生存素在乳腺癌组织的表达及其意义
作者：郑朝辉， 王川， 张祥福， 卢辉山， 黄昌明
【摘要】 目的研究凋亡抑制蛋白生存素在乳腺癌组织中的表达及其临床病意义。方法采用免疫组织化学（SP法）检测106例乳腺癌组织中的生存素表达，采用TUNEL方法检测乳腺癌细胞的凋亡指数，分析生存素表达与临床病理因素的关系。结合随访资料，应用Kaplan?Meier法分析生存素表达对乳腺癌生存率的影响。结果生存素表达总阳性率64.2%（68/106例）。乳腺癌生存素表达与腋窝淋巴结转移相关，与病人年龄、肿瘤大小、病理类型、激素受体状况、病理分期等因素统计学分析无相关性。生存素表达与细胞的凋亡指数及患者预后负相关。结论生存素在乳腺癌组织中存在高表达，在正常乳腺组织中不表达；其表达程度与乳腺癌腋窝淋巴结转移、细胞的凋亡率有关。生存素可作为乳腺癌预后判断的辅助指标。
【关键词】 乳腺肿瘤； 生存素； 预后； 免疫组织化学； 微管相关蛋白质类
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，全世界每年有120万妇女发生乳腺癌。生存素(survivin)是一种凋亡调控因子，属于凋亡抑制蛋白家族[1]。生存素通过抑制细胞凋亡，与细胞增殖、分裂和细胞周期调控密切相关，其表达与某些肿瘤的发生和转移有一定关系，可作为这些肿瘤判断预后的指标之一[2?5]。笔者研究旨在探讨作为凋亡抑制蛋白生存素的表达与乳腺癌临床病理学特征和预后的关系。
1对象和方法
1.1对象106例乳腺癌患者为福建医科大学附属协和肿瘤科1990?1998年手术病例，有完整的临床病理资料。乳腺癌病理分期采用UICC1997年的TNM分期[6]：I期33例，Ⅱ期37例，Ⅲ期36例。所有患者均为女性，年龄（48.5±6.1）岁（31～68岁）。根据WHO乳腺肿瘤组织学分类（2003年）[6]：非浸润性癌（包括导管原位癌和小叶原位癌）25例，浸润性癌81例。患者术后的辅助措施如下：均予CAF（环磷酰胺＋阿霉素＋5?氟脲嘧啶）方案化疗6个周期，雌激素受体（ER）阳性患者68例均予三苯氧胺内分泌治疗。术后随访率为100%，随访时间9～122个月。手术切除标本的石蜡组织块均重新制备4 μm连续切片，贴于涂有0.05%多聚赖氨酸的载玻片备用。
1.2试剂鼠抗人生存素单克隆抗体（克隆号D?8，工作浓度1∶100,美国Santa Cruz公司，购自北京中山生物公司）；即用型免疫组织化学超敏SP试剂盒、原位细胞凋亡检测试剂盒、DAB染色试剂盒(福州迈新生物技术有限公司)。
1.3方法SP法检测上述所有标本生存素表达情况，阳性标准参照[3]。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)方法检测乳腺癌细胞的凋亡指数(apoptosis index, AI)。公式为：
AI=TUNEL阳性细胞数/检测细胞总数×100%
1.4观察指标研究乳腺癌组织中生存素表达的特点及其与各项病理指标的相关性、与乳腺癌细胞AI和乳腺癌预后的关系。
1.5统计学处理采用SPSS 10.0统计软件包。生存素表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系比较采用χ2检验；生存率统计用Kaplan?Meier法，用Log?rank法比较各组生存曲线有无差异。AI用x±s表示，用t检验进行显著性检验。P＜0.05为差别有统计学意义。
2结果
2.1生存素表达主要定位于乳腺癌细胞的细胞质部位，呈棕黄色云雾状或颗粒状（图1）。106例中表达阳性者68例（64.2%）。
2.2生存素表达与乳腺癌临床病理指标的关系
2.2.1临床指标生存素表达与病人年龄、肿瘤大小、病理类型、ER受体状况、病理分期等因素无相关性。
2.2.2有无淋巴结转移腋窝淋巴结转移60例，49例生存素表达阳性（81.7%）；无腋窝淋巴结转生存素阳性染色主要位于癌细胞细胞胞质，呈棕黄色.
