30例慢性粒细胞白血病患者骨髓涂片甲苯胺蓝染色结果分析

【关键词】  慢性粒细胞白血病；,甲苯胺蓝染色；,骨髓嗜碱性粒细胞分类计数

　　［摘要］ 本文对30例慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓涂片进行甲苯胺蓝染色和瑞姬氏染色比较。结果显示：同一患者骨髓涂片，甲苯胺蓝染色嗜碱性粒细胞百分率明显高于瑞姬氏染色。由于CML患者骨髓中嗜碱性粒细胞均有增多，且嗜碱性粒细胞百分率的高低与患者的预后又有着一定的关系，故甲苯胺蓝染色应作为CML患者骨髓涂片的常规化学染色。

　　［关键词］ 慢性粒细胞白血病； 甲苯胺蓝染色； 骨髓嗜碱性粒细胞分类计数

　　慢性粒细胞白血病(CML)为多能干细胞克隆性增殖而引发的粒细胞异常增生的恶性疾病，其特点之一为外周血及骨髓中嗜碱性粒细胞增高［1］。本文通过两种不同染色方法的比较，旨在探讨如何更加准确的分类计数嗜碱性粒细胞，以进一步评估甲苯胺蓝染色在应用中的价值。

　　1　材料和方法

　　1.1　标本来源　30例CML患者为2004年至2006年的门诊和住院病例，均符合CML诊断标准［2］。

　　1.2　染色方法

　　1.2.1　试剂配制　甲苯胺蓝粉剂1 g溶于70%乙醇500 ml中。

　　1.2.2　染色和计数　选取厚薄均匀的骨髓涂片用甲苯胺蓝染液染30 min，流水冲洗，干后镜检，计数500个有核细胞嗜碱性粒细胞百分率，同时以瑞姬氏染色为对照。

　　1.2.3　阳性判定　甲苯胺蓝染色后，细胞浆中出现紫色、红色或粉红色颗粒为阳性，而背景细胞蓝色者为阴性。

　　1.3　统计学处理　数据以±s表示，显著性采用t检验。

　　2　结果

　　2.1　两种染色结果比较　甲苯胺蓝染色嗜碱性粒细胞分类计数阳性率(8.41±1.82)%明显高于瑞姬氏染色(6.11±1.66)%，t = 7.02 ，P <0.05，差异有显著性。

　　2.2　不典型嗜碱性粒细胞　30例CML患者骨髓涂片中不典型嗜碱性粒细胞占有核细胞总数的2.3%，占嗜碱性粒细胞总数的27%。

　　2.3　嗜碱性粒细胞形态　成熟嗜碱性粒细胞胞体呈圆形，核形不规则，分叶不明显。经瑞姬氏染色，胞质中有大小不等分布不均的深蓝色嗜碱性特殊颗粒。不典型嗜碱性粒细胞胞体稍小，大小与淋巴细胞相似，胞浆量少，细胞呈圆形或不规则形，胞膜不清楚，胞质中特异性颗粒增多，并将核遮盖，瑞氏染色下，由于颗粒细小且模糊，结构不清，很容易误认为淋巴细胞(见图1)。

　　图1　瑞姬氏染色, 箭头示不典型嗜碱性粒细胞(略)

　　甲苯胺蓝染色后可见较多细小的紫红色颗粒充满胞浆，由于背景细胞为蓝色，故极易辨认(见图2)。

　　图2　甲苯胺蓝染色，箭头示阳性的不典型嗜碱性粒细胞(略)

　　3　讨论

　　甲苯胺蓝染色的原理是根据甲苯胺蓝是一种异染性离子染料，在一定条件下染酸性糖共轭物时，染色结果与染料固有的颜色不同，由蓝变紫。 CML患者嗜碱性粒细胞均有增高。 嗜碱性粒细胞的轻度增高可能是骨髓增生性疾病(MPD)的一个早期征兆［3］，明显增高的嗜碱性粒细胞可提示预后差或表明已从CML的慢性期转变为加速期。许多类白血病反应,其骨髓形态学改变与CML相似，但未见嗜碱性粒细胞增高［4］，故如何更加准确的计数嗜碱性粒细胞，意义十分显著。目前，专门用于计数嗜碱性粒细胞的方法很少，而骨髓嗜碱性粒细胞分类主要靠瑞姬氏染色，由于受染色条件及不典型嗜碱性粒细胞形态的影响，分类计数的准确性不高，本文结果表明瑞姬氏染色分类计数嗜碱性粒细胞约降低27%左右。用甲苯胺蓝染色，不但方法简便，背景清晰，不典型嗜碱性粒细胞染色阳性十分明显，且其计数结果有较高的准确性和可信度，故在CML患者骨髓涂片的分类计数中，应将甲苯胺蓝染色作为常规的化学染色。

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　　［1］　陶元. 血液学及血液学检验［M］.第1版.北京：人民卫生出版社,1997：6163 .

　　［2］　张之南，沈悌.血液病诊断及疗效标准［M］.第2版.北京：出版社,1998：219227.

　　［3］　罗绍凯，洪文德，李娟.临床血液病学［M］.第1版.北京：科学出版社,2003：335336 .

　　［4］　卢兴国.造血和淋巴组织肿瘤诊断学［M］.第1版.北京：科学出版社,2005：134141.