葛根素对腹膜透析伴发氧化应激的干预作用

【摘要】  目的:观察在腹膜透析（PD）液中添加葛根素对PD伴发腹腔氧化应激状态的干预作用。方法:36例终末期肾脏病连续性非卧床腹膜透析（CAPD）病人，随机分为实验组和对照组，每组18人。实验组在PD液中添加葛根素注射液50 mg·（2 L）－1，对照组不加药，均行标准CAPD（每天4次更换PD液，每次2 L）。用药后第16天与用药前比较两组病人血清和透出液氧化应激指标［谷胱甘肽（GSH）、总超氧化物歧化酶（T?SOD）、丙二醛（MDA）］及透析充分性等指标的变化。结果:用药后实验组病人血清及透出液GSH、T?SOD均较用药前明显升高（P<0.05），透出液MDA在用药后明显降低（P<0.05），而血清白蛋白、总肌酐清除率（Ccr）、KT/V、每天超滤量无明显变化。结论:在PD液中添加葛根素可以改善PD病人腹腔及全身的氧化应激状态。

【关键词】  葛根素； 腹膜透析； 氧化应激

    腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）伴发的腹膜纤维化是当前PD技术性失败的主要原因，而非生物相容性PD液的使用是长期PD患者腹膜纤维化的主要原因［1］。众多研究表明，应用这样的PD液可以导致PD患者腹腔局部和全身的高氧化应激状态，是腹膜纤维化发生的重要机制之一。中药葛根素具有较强的抗氧化应激作用，本研究观察了葛根素对PD伴发的氧化应激状态的干预作用。

    1  资料和方法

    1.1  一般资料

    2003年7月～2007年1月在南京大学医学院附属鼓楼随访的维持性PD病人36例，男19例，女17例，年龄26～72岁，平均（58.9±14.1）岁。均行标准的连续性非卧床腹膜透析（continuous ambulatory peritoneal dialysis，CAPD），每天4次更换PD液，每次2 L，平均透析时间（17.2±13.7）个月。原发病为慢性肾小球肾炎17例，糖尿病肾病9例，高血压肾小动脉硬化8例，痛风性肾病1例，不明原因1例。所有病人不吸烟或戒烟5个月以上，本研究前1个月及研究期内无腹膜炎、感染及心力衰竭等并发症，未使用已知的可影响氧化应激的药物，如维生素C、维生素E及铁剂等。

    1.2  方法

    1.2.1  分组  36例病人随机分为对照组和实验组，每组18例，平行对照观察。第1天用1.5%百特PD液透析，留取4 h后的透出液20 ml×2管，同时取静脉血5 ml×2管，其中透出液及静脉血各1管送生化检测，另2管于30 min内分离上清液及血清（3 000×g 离心10 min），置－70 ℃冰箱冻存，2周内完成检测。其后2周，实验组病人加葛根素注射液（浙江康恩贝制药股份有限公司，100 mg·支－1），每2 L加50 mg(根据静脉用药剂量换算)继行CAPD治疗，对照组PD液中不加葛根素。在第16天两组重复生化指标的检测。

    1.2.2  观察指标  血清及透出液谷胱甘肽（glutathione，GSH）检测应用二硫代二硝酸苯甲酸法显色法，丙二醛（malondialdehyde，MDA）检测应用硫代巴比妥酸法，总超氧化物歧化酶（total?superoxide dismutase，T?SOD）活性检测采用黄嘌呤氧化酶法，试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。血清、尿及透出液尿素氮、肌酐、白蛋白等采用自动生化分析仪检测。周总KT/V=7×（残余肾KT/V+腹膜KT/V）。KT/V：KT=尿液或透出液尿素氮含量/血尿素氮浓度。V采用Watson公式计算。周总肌酐清除率（Ccr）=7×（残余肾Ccr+腹膜Ccr）。Ccr计算：残余肾Ccr=（尿肌酐总量/血肌酐浓度+尿尿素氮总量/血尿素氮浓度）/2；腹膜Ccr=透出液肌酐总量/血肌酐浓度；结果用体表面积标化。公式中采用第1天和第16天的数据计算。

    1.3  统计学处理

    定量数据用x-±s表示，用SPSS 12.0统计软件进行组内自身前后配对t检验和两组间的成组t检验，定性数据两组间的比较采用Fisher精确概率检验。

    2  结    果

    对照组与实验组的年龄、性别比、原发病为糖尿病肾病的比例、以往PD时间、用药前与用药第16天血清白蛋白、KT/V、Ccr、每天超滤量均无统计学差异，详见表1。实验组加葛根素后未见发热、腹痛、过敏性皮疹、血细胞减少以及其他明显副作用。 表1  两组临床资料和透析充分性指标的比较

    对照组与实验组用药前后血清和透出液GSH、MDA、T?SOD的结果见表2。

    实验组用药后血清GSH、T?SOD均较用药前明显升高（P<0.05），MDA有下降趋势，但无统计学意义（P=0.088）；对照组血清中各指标在第1天和第16天均无明显变化。用药后，实验组血清GSH、T?SOD明显高于对照组（P<0.05）。

    实验组用药后透出液GSH、T?SOD均较用药前明显升高（P<0.05），MDA明显降低（P<0.05），而对照组透出液GSH、MDA及T?SOD均无明显变化。实验组与对照组比较，实验组用药后透出液GSH、T?SOD显著高于对照组（P<0.01），而MDA显著低于对照组（P<0.05）。

