针刺“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠局部免疫功能的影响

【摘要】  目的 探讨针刺“三阴穴”改善慢性非细菌性前列腺炎炎症反应的局部免疫机制。方法 将48只雄性大鼠随机分成空白组、模型组、药物组和针刺组，每组12只,采用免疫佐剂法造模后,针刺组、药物组分别给予针刺“三阴穴”及舍尼通灌胃15 d,观察各组大鼠的前列腺重量、系数、病理改变及组织匀浆中IgG、IL[8、iNOS含量的变化。结果 与模型组相比,针刺组的前列腺重量和系数明显降低(P<0.05或P<0.01)，慢性炎症的病理表现明显好转,针刺组IgG、IL[8、iNOS含量较模型组都有所降低，尤以IL[8显著(P<0.05)。结论 针刺“三阴穴”可以改善局部血液循环、调节局部免疫功能、促进炎症恢复。

【关键词】  慢性非细菌性前列腺炎 针刺 三阴穴 IgG IL[8 iNOS

    慢性非细菌性前列腺炎是中青年男性的常见病，占临床泌尿外科前列腺炎患者的90 %～95 %。主要表现为会阴睾丸部胀痛、腰骶部酸痛、排尿异常、头晕乏力、尿道滴白、性功能障碍等。“三阴穴”是笔者在多年临床经验的基础上，通过大量的临床筛选所确立的治疗慢性前列腺炎的特效腧穴。至今已治疗患者300余例，总有效率达85 %。为了进一步探讨“三阴穴”治疗慢性非细菌性前列腺炎（CAP）的作用机制，并对实验动物模型标准进一步摸索，我们进行本项动物实验。

    1  材料与方法

    1.1  主要试剂及仪器

    主要试剂:IL[8放免试剂盒(北京科美东雅生物技术有限公司提供，批号S20063089）；IgG放免试剂盒(原子能研究所提供，批号S20063090）；iNOS测试盒（南京建成生物工程研究所提供，批号20070125）；福氏完全佐剂（美国Sigma公司提供，试剂号FB5189）；白百破减毒活疫苗(甘肃省疾病预防控制中心提供，批号20061013)；舍尼通普适泰片（南京美瑞制药有限公司生产，市售，批号20070146）。

    主要仪器：低温高速离心机（德国 Heraeus Biofuge 28s）；低温冰箱 (院实验中心提供)；分析天平（瑞士 B6-1 METTLER）；光学显微镜（日本 Olympus CHK-213型）。

    1.2  实验动物及分组

    SPF级雄性SD大鼠48只，3月龄，质量（240±20）g；另取20只质量为240～300 g SD大鼠，用于取前列腺组织匀浆制作前列腺蛋白。均由甘肃中医学院动物实验中心提供，实验动物质量合格证号：SCXK（甘）2004-0006。动物购置后适应性喂养1周，全部实验操作均于SPF级动物实验室进行，设施使用合格证为SYXK(甘)2004-0006。

    将以上48只大鼠依质量编号，按随机数字表法分为空白组、模型组、药物组、针刺组，每组12只。

    1.3  造模方法[1]

    除空白组外，其余3组大鼠复制慢性非细菌性前列腺炎动物模型。

    （1）大鼠前列腺蛋白提纯液的制作： 取240～300 g雄性SD大鼠20只，断颈处死，在无菌条件下剥取前列腺组织，用冷生理盐水洗净，加入含0.5 % Triton100的生理盐水溶液，在冰水浴上用玻璃匀浆器制成匀浆，用低温高速离心机（-40 ℃）10000×g离心30 min，取上清液，采用双缩脲法进行蛋白含量测定，最后将上清液用0.1 mol/L、pH 7.2的PBS缓冲液稀释质量浓度为15 mg/mL。

    （2）免疫注射：除空白组外，其余各组大鼠以乙醚麻醉，腹腔注射百白破疫苗0.5 mL，多点皮内注射大鼠前列腺蛋白提纯液和福氏完全佐剂的混悬液(比例为1∶1)1.0 mL，空白组分别行腹腔及皮内多点注射0.9 %生理盐水注射液0.5 mL、1.0 mL，以上各组均分别于第1 d、30 d注射2次。

