逐饮Ⅰ号对恶性胸水大鼠模型胸水和血清中bFGF及生存期的影响
作者：李竹英，刘建秋，吉俊嵘
【摘要】 目的：观察逐饮Ⅰ号对恶性胸水大鼠模型胸水和血清中bFGF及生存期的影响。方法：采用艾氏腹水瘤细胞株传代培养后大鼠胸腔注射造模，用ELISA法测定血清和胸水中bFGF的含量。通过中位生存时间和生命延长率观察恶性胸水大鼠的生存期。结果：模型组、中药组、顺铂组血清bFGF含量明显高于空白对照组；中药加顺铂组血清bFGF含量高于空白对照组；中药加顺铂组、中药组、顺铂组血清和胸水中bFGF含量明显低于模型组；中药加顺铂组血清和胸水中bFGF含量明显低于中药组和顺铂组；顺铂组血清和胸水中bFGF含量与中药组相近。中药组、顺铂组、中药加顺铂组中位生存期较模型组明显延长；中药加顺铂组中位生存时间和生命延长率较顺铂组及中药组明显延长；顺铂组中位生存时间和生命延长率较中药组略延长。结论：逐饮Ⅰ号可明显降低血清和胸水中bFGF的含量；明显延长恶性胸水大鼠的生存期；通过降低恶性胸水大鼠血清和胸水中bFGF的含量而达到防治恶性胸水的作用。
【关键词】 逐饮Ⅰ号 恶性胸水大鼠模型 血清bFGF 胸水bFGF 生存期
恶性胸水是恶性肿瘤的常见并发症之一，有关调查资料显示［1］，约半数肺癌患者最终会发生恶性胸水。恶性胸水的形成常常标志着疾病已进入晚期，未经者多在胸水出现后1～6个月(平均2个月)内死亡［2］。近年来，中医药在抗恶性胸水方面逐渐显示出其优势。本研究观察了逐饮Ⅰ号对恶性胸水大鼠bFGF及生存期的影响，现如下：
1 实验材料
1.1 瘤株 艾氏腹水瘤(EAC)细胞株，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。
1.2 动物 Wistar大鼠，清洁级，190～210 g，由黑龙江省肿瘤实验动物中心提供。
1.3 实验药物与试剂 (1)逐饮Ⅰ号：由黑龙江中医药大学附属一院药厂提供。经水煎取汁，醇沉，浓缩而成(药物组成：葶苈子、白术、椒目、茯苓、黄芪、桂枝、山慈菇、薏苡仁、甘草)。(2)顺铂(DDP)：50 mg/50 mL，FH科鼎有限公司生产，产品批号：T05881AB。(3)双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法大鼠血清bFGF试剂盒，双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法大鼠胸水bFGF试剂盒，均购自大连泛德生物有限公司。
1.4 实验仪器 (1)光学显微镜；(2)酶标检测仪；(3)Mode1550酶联分析仪；(4)超净工作台；(5)超低温冰箱：MDF?328；(6)台式高速离心机；(7)细胞计数板；(8)洗板机；(9)恒温孵育器：Eppendorf德国；(10)低温真空冷冻干燥箱；(11)精密移液器。
2 实验方法
2.1 动物分组 100只大鼠随机分为正常对照组(A)、模型组(B)、中药组(C)、顺铂组(D)、中药加顺铂组(E)5组，20只/组，其中8只做为生存期观察。
2.2 动物模型的制备 恶性胸水模型的制作参照何欣［3］、田鑫［4］的方法进行改良。艾氏腹水癌细胞株，每周传代1次，取荷瘤7d的昆明种小鼠，抽取小量腹水，用无菌生理盐水调整细胞浓度，胸腔注射上述浓度的肿瘤细胞悬液，B、C、D、E组每只0.3 mL，共造模80只。A组同样方法胸腔注射生理盐水0.3 mL作为空白对照组。
2.3 给药 (1)空白对照组(A组)：以1.5 mL/d生理盐水灌胃，1次/d。(2)模型组(B组)：以1.5 mL/d生理盐水灌胃，1次/d。(3)中药组(C组)：予逐饮Ⅰ号按生药量10.8 g/(kg·d)剂量灌胃，1次/d。(4)顺铂组(D)：顺铂以生理盐水1∶1稀释，按1 mg/(kg·d)，腹腔注射，隔日1次。(5)中药加顺铂组(E)：予逐饮Ⅰ号按生药量10.8 g/(kg·d)灌胃，并予顺铂以生理盐水1∶1稀释，按1 mg/(kg·d)，腹腔注射，隔日1次。
于造模次日，A、B组予生理盐水灌胃7 d，C、E组予中药灌胃7 d，D、E组予DDP，7 d中隔日腹腔注射给药。
