固本祛风汤对变应性鼻炎豚鼠模型行为学的影响

                    作者：李浩 刘元献 李许娜 曹志 李韵霞 付文洋

【摘要】  目的：探讨中药固本祛风汤变应性鼻炎（AR）豚鼠模型的疗效以及对其行为学的影响。方法：将 90 只豚鼠随机分成正常对照组、模型组、辛芩颗粒组和中药治疗组，以卵清蛋白致敏激发造成变应性鼻炎豚鼠模型，分别给予中药和辛芩颗粒，观察各组动物的行为学改变。结果：中药治疗组症状显著低于模型组，其差别有统计学意义（P < 0.05）。结论：固本祛风汤可明显改善变应性鼻炎豚鼠模型的症状，从而发挥对 AR 的治疗作用。

【关键词】  变应性鼻炎；豚鼠模型；固本祛风汤；行为学

    〔Abstract〕 Objective  To  study  the  effect  of  Chinese   medicine  GubenQufeng  prescription  treating guinea  pig  model  of  allergic  rhinitis  and  its  reaction  on  behavioristics.   Methods 90  guinea  pigs  were randomly  divided  into  normal  control  group,   model  group,  Xinqin  particles  and  the  Chinese  medicinegroup,  sensitized  to  ovalbumin  excitation  caused  guinea  pig  model  of  allergic  rhinitis,  were  given  medicine and  Xinqin  particles,  behavioristics  observed  after  treatment.   Results  Symptoms  of  Chinese  medicine treatment  group  was  significantly  lower  than  that  of  model  group,  There  was  a  statistically  significant  difference  (P  < 0.05).   Conclusion     GubenQufeng prescription  can  significantly  improve  the  guinea  pig  model  of  allergicrhinitis  symptoms,  thereby  play  a  role  in  the  treatment  of  AR.

    〔Key  Words〕    Allergic  rhinitis;  Guinea  pig  model;  GubenQufeng   prescription;  Behavioristics

    变应性鼻炎（Allergic Rhinitis, AR）是由 IgE 介导的Ⅰ型超敏反应性疾病，由于大气污染等多种原因，近年来发病率不断升高。变应性鼻炎在中医属于“鼻鼽”范畴，历代医家对本病的认识颇不一致，但都认为其发病与外界因素有密切关系。笔者经过多年的临床实践，认为本病病机主要在于肺、脾、肾三脏的虚损，自拟固本祛风汤对变应性鼻炎患者进行治疗，在临床上取得了显著的疗效。为进一步探讨固本祛风汤对变应性鼻炎治疗的机制，我们将其用于卵清蛋白诱发的变应性鼻炎豚鼠模型，用固本祛风汤治疗后观察动物模型的行为学改变，为将其更好地用于临床治疗变应性鼻炎提供实验依据。

    1    材料和方法

    1.1    实验动物

     Hartley 豚鼠 90 只，清洁级，雌雄各半，体重 250~300 g，由中山医科大学动物中心提供。在空调动物房饲养，温度 25~28℃，湿度 40%~50%，饲养房避免过敏原存在，适应性饲养 1 周后开始正式实验。

    1.1.1    药物和试剂    固本祛风汤：制附子、黄芪、桂枝、全虫、辛荑花、防风、肉桂、徐长卿、茯苓、甘草。

    辛芩颗粒：由上海中医大药业股份有限公司生产（国药准字 Z31020014）。

    卵清蛋白（OVA）：由美国 Sigma 公司生产。

    1.1.2    动物分组    将豚鼠随机分为 6 个组：A 组（正常对照组），B 组（模型组），C 组（辛芩颗粒组），D 组（中药低剂量组），E 组（中药中剂量组），F 组（中药高剂量组），每组 15 只。