    1.4  处理

    造模后第1 d开始, 药物组大鼠将舍尼通普适泰片研末，以蒸馏水溶解灌胃，给药剂量按动物体表面积比换算等效剂量为13 mg/kg，给药体积为10 mL/kg,每日1次，连续15 d；空白组和模型组同样抓取，但不给予任何治疗。

    针刺组给予针刺“三阴穴”治疗。“三阴穴”包括：夹阴1（平耻骨联合上缘，在左侧腹股沟处）、夹阴2（平耻骨联合上缘，在右侧腹股沟处）、重阴（在会阴穴与阴囊根部之间取穴）[2]。将大鼠以仰卧位捆绑于鼠板上，以棉签蘸碘伏擦拭“三阴穴”，消毒局部皮肤，以32号1寸毫针针刺夹阴1、夹阴2两穴，进针1 cm；以32号1寸毫针针刺重阴穴，进针1.5 cm。进针后施平补平泻手法，留针20 min。每日1次，共15次。

    1.5  观察指标

    前列腺质量、前列腺系数：治疗15 d后，将各组大鼠断颈处死，取前列腺组织以分析天平称取前列腺质量，并前列腺系数（前列腺质量/体质量）。

    IgG、IL[8、iNOS的检测：将各组动物脱颈处死，取前列腺组织，沿腹叶中线取半侧组织匀浆，将匀浆液以3000 r/min离心15 min，将上清液分装3个试管，IgG、IL[8按照试剂盒说明书采用放免法检测，iNOS采用比色法检测。取另一半前列腺组织，HE染色制作病理切片，镜下观察前列腺局部病理变化。

    1.6  统计处理

    应用SPSS13.0统计软件进行处理，所有数据用均数±标准差（±s）表示，各组间比较采用单因素方差分析，各个实验组的两两比较采用最小显著性差异法。

    2  结果

    2.1  针刺“三阴穴”对前列腺质量及系数的影响

    见表1。

    表1各组大鼠前列腺质量及系数比较 由表1可见：各组之间大鼠质量相比无统计意义(P>0.05)，表明各组之间前列腺质量及系数有可比性。造模后模型组前列腺质量及系数与空白组相比显著增高(P<0.05或P<0.01)；而治疗后药物组前列腺质量较模型组显著降低(P<0.05)，针刺组前列腺质量及系数较模型组均显著降低(P<0.05或P<0.01)；与药物组相比，针刺组前列腺质量及系数的变化无统计意义（P>0.05）。

    2.2  针刺三阴穴对前列腺组织的影响

    （1）空白组：大鼠前列腺被膜、纵隔均正常,腺上皮为单层柱状上皮，位于基底部，腺泡腔内无或有很少分泌物,腺泡之间排列紧密（见图 A）。

    （2）模型组：大鼠前列腺组织表现为血管扩张,腺上皮增生,可见立方、柱状、高柱状、假复层等表现,腺上皮细胞核染色深浅不一，胞浆嗜碱性，腺腔扩张,腔内有分泌物,间质疏松,有大量慢性炎症细胞浸润(见图B)。

    （3）药物组：可见部分腺上皮细胞增生,排列紊乱,腺腔增大,部分含有分泌颗粒和慢性炎症细胞，间质可散见有血管充血及纤维组织增生（见图C）。

    （4） 针刺组：腺上皮细胞增生改善,排列整齐, 间质水肿、充血,炎细胞浸润较模型组明显减轻,腺泡中央未见炎细胞充盈（见图D）。

    A.空白组前列腺上皮呈立方体,未见明显增生

    B.模型组  前列腺上皮增生,部分呈乳头状,突入腹腔内,间质呈大量慢性炎细胞浸润

    C.药物组部分前列腺腺体上皮仍为高柱状及乳头状增生，间质可见有纤维增生

    D.针刺组  前列腺上皮增生有所改善，未见明显的纤维组织增生及炎细胞浸润

    图1  各组大鼠前列腺局部病理 （HE染色,×100） 2.3各组IgG、IL[8、iNOS的变化

    由表2可见，模型组大鼠前列腺组织匀浆中IgG、IL[8、iNOS的含量显著高于空白组(P<0.05)，说明前列腺局部处于炎症状态；与模型组相比，针刺组大鼠前列腺局部IL[8水平显著降低(P<0.05)，IgG、iNOS水平也有不同程度的降低，但无统计意义(P>0.05)；与药物组相比，针刺组IL[8的含量显著降低(P<0.05)，而IgG、iNOS无统计意义(P>0.05)。

