大鼠CAG证病结合模型的宏观症征观察

【摘要】  　　目的:观察大鼠慢性萎缩性胃炎(CAG)证病结合模型宏观症征的改变。方法：Wistar雌性大鼠，随机分为对照组、CAG组、脾虚CAG组、肝郁CAG组和肾虚CAG组。CAG造模采用脱氧胆酸钠和阿斯匹林水溶液交替饮用加免疫损伤法，脾虚造模采用耗气破气加饥饱失常法，肝郁造模采用钳夹激怒加肾上腺素注射法，肾虚造模采用MTU饮用法。总造模时间35～51周。结果：各CAG证病结合模型在症状、舌象、体重、身长、尾长、Lees指数、腹膜后脂肪湿重和指数、体温、食量和饮水量、口腔pH值、胃液pH值等方面出现与衰老、虚证、肝郁、发育、代谢、胃粘膜萎缩等相关的变化。结论：本实验重视慢性造模的证病结合模型宏观症征的观察，具有一定意义。

【关键词】  大鼠；CAG；证病结合模型；宏观症征

　　宏观症征是反映人体病理的重要指征，也是中医学的临床辨证的主要依据。我们在大鼠CAG 证病结合模型的实验研究中重视宏观症征的观察。

　　1  材料和方法

　　1.1  动物及分组  普通级Wistar雌性大鼠，320只，体重(198.7±23.71)g，北京医科大学实验动物部提供。按体重配对随机分为5组,对照组60只，CAG组65只，脾虚CAG组65只，肝郁CAG组65只，肾虚CAG组65只。

　　1.2  药品及试剂  脱氧胆酸钠(北京市海淀区微生物培养基制品厂,批号930901)0.3%水溶液；阿斯匹林(湖南洞庭制药厂，批号940722)0.6%水溶液；川厚朴:枳实:大黄(购自北京北新中药店，经鉴定生大黄为Rheumpalmatum，川厚朴为Magnolia  officinalis，枳实为Citrus  aurantium)为3:3:2的100%水煎剂；0.1%肾上腺素注射液(北京制药厂,批号92041710)；甲基硫氧嘧啶(MTU，北京化工厂，批号750820)0.08%水溶液。

　　1.3  造模方法

　　1.3.1  CAG造模  取上述浓度的脱氧胆酸钠和阿斯匹林水溶液隔周交替代饮水至实验结束。并取同批大鼠胃粘膜组织生理盐水溶液(30%)，与等量完全弗氏佐剂混合，充分乳化后,足跖部皮内注射，在实验第10、24和48d作免疫注射(末次注射浓度为60%，不加弗氏佐剂)，0.1ml/只；造模时间35～51周。

　　1.3.2  脾虚造模  实验第6周开始，用耗气破气加饥饱失常法，取上述比例和浓度的川厚朴、枳实、大黄煎剂隔日灌胃，3ml/只，同时隔日喂饲，喂饲日不限量；造模时间30～46周。

　　1.3.3  肝郁造模  实验第8周开始，用钳子夹大鼠尾部，使之保持激怒、争斗状态，每天30min，同时每3周0.1%肾上腺素腹侧皮下注射2次，0.1ml/只·次(含肾上腺素0.1mg)；造模时间28～44周。

　　1.3.4  肾虚造模  实验第6周开始，MTU以0.08% 浓度加入脱氧胆酸钠溶液或阿斯匹林溶液中自饮；造模时间30～46周。

　　1.4  各组处置  动物购回预养2周后造模。对照组：正常饲养；CAG组：CAG造模；脾虚CAG组:CAG造模加脾虚造模；肝郁CAG组：CAG造模加肝郁造模；肾虚CAG组：CAG造模加肾虚造模。各组分别于实验35、45、51周分3批处死动物检测各指标。

　　1.5  观察指标  实验前，实验过程和实验第35、45、51周分批观察动物症状及活体舌象，体重，身长，尾长，Lees指数，腹膜后脂肪湿重和指数，体温，食量，饮水量，拉尾排便阳性率，氧耗量，口腔pH值，胃液pH值。
    　　
　　腹膜后脂肪指数为脂肪重量与体重之比。体温为腋温，采用半导体温度计检测。食量和饮水量采用组内群测方法，连续测量1周。氧耗量检测徐敏方法［1］。口腔pH值用何庆年法［2］:精密试纸(pH6.9～8.4)从口侧放入口腔，让动物用舌头搅拌数下,取出比色。测量前30min实验组将药液换成自来水。胃液pH值按唐旭东法：动物禁食不禁水24h，乙醚吸入麻醉,剖腹后结扎贲门和幽门，摘出全胃，沿胃大弯剖开胃腔，以1.5ml生理盐水冲洗胃腔并收集，用精密试纸测pH值。

