三叶委陵/SD-Zn 复合口腔膜的研制和动物实验研究
作者：张咏梅 彭菲 杨继英 张永锋 吴正治
【摘要】 目的：研制三叶委陵/SD-Zn 复合口腔溃疡膜，并通过建立动物溃疡模型观察三叶委陵/SD-Zn 复合膜对复发性口腔溃疡的作用。方法：选择壳聚糖作载体，加入三叶委陵浓缩液和 SD-Zn 粉等药物，制备复合口腔药膜；用 碱烧灼法建立大鼠口腔溃疡模型；将动物分 3 组，分别为不给药组、壳聚糖膜组和三叶委陵/SD-Zn 复合膜组，于不同时间观察溃疡外观，溃疡面积和溃疡愈合速度。结果：制备的三叶委陵/SD-Zn 复合壳聚糖药膜符合口腔药膜的一般性状表征；通过大鼠口腔溃疡模型初步观察到复合膜组的溃疡外观和充血水肿情况优于对照组，复合膜组溃疡平均愈合速度明显提高，与其他两组相比，有显著的统计学差异（P < 0.01）。结论：该药膜能够使完整性发生持续性破坏和缺损的口腔黏膜上皮尽快修复，减少充血水肿并促进愈合，是治疗复发性口腔溃疡的新制剂。
【关键词】 三叶委陵；SD-Zn 复合膜；口腔溃疡；大鼠
复发性口腔溃疡（recurrent oral ulcer）又称复发性阿弗它溃疡，是常见的口腔黏膜疾病，一般人群的患病率可高达 25%。社会心理因素，感染因素，营养因素，激素水平的波动、免疫异常、遗传因素、超氧化物岐化酸活性下降，微循环障碍等诸多因素可导致该病的发生，具体病因尚不明了。
目前国内外无特效的治疗方法，对大多数患者来说局部用药可促进溃疡愈合，减少疼痛等副作用和不良反应，是目前的首选方法。其药物剂型可分为：液体制剂，半固体制剂和固体制剂型，我们以抗菌、消炎、止痛，促进溃疡面愈合为目的，研制了三叶委陵/磺胺嘧啶锌（SD-Zn）双层复合壳聚糖口腔药膜，并通过动物模型对该膜的治疗作用进行初步观察。
1 实验方法
1.1 三叶委陵/SD-Zn 复合口腔溃疡膜的研制
1.1.1 材料 壳聚糖（脱乙酰度≥92%，M = 5.00×105，深圳市倍通科技开发有限公司）；卡波普-941（深圳化学试剂厂）；羧甲基纤维素（CMC）（深圳化学试剂厂）；三叶委陵草（深圳民生堂大药房）；SD-Zn（深圳市第二人民制剂室）。
1.1.2 载药膜的制备 用 2 mol/L 的乙酸水溶液配制浓度为 5 g/L 的壳聚糖水溶液 8 mL，在此水溶液中加入 CMC 8.0 g、卡波普-941 4.0 g，于 50℃ 热水浴中，充分混合，再加入甘油 2 mL、吐温-80 2 mL 搅拌溶解，减压脱泡。
1.1.3 主药的处理 取三叶委陵 10 g，加入 45 mL 75% 乙醇，浸泡 24 h，过滤，得滤液。药渣加水，煎煮 2 次，每次 30 min，过滤，滤液与醇液合并，浓缩成 6 mL。SD-Zn 3.0 g 碾细成粉状，过200 目筛，溶于 3 mL 蒸馏水中。将三叶委陵浓缩液和 SD-Zn 粉充分混合。
1.1.4 复合药膜的制备 按三叶委陵/SD-Zn 6 mL 与壳聚糖水溶液 8 mL 混合，充分搅拌至均匀细腻，除尽气泡，放置。涂布于预先涂有液体石蜡的玻璃板上，制得膜 20 cm×20 cm，干燥 24~48 h，揭膜即得。然后用 2 mol/L 的 NaOH 溶液中和，再用双蒸水反复洗涤至中性、晾干。
1.1.5 双层药膜的制备 揭下后在一面涂 10 g/L 酸溶性壳聚糖溶液（壳聚糖 0.1 g，加入 6 mol/L 乙酸 10 mL 中），晾干，形成双层复合药膜，剪成 1 cm×1 cm 的正方形小块。紫外线消毒，常温干燥处保存备用。
1.2 动物实验研究
1.2.1 实验动物与分组 动物：SD 大鼠 90 只，清洁级 2 级，6~8 周龄，体质量 180~220 g，雌雄各半，购于购于中山医科大学实验动物中心。
分组：单盲随机分成对照组（未给药组）、空白膜组（仅用壳聚糖膜）与复合膜组（用三叶委陵/SD-Zn 复合膜），每组 30 只。
1.2.2 口腔溃疡模型的建立[2]及给药方法 造模：大鼠在 10 g/L 戊巴比妥钠（0.025 g/kg）麻醉下，用 NaOH 晶体在下唇双侧靠口角黏膜处烧灼 5~8 s，生理盐水冲洗后形成溃疡。
给药：空白膜组、复合膜组动物造模后开始贴壳聚糖膜和三叶委陵/SD-Zn 复合膜，每天 2 次。对照组不采取任何处理措施。实验开始后第 2、4、6、8 天每组动物分别处死 6 只，其余饲养至溃疡愈合后处死。