    3  讨论

    慢性非细菌性前列腺炎的病因及病过程尚无明确定论,报道和研究结果表明,引起非细菌性前列腺炎的原因众多,主要有尿液返流、微生物感染等因素,同时其发病与前列腺组织的局部免疫反应异常有着密切的关系,前列腺具有保护生殖系统免遭细菌和其他病原微生物侵袭的局部免疫功能,当前列腺组织出现局部免疫功能异常,可引起前列腺组织的生理功能改变,出现一系列的病理变化。

    祖国医学认为本病的发生,多因嗜食肥甘,中焦湿热下注,或手淫及房室不节(洁),致肾气虚衰、湿热之邪乘虚而入所致，属本虚标实之证。中医辨证多将其分为气滞血瘀型、湿热蕴结型、阴虚火旺型及肾阳虚损型。表2各组大鼠IgG、IL[8、iNOS的变化 注：与模型组比较★P<0.05；与药物组比较△P<0.05

    IgG为机体抗感染的主要抗体，当机体罹患某些疾病或机体内外环境发生了某些特定的变化,可以导致前列腺局部抗原(PSA)的暴露,刺激血液、组织中的淋巴细胞调节抗体的生成，发挥免疫调理及抗体依赖性细胞毒作用（ADCC）。IL[8 是一种强效炎症趋化因子,其主要功能是诱导中性粒细胞和单核细胞向炎症部位聚集和调节白细胞黏附分子的表达,诱导局部炎症反应中白细胞的趋化活性,引起局部组织炎症和损伤。在慢性炎症中，当单核细胞、吞噬细胞、内皮细胞和其他细胞活化或刺激时，iNOS诱导合成的大量NO具有细胞毒作用，可杀伤微生物(包括细菌、病毒、真菌)、寄生虫和肿瘤细胞并造成炎症部位的正常组织损伤。

    舍尼通可阻断雄激素二氢睾酮和前列腺受体结合过程，抑制前列腺的上皮细胞增殖，抑制内源性炎症介质的合成，具有抗炎、消肿、促进排尿的作用，是目前较为公认的慢性非细菌性前列腺炎的药物。本研究结果表明，针刺“三阴穴”在改善慢性非细菌性前列腺炎炎症反应方面取得了与舍尼通相近甚至优于舍尼通的效果。

    “三阴穴”中夹阴1、夹阴2两穴位于腹股沟处，动、静脉及神经分布丰富；重阴穴位于阴部，深处有阴部动、静脉分支及会阴神经的分支，故而认为针刺“三阴穴”,可调节腹股沟及阴部动、静脉以及支配前列腺的髂腹股沟神经及会阴神经，有效地改善病变前列腺的血液循环，促进炎症的吸收，解除临床上诸如会阴、少腹及腰骶部的坠胀、疼痛等不适症状。

    针刺“三阴穴”后大鼠前列腺质量及系数较模型组显著降低，可见针刺“三阴穴”可以抑制炎症过程中血管通透性的增加，从而减少炎性渗出液，减轻炎症区白细胞的浸润，改善血液及淋巴液的淤滞及纤维组织增生。针刺“三阴穴”后大鼠前列腺组织匀浆中IgG、IL[8、iNOS的含量较模型组显著降低，可见针刺“三阴穴”可以调节抗体及细胞因子的分泌水平，从而减少因体液免疫、细胞免疫等多方面免疫反应对组织造成的损伤。

【文献】
  [1]周晓辉，韩蕾.免疫性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型的形态学与分子生物学特性[J].中华男杂志,2005,4(11): 4.

[2]何天有,赵耀东,雒成林.针刺“三阴穴”治疗慢性前列腺炎临床观察[J].针灸,2004, 24(10):9.