    3  讨    论

    普遍认为，长期PD伴发的腹膜纤维化与使用生物不相容性的高糖PD液有关，其机制未完全阐明。近年的研究证明，生物不相容性PD液引起的腹腔及腹膜组织高氧化应激状态，介导和加速PD纤维化的形成［1］。

    Ciszewicz等［2］在体外腹膜间皮细胞培养的研究中发现，添加45 mmol·L－1的葡萄糖后，腹膜间皮细胞产生了更多的活性氧族（reactive oxygen species,ROS）。在PD动物模型的研究中也发现，PD小鼠与对照组相比有着显著升高的脂质过氧化物水平［3］。Al?Hashimi等［4］对PD患者的研究则显示，PD患者在透析过程中有着显著升高的血浆MDA 水平和降低的硫醇水平，提示PD可以导致患者的高氧化应激状态。PD诱发的高氧化应激状态不仅被认为与PD患者高的心血管事件发生有关，其也直接参与腹膜纤维化的过程。研究表明，通过使用抗氧化制剂，可以明显减轻腹膜形态结构和功能的改变，有利于抑制腹膜纤维化的发生。如Noh等［3］通过使用N?乙酰半胱氨酸可防止高糖PD液导致的小鼠腹膜増厚和转运功能的变化。Gunal等［5］也发现，使用三甲氧苄嗪后可阻止腹膜高氧化应激的出现，改善腹膜超滤功能，抑制腹膜增厚及新生血管生成。但上述发现均局限于动物实验研究，目前无抗氧化剂在PD病人中应用的报道。 表2  透出液和血清氧化应激指标的变化 与用药前比较，1）P<0.01，2）P<0.05；与对照组比较，3）P<0.01，4）P<0.05

    众多临床研究证实中药葛根素具有明显的抗氧化应激作用［6?8］，使用安全，无明显副作用，药源丰富。我们早先的初步研究显示，葛根素可以有效拮抗PD液诱导的腹膜间皮细胞TGF?β高分泌，从而具有潜在抑制腹膜纤维化的作用［9］。为进一步探讨葛根素在PD中的临床应用价值及其机制，本研究将葛根素添加于PD液中使用，观察其对患者氧化应激状态的影响。结果显示，用药的实验组透出液GSH、T?SOD明显升高，MDA明显降低，而平行比较的对照组无明显变化。因此，我们的研究证明了在PD液中加入葛根素可明显抑制PD液导致的腹腔内高氧化应激状态，具有潜在的腹膜保护作用。使用中也无明显不良反应，提示其在腹腔内应用也是安全可行的。PD病人的高氧化应激状态是动脉粥样硬化、心血管疾病发生的重要原因［10］。本研究还发现，腹腔内应用葛根素也能改善病人全身的氧化应激状态；实验组用药后血清GSH、T?SOD明显升高，MDA呈明显下降趋势，而对照组则无明显变化。

    虽然有研究显示，PD小鼠腹腔内使用抗氧化剂后，腹膜溶质清除及超滤功能改善［4］，但本研究结果显示，使用葛根素前后病人KT/V、Ccr及每天超滤量均无明显变化，可能与用药时间较短有关，也有待深入研究。

    综上所述，通过在PD液中添加葛根素注射液可以显著改善患者腹腔局部和全身的高氧化应激状态，从而具有潜在的腹膜保护作用。葛根素短期腹腔应用无明显的临床副作用，对患者的透析效能无明显影响，其在临床长期应用的效果有待进一步研究。

【】
  ［1］DIAZ?BUXO J A,GOTLOIB L.Agents that modulate peritoneal membrane structure and function［J］.Perit Dial Int,2007,27(1):16?30.

［2］CISZEWICZ M,WU G,TAM P,et al.Changes in peritoneal mesothelial cells phenotype after chronic exposure to glucose or N?acetylglucosamine［J］.Transl Res，2007，150(6):337?342.

［3］NOH H,KIM J S,HAN K H,et al.Oxidative stress during peritoneal dialysis:implications in functional and structural changes in the membrane［J］.Kidney Int,2006,69:2022?2028.

［4］AL?HASHIMI A F,MOHAMMED F H,AL?KHAZRAGI A S.Oxidative stress in chronic renal failure patients treated by peritoneal dialysis［J］.Saudi Med J,2004,25(9):1186?1192.

［5］GUNAL A I,CELIKER H,USTUNDAG B,et al.The effect of oxidative stress inhibition with trimetazidine on the peritoneal alterations induced by hypertonic peritoneal dialysis solution［J］.J Nephrol,2003,16(2):225?230.

［6］江庆华.葛根素的药理作用与临床应用近况［J］.热带医学，2006，6(2)：326?327.

［7］朱庆磊,何爱霞,吕欣然.葛根素对氧自由基的清除和抗氧化性损伤作用［J］.解放军药学学报，2001，17(1)：1?3.

［8］金笑平,胡大平,陈赛贞,等.葛根素对急性脑梗死血清一氧化氮、丙二醛、超氧化物歧化酶的作用研究［J］.中国中西 医结合急救杂志，2001，8(5)：309?310.

［9］蒋春明，张苗，孙琤.葛根素对体外培养人腹膜间皮细胞保护作用的研究［J］.东南大学学报：医学版，2007，26（3）：185?188.

［10］GALLE J.Oxidative stress in chronic renal failure［J］.Nephrol Dial Transplant,2001,16(11):2135?2137.