原气囊处再注射经过滤器过滤的空气20 ml，同时于当天各组大鼠开始腹腔注射给药，实验组1给予黄芩茎叶总黄酮60mg／kg,实验组2给予黄芩茎叶总黄酮180mg／kg，对照组给予缓冲液，连续给药3d。实验第6天在各组大鼠背部皮下注射经过滤器过滤的空气l0 ml后，再在气囊内注射2％甲醛1.5 ml致炎。在致炎24 h后的急性炎症期，将大鼠断头处死，用Hank's液1 ml灌洗气囊，收集灌洗液，离心3 000r/min，分别收集上清液，供各项指标测定。渗出液中蛋白质测定应用日立7170全自动生化分析仪。LTB4测定用酶免试剂盒，严格按照试剂盒说明书操作。

    1.5  统计学方法  数据以均值±标准差（x±s）表示，各组比较采用方差检验，以P<0.05为差异有显著性。

    2  结果

    渗出液中蛋白质和LTB4测定结果见表1。表1  气囊滑膜炎大鼠模型炎性渗出物中 炎症物质含量注：1)与实验组2比较，P＜0.05，2）与对照组比较，P＜0.01

   3  讨论

    机体损伤、感染和自身免疫性疾病等均程度不等地伴有急慢性炎症过程，炎症是机体清除异物和自身伤亡细胞的一种防御反应。研究认为，在炎症反应递质中花生四烯酸(arachidonicacid,AA)的氧化旁路起着关键作用。这条旁路经环氧酶和5?脂氧酶两条途径分别代谢产生的产物即前列腺素(PGs)、白三烯(LTs)等炎症递质[3]。其中前列腺素E2(PGE2)可增加血管通透性，LTB4可致白细胞趋化、聚集、脱颗粒和产生超氧阴离子，引起和加重炎症反应。经典的非甾体抗炎药物如阿司匹林主要抑制环氧酶途径，能有效阻断花生四烯酸5?脂氧合酶途径代谢的抑制药尚不多见。

    本研究观察黄芩茎叶总黄酮对大鼠气囊滑膜炎的抗炎作用，结果表明：（1）黄芩茎叶总黄酮可降低毛细血管通透性，血管内的蛋白质成分向组织内渗出减少；中性粒细胞和嗜碱性粒细胞在组织中聚集减少；组胺、缓激肽增加血管通透性的物质减少,有利于炎症中血管通透性恢复正常。（2）通过比较可看出，黄芩茎叶总黄酮的抗炎效果与剂量大小有关，其作用具有剂量依赖性。故黄芩茎叶总黄酮具有很强的抗炎作用。

    LTB4可激活中性白细胞的多种反应，其中包括加速炎症介质的产生，并可促进中性白细胞在微血管内皮粘着，进而渗出血管，协同其它趋化因子使炎症反应扩大。它在依赖中性白细胞的炎症反应中起着一种内在放大器的作用，因此寻找LTB4生物合成的有效药物受到重视，为此我们研究了黄芩茎叶总黄酮对LTB4生物合成的影响，以探讨其抗炎作用机理。本实验证明黄芩茎叶总黄酮对炎症过程中炎性介质LTB4的生成具有明显的抑制作用，药效与剂量大小相关，其作用具有剂量依赖性。由此提示此药能有效阻断花生四烯酸5?脂氧合酶代谢途径，发挥其强大的抗炎作用，且随着剂量的增大，抗炎作用亦随之增强。这一抗炎机理有别于抑制环氧酶途径，故黄芩茎叶总黄酮对炎症的有很高的应用价值和广阔的开发前景。

【】
  ［1］王玮，吴莹瑶，卢瑶，等.野黄芩甙抗炎作用的实验研究[J].医科大学学报，2003，32（6）：503-504.

［2］徐叔云.药理实验方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社,1993.659-722.

［3］陆原，何敬远，陈达灿，等.咪唑斯汀抑制多形核细胞白三烯LTB4合成的实验研究[J].临床皮肤科杂志，2005，34（11）：738-739.