2.2.3AI凋亡细胞分散于癌细胞间，游离于间质或腺腔内，凋亡小体多被癌细胞吞噬，凋亡细胞胞体变小与周围癌细胞分离，细胞核或细胞质同时呈紫蓝色着色，染色质凝聚于核膜下或固缩成团块（图2）。106例AI为（1.21±0.32）%。生存素表达阳性者AI为（0.56±0.48）%，阴性者为（3.06±0.21）%，两者差别有统计学意义(P<0.01)。
2.3预后全部患者均获随访，随访时间9?122个月。5年总生存率83.2%（88/106例），患者的Kaplan?Meier生存曲线见图3。生存素阳性表达者5年生存率79.23%，阴性者为94.00%,两者比较差别有统计学意义（P<0.05）。
3讨论
报道，在乳腺癌组织中检测到生存素高表达；生存素表达于乳腺癌细胞质，在细胞核未见表达，而在正常乳腺组织中不表达。采用免疫组织化学的方法检测乳腺癌组织中生存素总体表达率为60.0%～70.7%[7?9]。在本研究中，生存素在乳腺癌细胞的表达率为61.9％，与文献报道相符。
笔者研究结果表明，生存素表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、病理类型、激素受体状况、病理分期等统计学分析无显著相关，这与有关文献报道相符合[7?10]。而生存素的表达与乳腺癌淋巴结转移的发生密切相关，无腋窝淋巴结转移的乳腺癌中生存素的表达阳性率明显低于有腋窝淋巴结转移者；关于乳腺癌生存素的表达与腋窝淋巴结转移的关系目前研究有不同的结论[7?10]：一种观点认为生存素的表达与腋窝淋巴结转移有关，另一种观点认为无关。对于产生此种差异的原因不明，但认为无关的相关文献中有腋窝淋巴结转移者的阳性表达均明显高于无腋窝淋巴结转移者，虽然统计学无显著性差异，但两者的相关趋势是存在的，有必要对此做大样本的研究。
本组资料显示，生存素表达阳性的乳腺癌细胞的凋亡率明显低于表达阴性者，这与文献报道相符合[7?8]。生存素抑制凋亡可能与以下机制有关：生存素可对抗G2/M期凋亡的诱导，可克服凋亡的检查点，允许变异细胞通过有丝分裂异常增殖。生存素直接作用于细胞凋亡的核心机制caspase，主要抑制caspase?3、caspase?7的活性，阻断细胞的凋亡过程[11]。进一步的研究发现，生存素可抑制由细胞色素C或caspase?8诱导的caspase活化，能阻止caspase?3和caspase?7的自发活化，也可通过p21间接抑制caspase [12]。
本研究显示，乳腺癌生存素阳性表达患者的5年生存率低于阴性表达者。单因素分析表明，生存素在乳腺癌中的高表达可作为术后判断预后的辅助指标。近来研究表明，细胞凋亡功能的抑制，将促进肿瘤生长，促进肿瘤血行转移，并能在缺乏其它必要因子的情况下于异位组织生长[13]。生存素在乳腺癌细胞中过度表达，发挥其抗凋亡的功能，细胞失去了正常细胞增殖周期中凋亡检查点的限制，细胞分裂异常，造成癌细胞增殖，肿瘤邻近和远隔部位的转移灶形成，降低5年生存率；同时生存素在乳腺癌中的异常表达可能促进肿瘤新生血管及淋巴管的生成，增强了肿瘤的侵袭力；生存素还降低乳腺癌对化疗的敏感性并可能与化疗耐药性的形成有关，这些因素都将直接导致生存素表达阳性的乳腺癌生存率降低。
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