    1.1.3    造模方法    采用卵清蛋白致敏的方法[1-5]，对模型组和实验组豚鼠分别以每只腹腔注射卵清蛋白混悬液 1 mL（卵清蛋白 0.3 mg 为抗原，氢氧化铝 30 mg 为佐剂，溶于 1 mL 生理盐水配成），隔日 1 次，共 7 次。

    1.1.4    模型评价    于末次鼻腔激发后第 2 日，分别在模型组、对照组和实验组随机各选取 3 只，行 PCA 试验。即每只于球后静脉丛采血 0.3 mL，离心（3 000 r/min）10 min 后分离出血清，取 40   L 生理盐水稀释，分别配成 1:4、1:16、1:64、1:256 浓度；取健康白色大鼠，背部剃毛，将上述不同浓度血清分别注射于背部皮下，间隔 2 cm，并作记号；72 h 后，以卵清蛋白 1 mg、伊文斯兰 5 mg 溶于 1 mL 生理盐水，于大鼠尾静脉注射，30 min 后观察结果，蓝斑直径超过 5 mm 为阳性，即造模成功。观察造模成功后，每侧鼻腔均以 2% 卵清蛋白溶液用微量加样器滴入 40   L，每日 1 次，共 7 次。

    1.1.5    给药方法    经 PCA 试验蓝斑呈阳性后，以 2% 卵清蛋白溶液滴鼻，从第 1 次 OVA 滴鼻当日起，实验组和对照组于滴鼻前口饲给药，中药浓煎后用蒸馏水稀释，调整浓度，使每只每天给药量均为 3 mL；模型组和空白组每只每天予口饲 3 mL 生理盐水。每日 1 次，共 7 次。

    1.1.6    给药剂量    实验组：低剂量组：每日 7.5 g/kg；中剂量组：每日 15 g/kg；高剂量组：每日 30 g/kg。

    对照组：辛芩颗粒每日 6 g 生药 / kg。

    1.2    标本采集

    所有动物末次给药后 1 h，于球后静脉丛采血 3 mL，离心（3 000 r/min）15 min 后分离出血清，于-20℃ 保存。同时予 10% 水合氯醛溶液以 0.4 mL/kg  腹腔注射麻醉后，分离鼻骨前皮肤，咬除鼻骨，取下鼻中隔及其黏膜，于 4% 多聚甲醛溶液中固定。

    1.3    指标检测

    1.3.1    行为学观察    记录每次激发后 30 min 内动物的鼻痒、喷嚏、清涕出现的时间、次数与轻重程度，并打分。评分标准：0 分：无喷嚏、抓鼻、喘息及鼻分泌物；1 分：喷嚏 < 4个，轻度抓鼻，喘息急促，前鼻孔有鼻分泌物；2 分：喷嚏 4~10 个，频繁抓鼻，喘息加重，鼻分泌物超过前鼻孔；3 分：喷嚏 > 11 个，持续抓鼻，因喘息致死，脸部布满鼻分泌物。总分 > 5 分表示造模成功[6]。

    1.4    统计学方法

    统计学方法采用 U 检验或 t 检验。

    2    结    果

    2.1    死亡情况

    PCA 试验：各组死亡 3 只；正常对照组和模型组：各死亡 2 只，剩余 10 只；中药高剂量组、辛芩组：各死亡 1 只，剩余 11 只。

    2.2     PCA 试验

    PCA 实验发现，以正常对照组血清接种的大鼠背部无蓝斑出现。以其余各组血清接种的大鼠背部，分别于 1:4，1:16，1:64，1:256 浓度处均出现蓝斑，直径最大的为 1.5 cm，最小的为 0.5 cm，浓度越小蓝斑越小。

    2.3    行为学改变

    A 组仅偶有抓鼻现象，个别豚鼠打喷嚏；B 组于鼻腔滴入抗原后频繁用前爪抓鼻，打喷嚏，并伴有清水样鼻涕，部分豚鼠涕流满面；其余各组症状轻微，出现轻度抓鼻及少数喷嚏，部分可见鼻涕。模型组与其余各组比较差异均有统计学意义 （P < 0.05），正常对照组与各实验组之间差异有统计学意义（P < 0.05），结果见表 1。