1.2.3 检测指标 ①溃疡处外观：每日观察大鼠溃疡处的一般情况、水肿及充血程度。② 溃疡面积：每日记录大鼠溃疡的面积。③ 溃疡愈合速度：用透明胶片画下创面大小，创面面积，以判断愈合速度。计算平均愈合速度（mm2/d）=溃疡面积（mm2）/时间（d）。
1.2.4 统计学处理 采用秩和检验。
2 实验结果
2.1 双层复合药膜的性状表征
本品为白色薄膜，厚度约为 0.6 mm，质地均匀，有弹性，有韧性，味麻苦。浸水 5 min 后呈胶状，能够牢固地黏附在口腔黏膜上。置于棕色瓶中，外观无变化；无色瓶中，60 d 后微变黄。
复合药膜每平方厘米含壳聚糖 0.008 g、三叶委陵 0.048 g、SD-Zn 粉 0.022 g。
2.2 口腔溃疡模型的大体观察
第 1 天，复合膜组与对照组模拟溃疡形成后，双侧下唇靠口角黏膜处溃疡为 5 mm×5 mm 大小，略微凹陷，表面灰白色，周缘充血水肿，触痛（＋）。
2.3 给药后各组模型外观及充血水肿情况的比较
第 2 天（用药后 1 d），对照组溃疡有扩大，复合膜不明显。第 3~4 天（用药后 2~3 d），溃疡表面开始坏死，有假膜覆盖，对照组情况较严重，其余 2 组情况较好。第 5~7 天（用药后 4~6 d），假膜脱落，新鲜创面暴露，复合膜组创面明显缩小。第 8 天（用药后 7 d），对照组溃疡面明显缩小，复合膜组溃疡陆续愈合。第 9 天，复合膜组溃疡完全愈合，对照组溃疡未完全愈合。第 10~13 天，对照组溃疡完全愈合。
复合膜组水肿充血程度以第 2 天最严重，以后逐渐好转，而对照组充血水肿到第 5 天才开始好转。
2.4 各组不同时间溃疡面积的比较
治疗前各组溃疡间无统计学差异，具有可比性。溃疡愈合情况，各用药组好于对照组，不同时间溃疡面积均是用药组小于对照组（P < 0.05）。
2.5 各组溃疡平均愈合时间及速度
各用药组溃疡平均愈合时间均短于对照组；复合膜组溃疡平均愈合速度快于对照组和空白膜组，且空白膜组和对照组溃疡愈合速度差异不大。详见表 1。
3 讨 论
在口腔溃疡的治疗中，膜剂的实用性强，可在较长时间内通过渗透原理向敷药部位持续释放药物。目前口腔溃疡药膜已经由单层膜到双层膜、复合膜。在膜剂制作中，成膜材料的选择十分重要。壳聚糖是带正电荷的单体物质，有很强的生物活性作用，与机体有良好的生物相容性。壳聚糖能刺激多形核细胞及单核细胞的迁移和巨噬细胞的活性，从而促进肉芽组织形成及表皮生成[3]。水溶性壳聚糖具有易溶于水、成膜性好、黏接力强、热稳定性高等优点，对黏膜无毒、无刺激性，口服后在消化道很少吸收，80% 的壳聚糖在 48 h 内随大便排出；而酸性壳聚糖在唾液中不易溶解。故本研究中采用了双层膜法，以水溶性壳聚糖作载药膜，均匀分散三叶委陵和 SD-Zn，酸性壳聚糖作隔离层，从而延长了膜剂中药物与病灶的接触时间，起到了增加生物利用度的作用。
本口腔溃疡膜采用中西药结合组方，主药三叶委陵菜属蔷薇科植物，性凉，味涩，微苦，具有清凉解毒，镇痛，抗病毒，抗炎症，敛疮止血功效。其主要有效成分为没食子酸和儿茶素，没食子酸有活性作用，对病毒、真菌、金黄色葡萄球菌、八叠球菌、α型链球菌、绿脓杆菌、佛氏痢疾杆菌等都有抑制作用。SD-Zn 具有控制感染和创面愈合的双重功能。SD-Zn 的 SD 部分具有强大的抑菌作用；Zn2+ 部分能破坏细菌的 DNA 结构，同时锌能参与人体内 60 种酶的合成，核糖的代谢和蛋白质的合成，锌能激活 T 细胞，调节人体免疫功能，增强机体抗病能力，可加速溃疡面愈合[4]。此外 SD-Zn 克服了硫酸锌等无机锌局部使用疼痛的缺点。故该组方具有止痛、消炎、化瘀、收敛、生肌的功效。
本实验成功地制备了三叶委陵/SD-Zn 复合壳聚糖药膜，并建立了大鼠口腔溃疡模型，通过该模型初步观察到复合膜组溃疡平均愈合速度明显高于对照组和空白膜组，说明三叶委陵，磺胺嘧啶锌、壳聚糖是一种有效的组合，其作用是相互协同的，为中、西药联合治疗复发性口腔溃疡开发了新制剂。
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〔1〕李志民, 公柏娟. 口腔溃疡治疗方法的研究进展〔J〕. 社区医师, 2004, 20(2):19
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