2.4 取材及样品处理 造模后第8 d，5组中除观察生存期的8只，其余腹腔注射1.5%戊巴比妥钠(0.3 mL/100m2)麻醉。(1)大鼠血清bFGF的测定。(2)大鼠恶性胸水bFGF的测定。(3)逐饮Ⅰ号对恶性胸水大鼠生存期的影响。
从造模次日观察，共给药7 d，每日统计大鼠的死亡数量，于21 d为止，超过21 d按21 d计算。计算各组中位生存时间及生命延长率。
2.5 统计学方法 实验数据采用统计软件SPSS 13.0进行统计，全部数据均采用均数加减表示(±s)，组间比较用t检验，P＜0.05有统计学意义。
3 实验结果
3.1 对各组血清中bFGF的影响 见表1。
表1 逐饮Ⅰ号对各组大鼠血清bFGF含量的影响（略）
注：与空白组比较，#P＜0.05，##P＜0.01;与模型组比较，▲P＜0.01；与中药加顺铂组比较，☆P＜0.05；与顺铂组比较，△P＞0.05
3.2 对各组大鼠胸水bFGF的影响 见表2。
表2 逐饮Ⅰ号对各组大鼠胸水bFGF含量的影响（略）
注：与模型组相比较，▲P＜0.01；与中药加顺铂组比较，☆P＜0.05；与顺铂组比较，△P＞0.05
3.3 对各组大鼠生存期的影响 见表3。
表3 逐饮Ⅰ号对各组大鼠生存期的影响（略）
表3显示：中位生存时间和生命延长率依次为中药加顺铂组＞顺铂组＞中药组。
4 讨论
4.1 逐饮Ⅰ号对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)影响作用的探讨 bFGF是一种分泌型多功能细胞因子和体内最为有效的血管生成因子之一，通过与细胞膜上的高亲和力受体FGFR结合起作用，在肿瘤患者中，bFGF主要由肿瘤细胞及浸润至肿瘤组织内的淋巴细胞和巨噬细胞分泌，它可通过自分泌和旁分泌作用直接刺激肿瘤细胞，在许多肿瘤血管生成中是不可缺少的因素，与肿瘤的生长、侵袭、转移、预后关系密切［5］。bFGF不仅参与肿瘤血管生成，且能促进肿瘤细胞生长，抑制凋亡，而细胞凋亡受抑制则是肿瘤多药耐药的重要机制［５］。抗血管生成因子的产生及抑制其生物活性的发挥是癌症策略的一个有效方法,在肿瘤抗血管治疗中有着重要的地位。血管形成被认为是肿瘤转移的一个主要步骤。bFGF 可促进肿瘤细胞增殖，并促进肿瘤血管生成，对肿瘤生长、转移、预后起重要作用，作为肿瘤治疗的新靶点而日益受到关注。
本实验研究发现，模型组血清bFGF的含量明显高于空白对照组，中药组、顺铂组、中药加顺铂组，提示恶性胸水状态血清中bFGF显著升高；中药组、顺铂组血清和胸水中bFGF含量均明显低于模型组。中药组血清和胸水中bFGF与顺铂组相近。说明逐饮Ⅰ号可以明显降低恶性胸水大鼠血清及胸水中血管生成因子bFGF含量，从而推测逐饮Ⅰ号的抗癌作用可能是通过降低促进血管生长因子的含量，抑制血管生成，并进一步抑制了 EAC癌肿的生长。同时本研究发现逐饮Ⅰ号对恶性胸水大鼠的影响与顺铂组疗效相近，提示逐饮Ⅰ号除了上述作用外或许还可能像顺铂那样有更多的作用机制，这将有待进一步深入研究。另外中药加顺铂组血清及胸水的bFGF含量均低于模型组，提示逐饮Ⅰ号与顺铂可能有协同作用关系。逐饮Ⅰ号可能有望成为较有前景的血管生成抑制剂，通过阻断肿瘤赖以生长与转移的营养来源和迁移通道达到抗癌作用。
4.2 逐饮Ⅰ号延长生存期作用的探讨 恶性胸水多为肺癌、乳腺癌、卵巢癌等浸润、转移至胸膜后产生的积液，患者预后较差，亦报道手术及放、化疗疗效不佳［6?7］。如何有效地防治恶性肿瘤对胸膜的浸润、种植与转移，控制癌性积液的生长，改善患者生存质量及延长生存期。是我们研究的重点。
抗肿瘤转移药物是指特异性地干扰或阻断肿瘤转移过程中的某个或某些环节，从而抑制肿瘤转移行为、转移灶形成和的一类药物。目前，在衡量药物抗转移的作用时，一般通常以转移灶个数的多少、大小和动物生存时间为主要标准。本实验显示：中药加顺铂组、中药组、顺铂组中位生存时间较模型组明显延长，其生命延长率分别为75%、25%，41.7%，提示逐饮Ⅰ号及顺铂对恶性胸水有防治作用，可显著延长恶性胸水大鼠的生存期。中药加顺铂组中位生存时间及生命延长率较顺铂组和中药组均明显延长，顺铂组中位生存时间和生命延长率较中药组略有延长，提示逐饮Ⅰ号与顺铂作用相近并有协同作用关系。
【文献】
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