    3    讨    论

    变应性鼻炎是一类主要由 IgE 介导的Ⅰ型变态反应性疾病，近年来发现细胞因子水平与变应性鼻炎的发病关系密切[7，8]。

    中药的许多药材经研究表明，具有调整机体免疫状况的作用，必将在变应性鼻炎的中占据重要的地位。如黄芪可调节体液免疫，从而抑制组胺等介质的释放；细辛、桂枝等对过敏介质有拮抗作用；防风、甘草、辛荑、五味子、乌梅、蝉蜕均有抗过敏作用。

    笔者在多年的临床实践中认识到，变应性鼻炎的发生主要是由肺气虚弱，卫外不固，导致外邪侵袭而成鼻鼽。此外，本病与先天肾气不足和后天脾失健运也有非常密切的关系。历代医家多采用补肺固表、健脾扶正、补肾温阳等方法辨证论治，方药多采用玉屏风散、小青龙汤、桂枝汤、麻黄附子细辛汤等加减治疗本病。固本祛风汤即是在玉屏风散的基础上加减而成。主要由制附子、黄芪、桂枝、全虫、辛荑花、防风、肉桂、徐长卿、茯苓、甘草等组成，本方以制附子、肉桂补肾温阳；茯苓健脾利水；黄芪、桂枝益气固表、助阳化气；辅以防风、辛荑祛风通窍，全虫搜风活络，徐长卿祛风止痒。综观全方，具有补肺散寒，健脾益肾，祛风通窍之功效。现代药理研究认为，黄芪具有双向免疫调节作用，附子、防风、辛荑、徐长卿均有抗炎及增强免疫作用，可以降低炎症细胞的通透性，减轻其水肿、浸润等炎性反应，辛荑还可以抗组胺及收敛鼻黏膜血管，减轻变应性鼻炎所致的鼻痒、打喷嚏、流涕等症状。实验研究结果显示， 固本祛风汤治疗组症状显著低于模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），表明固本祛风汤可以显著改善变应性鼻炎的症状，减轻其炎症反应，从而达到治疗变应性鼻炎的作用。

【】
  〔1〕Monika ME, Garl A, Jonas S. Degranulation status of airway tissue eosinophils in mouse models of allergic airway inflammation 〔J〕. Res Cell Mole Bio1, 2001, 24(3):352-359

〔2〕李华斌, 韩德民. IL-9与呼吸道炎症〔J〕. 国外医学耳鼻咽喉分册, 2003, 27(2):75-77

〔3〕Saito H, Matsumoto K, Denburg AE, et al. Pathogenesis of murine experimental allergic Rhinitis: A Study of local and systemic consequences of IL-5, Deficiency〔J〕. J Immunol, 2002, 168(6):3017-3023

〔4〕燕志强, 章凤新. 嗜酸性细胞功能研究进展〔J〕. 国外医学耳鼻咽喉科学分册, 2004, 28(5):304-307

〔5〕毛辉, 王曾民. CD34+细胞与支气管哮喘〔J〕. 国外医学呼吸系统分册, 2002, 22(4):190-193

〔6〕Sehmi R, Wood LJ, Watson R, et al. A1lergu-induced increases in IL-5 receptor alpha-subunit expression on bone marrow-derived Cd34+ cells from asthmatic subjects〔J〕. Clin Invest, 1997, 120:2457-2466

〔7〕Bjermer L, Diamant Z. Current and emerging nonsteroidal anti-inflammatory therapies targeting specific mechanisms in asthma and allergy〔J〕. Treat Respir Med, 2004, 3(4):235-246

〔8〕Hansen I, Klimek L, Mosges R, et al. Mediators of inflammation in the early and the late phase of allergic rhinitis〔J〕. Curr Opin Allergy Clin Immunol, 2004, 4(3):159-163