运脾方对小鼠吞噬指数作用的研究
作者：李海涛 孙远岭 周纬 奚政君 杨珍
【摘要】 研究运脾方对免疫功能的调节作用，探讨运脾方增强免疫的作用机理。［方法］设立正常组、模型组、阳性对照组（消食健儿糖浆组）、运脾方大、中、小剂量组，测定正常小鼠免疫器官指数、吞噬指数与吞噬活性。［结果］运脾方大、中剂量组小鼠的吞噬指数及吞噬活性明显增强。［结论］提示运脾方对小鼠的免疫功能有上调作用。
【关键词】 运脾方 厌食症 巨噬细胞 小鼠 动物实验 儿童
Abstract:［Objective］ Study effect of Yun?Pi Prescription on regulating the immune function, approach the mechanism of Yun?Pi Prescription on how to enhance immune function. ［Method］All the mice were divided into groups: the normal group, the model group, the positive control group treated with Xiao Shi Jian Er Syrup, and Yun?Pi Prescription treatment groups including high, middle and low dose; determine the index number of immune organ, phagocytic count and phagocytize activity of normal mice. ［Results］The high and middle dose of Yun?Pi Prescription can obviously enhance the phagocytic count and phagocytize activity, Yun?Pi Prescription has an up?regulation effect on immune function.
Key words:Yun?Pi Prescription; anorexia; macrophage; mice; animal experiment; children
运脾方是上海中医药大学孙远岭教授儿童厌食症的有效验方，主要由黄芪、白术、煅龙骨、炒麦芽等组成。具有益气健中、运脾和胃之功效。临床应用治疗儿童厌食症、反复呼吸道感染儿童(复感儿) 等，能显著提高患儿食量，增进食欲，减少呼吸道感染次数及天数，减轻呼吸道感染程度。本研究通过测定小鼠的脏器系数及其碳廓清能力，探讨运脾方对免疫作用之机理，为其临床应用提供理论依据。
1 材料
动物：KM小鼠，雄性，体重22±2g，SPF级，由中科院上海实验动物中心提供，检疫后备用。药物及试剂：运脾方按国家药典规定加工为糖浆制剂，由本院制剂室提供。临床日服剂量按1ml/kg计，设大、中、小3个剂量组，相当于临床日用量的20、10、5倍。阳性对照药物：消食健儿糖浆，由四川豪运药业股份有限公司生产。临床日服剂量按1ml/kg计，试验时给药剂量为20ml/kg（相当于临床日服剂量的20倍）。印度墨汁为北京第二化工厂生产。主要仪器：塞多利斯BS124S天平，德国；UNICO WFZ UV?2102C 紫外?可见分光光度计，中美合资。XSP-6C双目生物显微镜，。
2 方法
2.1 运脾方对正常小鼠免疫器官重量和碳粒廓清能力的影响 取体重22±2g小鼠60只，雌、雄各半，随机分成正常组、阳性对照组、运脾方大、中、小剂量组，每组12只。按组分别灌服蒸馏水，消食健儿糖浆，运脾方糖浆制剂，连续给药7天。于末次给药后1h用印度墨汁法测RES吞噬活性，尾静脉注射印度墨汁0.1ml/10g体重，注射后2min、12min用毛细管从眼眶后静脉从取血20μl，溶于2ml0.1％Na2CO3溶液调零；将小鼠颈椎脱臼处死后，摘取肝脏和脾脏，称重。脏器系数，吞噬指数K和吞噬活性a的均值±标准差。
吞噬指数K=(logOD1–logOD2)/(t2–t1)
( 上式中OD1 、OD2 为不同时间所取血样的光密度，t2～t1为取两血样的时间差 )
吞噬活性a=K1/3*体重/（肝重量+脾重量）；脏器系数=器官重量/体重。
2.2 统计学方法 数据计算均数±标准差，采用单因素方差分析，用SPSS11.5进行统计处理。
3 结果
结果表明，小鼠连续灌服运脾方药液7天，与正常组比较后，有显著性差异。脏器系数有增大趋势，但统计学无显著差异；大、中剂量组吞噬指数K及吞噬活性a与正常组比较，有显著差异见表1。
4 讨论
《金匮要略》指出：“四季脾旺不受邪。”脾气健运，化源充足，气血旺盛,脏腑形体四肢百骸得养，正气充盛,抗病力强。腠理固密，则生机勃勃；反之，脾虚失运，化源匮乏，气血无由以生，脏腑形体四肢百骸失养，正气亏衰,抗病力弱，腠理疏松，不耐邪侵而患诸疾。脾虚证与免疫器官、非特异性免疫、体液免疫、细胞免疫、细胞因子、分子免疫以及免疫遗传学等方面异常改变均有极为显著的相关性［1］。运脾对胸腺组织结构有较显著的恢复作用,可提高Ig、SOD 的含量，促进胸腺组织结构恢复等作用,从而显著提高脾虚大鼠免疫功能［2］。
表1 运脾方对小鼠免疫器官指数、吞噬指数K和活性a的影响（略）
与正常组比较,*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001
单核巨噬细胞系统(网状内皮系统，reticuloendothelial system, RES)是机体非特异性免疫系统的重要组成部分。因能迅速清除多种致病物质，是维持机体内环境稳定的一个最重要的系统。巨噬细胞是免疫细胞的一种，具有多 种免疫功能如吞噬和杀伤多种病原微生物、处理和呈递抗原、分泌细胞因子(IL?1、IL?6、IL?8、IL?12、TNF?α)、表达共刺激分子以加强 与T细胞的相互作用等方式参与免疫反应，在炎症、感染和肿瘤等许多疾病过程中发挥了重要的作用。其吞噬机能是反映动物非特异性免疫功能的主要指标之一，在一定范围内，体内碳颗粒被清除速率与血碳浓度呈指数函数关系［3］。巨噬细胞作为一种重要的抗原呈递细胞，在脾脏中所占比例的变化，可一定程度反映机体的免疫应答状况。研究发现，补气中药能使小鼠脾脏巨噬细胞的比例上调，提示补气中药对巨噬细胞有一定的活性作用，而运脾方主要成分中含有白术、黄芪等补气健脾中药，经合理配伍，对小鼠巨噬细胞的活性作用影响更为明显。本文研究结果发现运脾方大、中剂量能够增加小鼠吞噬指数和吞噬活性，加快碳粒廓清的速度，提示运脾方可能通过提高机体非特异性免疫的途径，增强免疫力，提高机体对有害刺激的防御作用。
【】
［1］ 修宗昌,余绍源,黄穗平.脾虚免疫学机制［J］.中医药信息杂志,2003,10(4)：10?13.
［2］ 孙远岭,奚政君,周纬,等.运脾治疗对脾虚大鼠免疫功能的影响［J］.中国中医药信息杂志,2005,12(12):27?28.
［3］ 中华人民共和国卫生部.保健食品检验和评价技术规范［M］,北京：中科多媒体出版社，2003：28.