　　1.6  统计学处理  组间比较采用t检验。

　　2  结果

　　2.1  症状  实验前各组动物毛色光润，耳尾色粉红，神态活泼，大便正常，不扎堆。
    　　
　　对照组:实验27周后，毛色稍差，1只见白内障，动物性格转为温顺；实验34周毛色开始变黄。
    　　
　　各实验组实验4周后，均见毛色光泽开始变差，眼稍眯。
    　　
　　CAG组:实验13周后，开始见尾色黄，部分动物见稀便；实验27周后，见瘦弱，毛色、尾色明显差。
    　　
　　脾虚CAG组：实验8周，见毛脏，稀便，神态萎靡，耳尾色白，扎堆拱背；实验13周后，开始见背毛稀，尾色黄；实验27周后，下门齿相对于对照组、CAG组、肝郁CAG组较黄,1只动物见白内障。
    　　
　　肝郁CAG组：实验8周后，开始见易怒，尾巴发热；实验34周后，见激怒明显，无故撕咬。
    　　
　　肾虚CAG组：实验8周见毛枯，嗜睡，眼睁不大，温顺，个别有颤抖，耳尾色白，部分溏便；实验27周后，开始见全身脱毛，行动迟缓，形态虚弱,3只动物见白内障，下门齿变黄最明显。实验34周后，见身上发冷。死亡率高。

　　2.2  舌象  实验8周后，对照组舌淡红，苔薄白;CAG组舌淡红，苔略少；脾虚CAG组舌淡红，苔少；肝郁CAG组舌淡红，苔薄白；肾虚CAG组舌淡红，暗，苔略少。
    　　
　　实验27周后，对照组舌淡红，苔薄白;CAG组舌偏红，暗；脾虚CAG组舌嫩；肝郁CAG组舌有偏红趋势；肾虚CAG组舌淡嫩。

　　2.3  体重  对照组动物在实验过程中体重稳步上升；各实验组体重增长均慢于对照组；其中以脾虚CAG组和肾虚CAG组体重增长最慢。

　　2.4  身长  对照组动物在实验过程中身长稳步增长；各实验组身长增长均慢于对照组,其中仍以脾虚CAG组和肾虚CAG组最慢。与体重结果一致。

　　2.5  尾长  对照组动物在实验过程中尾长稳步增长；各实验组尾长增长均慢于对照组；其中以脾虚CAG组、肝郁CAG和肾虚CAG组尾长增长最慢。

　　2.6  Lees指数  Lees指数反映肥胖程度，实验结果，肝郁CAG组和肾虚CAG组Lees指数较大。

　　2.7  腹膜后脂肪湿重和指数  见表1。

　　表1  实验过程各组腹膜后脂肪湿重和指数变化（略）

　　综合腹膜后脂肪湿重和指数的结果，肝郁CAG组和CAG组脂肪有所减少，脾虚CAG组和肾虚CAG组显著减少，其中又以脾虚CAG组最明显。

　　2.8  体温  各实验组体温均低于对照组，以肾虚CAG组体温降低最明显。

　　2.9  食量和饮水量  食量以g/只·d计算，CAG组和肝郁CAG组与对照组食量无显著区别,肾虚CAG 组食量总的少于对照组，脾虚CAG组由于采用饥饱失常造模方法没有统计食量。

    　　
　　饮水量以每日每只计则各实验组总体低于对照组，以每克食物计则无明显差异。脾虚CAG组由于采用饥饱失常造模方法没有统计饮水量。

　　表2  实验过程各组口腔pH值变化（略）

　　注：P值未注明者均>0.1，下同

　　2.10  口腔pH值  见表2。
    　　
　　实验过程中，各实验组口腔pH值呈现较稳定的上升趋势。

　　2.11  胃液pH值  见表3。

　　表3  实验第51周各组胃液pH值变化（略）

　　各实验组胃液pH值均高于对照组，说明胃酸分泌减少。

　　3  讨论

　　3.1  宏观症征是反映人体病理的重要指征，也是中医学的临床辨证的主要依据，本实验重视宏观症征的观察。包括观察较全面的宏观症征，以及较大样本长时间动态观察。

　　3.2  本实验主要特点之一是慢性造模：CAG 和脾虚证、肝郁证、肾虚证均为典型的慢性病证。“慢性”并非仅为疾病的一个简单性质，由于它为时间维度，而使疾病病理立体化。如：①使疾病病理具有内在性和稳定性。也即疾病成为机体的一种主动过程，在外来病因撤除后也不易恢复；②使疾病病理具有统一性。也即使不同病因形成的同一疾病病理的“个性”尽量减少。所以，本实验证、病和证病结合模型均选择较长的造模时间。
    　　
　　慢性造模体现在宏观症征上，是出现一些急性模型难以出现的症征。如毛稀、脱毛、下门齿变黄、白内障、肝郁CAG模型情绪的固化、影响身长(尾长)等。

