柔毛淫羊藿对去卵巢小鼠骨密度及生物力学指标的影响
作者：左飞武 周宁 吴培要 韩小东 任光友
【摘要】 目的 观察柔毛淫羊藿对去卵巢小鼠骨密度及生物力学指标的影响。方法 切除雌性小鼠双侧卵巢制备骨质疏松动物模型，随机分为模型组、己烯雌酚组及柔毛淫羊藿高、中、低剂量组，另设对照组（假手术组）。各组给予相应药物，60天后测定小鼠全身及脊柱骨密度、骨最大载荷及骨挠度。结果 与模型组比较，柔毛淫羊藿高、中、低剂量组动物的全身及脊柱骨密度明显升高；柔毛淫羊藿高、中、低剂量组动物的骨最大载荷和骨挠度明显升高。结论 柔毛淫羊藿能明显改善去卵巢小鼠的骨质疏松症状。
【关键词】 柔毛淫羊藿 去卵巢小鼠 骨质疏松 骨密度 骨最大载荷 骨挠度
【Abstract】 Objective: To investigate the effects of Epimedium pubescens Maxim on bone mineral density(BMD) and bone biomechanical properties in ovariectomized mice. Methods: Made the osteoportic model by cutting off two side of ovary, the female mice were randomly divided into model group, diethylstilbestrol group and high, middle, low dose of Epimedium pubescens Maxim groups, set up the control group in addition. The mice were given corresponding medicine, 60 days later, to measure BMD of general and vertebral column，maximum load and flexibility of bone. Results: Compare to model group, BMD of general and vertebral column，maximum load and flexibility of bone rise obviously in animal of high, middle, low dose of Epimedium pubescens Maxim groups. Conclusion: Epimedium pubescens Maxim can improve obviously the symptom of osteoportic mice.
【Key words】Epimedium pubescens Maxim Ovariectomized Mice Osteoportic BMD Maximum load of bone Flexibility of bone
淫羊藿具有温肾壮阳、强筋骨、祛风湿的功效,其复方制剂被广泛用于骨质疏松症的。四川、贵州地处我国西南部，是我国淫羊藿药材的主产区 。然而淫羊藿品种繁多，不管是《神农本草经》所载的淫羊藿，或是中医临床应用的淫羊藿，还是药效报道的淫羊藿均为数种淫羊藿属植物的统称，尚未见有具体某一淫羊藿药材的药理作用研究。本实验通过骨质疏松小鼠模型观察了柔毛淫羊藿对其骨密度以及骨生物力学的影响，以期对柔毛淫羊藿的药用价值进行评估，为其进一步的开发利用提供。
1 材料和方法
1.1 实验材料 柔毛淫羊藿：棕褐色浸膏干粉，1克相当于6.28克生药，实验时蒸馏水配制成所需浓度的混悬液；己烯雌酚：合肥久联制药有限公司，批号：20060518；昆明种雌性小鼠，体重18－22g，由贵阳医学院动物中心提供，合格证号SCXK (黔)2002-0001；骨密度仪：美国通用电气有限公司；骨挠度检测仪：贵阳医学院设备科。
1.2 实验方法
模型制作 将小鼠予戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔注射（ip）麻醉，俯位固定，无菌操作，背部脊柱两侧作切口，分别找到左右侧输卵管，摘除其末端的卵巢，保留子宫。其中14只小鼠作假手术组，只切除卵巢旁等体积大脂肪组织。缝合切口前给予青霉素（4万ц/kg）预防感染，术后小鼠回笼饲养，自由饮食。
分组及用药 术后次日，除假手术组外其余小鼠随机分为5组（每组14只）：模型组（等容积生理盐水）、己烯雌酚组（2mg/kg）、柔毛淫羊藿高剂量组（柔高组:200mg/kg）、柔毛淫羊藿中剂量组（柔中组:100mg/kg）、柔毛淫羊藿低剂量组（柔低组:50mg/kg）。加上假手术组（等容积生理盐水）共6组动物。小鼠均灌胃给药（ig），每天1次，连续60天。每周根据小鼠体重调整2次药量。
1.3 观测指标
1.3.1 骨密度测定 末次给药后1h，小鼠以戊巴比妥钠ig麻醉，用骨密度仪测小鼠骨密度。
1.3.2 骨生物力学测定 骨密度测定完成后，处死小鼠，分别取左股骨，置于骨质挠度测试仪上对其施压，以股骨断裂时所承受的最大载荷和最大挠度为判断其机械强度的指标。
2 结果
2.1 柔毛淫羊藿对骨质疏松小鼠骨密度的影响 与假手术组比较，模型组动物的脊柱骨密度和全身骨密度明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，柔高、中、低组动物脊柱骨密度明显升高（P<0.01，P<0.01，P<0.05）；与模型组比较，柔高、中、低组动物的全身骨密度明显升高（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。
与假手术组比较 △P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较 *P<0.05，**P<0.01，下同。
2.2 柔毛淫羊藿对骨质疏松小鼠骨生物力学的影响 与假手术组比较，模型组动物的骨最大载荷和骨挠度明显降低（P<0.01，P<0.01）；与模型组比较，柔高、中、低组动物的骨最大载荷明显升高（P<0.05，P<0.01，P<0.05）；与模型组比较，柔高、中、低组动物的骨挠度明显升高（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。
3 讨论
摘除卵巢的动物是目前公认的模仿人类骨质疏松症的模型，Wronski等研究发现，成年动物卵巢切除后，由于雌激素缺乏使骨改建呈高转换型，骨吸收和骨形成均增高，但骨吸收大于骨形成，骨形成相对减少，骨改建呈负平衡。动物卵巢切除后引致的骨丢失与人类绝经后骨质疏松症有相似之处。本文选用小鼠作模型复制对象，去卵巢后小鼠模型组骨密度测量值显著下降，与假手术组比较具有显著意义，表明骨质疏松症动物模型复制成功。
骨密度是骨矿代谢中量化骨量的重要指标，是研究骨质疏松和评价药效的重要检测手段。本实验中，柔毛淫羊藿给药60天，可见动物骨密度均明显升高。此作用可能系柔毛淫羊藿抑制了破骨细胞的骨吸收，降低了去卵巢动物的高骨转换率，防止骨量的快速丢失，增加骨量而使骨密度增加。
骨最大载荷和骨挠度是反映骨结构力学的指标。去卵巢动物因骨结构发生异常变化，导致骨结构力学的强度下降。本实验中，柔毛淫羊藿给药60天，可见动物的骨最大载荷和骨挠度均升高。表明柔毛淫羊藿能增强动物的骨韧性，降低脆性，改善了去卵巢动物的骨结构力学强度。
有学者认为，淫羊藿的主要成分是淫羊藿总黄酮，后者既可促进成骨细胞的增殖，又可促进其进一步分化成熟，因而提高了成骨细胞骨形成的功能，通过抑制骨吸收和促进骨形成而发挥抗骨质疏松的作用。柔毛淫羊藿对成骨细胞的作用是否与淫羊藿总黄酮有关，尚待证实。柔毛淫羊藿抗骨质疏松的作用机制及其有效成分的药理作用有待研究。