　　3.3  由于实验时间较长，各组动物均出现衰老变化，特别是上门牙变黄和白内障。

　　3.4  与对照组比较，动物出现虚象，其程度由轻至重依次为：肝郁CAG组→CAG组→脾虚CAG组→肾虚CAG组。肾虚CAG组虚象、衰老表现最为严重，特别在牙齿变黄，白内障等表现方面，并渐见阳虚表现。能量代谢上，各实验组体温均低于对照组，以肾虚CAG组体温降低最明显。脾虚CAG组和肾虚CAG组动物舌象以淡嫩为特征。实验过程中各实验组体重增长均慢于对照组，又以脾虚CAG组和肾虚CAG组体重增长最慢。肾虚CAG组食量减少。
    　　
　　肝郁CAG组造模后逐渐出现郁怒症状，并渐成反射性改变。表现在对敲笼子有缩尾反应(非肝郁组只有探究反应)，或稍加刺激后即表现出强烈反应，超出刺激程度。　　

　　在身长上，由于造模时间长，可见各实验组身体发育受到影响。以脾虚CAG组和肾虚CAG组身长和尾长(以及肝郁CAG组的尾长)增长最慢，类似中医以长期虚损为本的“疳证”表现。南宋《小儿卫生总微论方》言：“脾胃虚弱，津液内耗，皆能成疳”。与以往耗气破气加饥饱失常法造模26周的大鼠脾虚证模型结果一致［3］。
    　　
　　Lees指数反映肥胖程度，综合实验全过程的结果，肝郁CAG组和肾虚CAG组动物Lees指数较大，综合腹膜后脂肪湿重和指数的结果，CAG组和肝郁CAG组脂肪有所减少，脾虚CAG组和肾虚CAG组显著减少，其中又以脾虚CAG组最明显。
    　　
　　实验过程中，各实验组口腔pH值呈现较稳定的上升趋势，其意义待研究。何庆年等研究发现，40例脾虚或脾虚兼证病人与60例健康人比较，口腔液pH值明显偏酸［2］。卢红等检测3091名60岁以上老年人和703名50～59岁老年前期人员唾液的pH值，结果显示老年前期的一般仍处于接近中性值，而老年期则明显偏酸性［4］。迟永利等检测舌面pH值，发现阳虚、湿热患儿明显高于正常儿童，并引述“有人认为舌面pH值与中医辨证有关，阴虚多偏酸性，阳虚多偏碱性”。［5］
     　　
　　各实验组胃液pH值均高于对照组，结合各实验组胃粘膜萎缩情况［6～8］，说明胃酸分泌减少。

【】
  　　［1］徐 敏,陈革新,张晓晖,等.兔氧耗量测定方法的改进及其在阳虚模型研究中的应用［J］.福建中医药,1989,20(6):45-47.

　　［2］何庆年,周建穗,刘明建,等.健康人与脾虚患者口腔液酸碱度(pH值)之比较及其意义［J］.云南医药,1983,4(4):229-231.

　　［3］陈小野,邹世洁,张 智,等.大鼠长期脾虚造模的实验研究［J］.中医基础医学杂志,1995,1(1):37-41.

　　［4］卢 红,曹宏康,乐福媛,等.老年人唾液的pH值［J］.临床口腔医学杂志,1989,5(3):134-136.

　　［5］迟永利,秦吉华,张葆青.小儿舌面pH值及舌菌状乳头计数与中医辨证的关系［J］.山东中医学院学报,1989,13(1):67-68.

　　［6］陈小野,邹世洁,佟 彤,等.大鼠CAG证病结合模型胃粘膜病理研究(I)［J］.中医药学刊,2002,20(3):292-295.

　　［7］陈小野,邹世洁,樊雅莉,等.大鼠慢性萎缩性胃炎证病结合模型胃粘膜病理研究［J］.上海实验动物,2002,22(1):35-38.

　　［8］陈小野,邹世洁,佟 彤,等.大鼠CAG证病结合模型胃粘膜病理研究(III)［J］.实验动物科学与管理,2001,18(3):5-7.