肾病综合征患儿IL

【关键词】  IL

　　［摘　要］ 目的：探讨原发性肾病综合征(ＮＳ)患儿外周血IL4与糖皮质激素(ＧＣ)效应的关系。方法：按激素疗效的不同将31例NS患儿分为GC有效型17例及GC无效型14例，及20例对照组均于治疗前抽取静脉血分离单个核细胞，加入植物血凝素刺激其生长，传代。48 h~72 h后取其上清液，用酶联免疫吸附双抗夹心法（ELISA）检测IL4。结果:NS中GC有效组体外PBMCs经PHA刺激产生的IL4水平（195.70±36.61）明显高于GC无效组（121.17±43.81）及对照组（37.20±12.89）P<0.01。结论：ＮＳ患儿外周血IL4表达升高可能是ＧＣ治疗敏感的原因之一。

　　［关键词］ IL4;NS；GC敏感

　　糖皮质激素(ＧＣ)是治疗原发性肾病综合征(ＮＳ)的主要药物,ＮＳ的预后在很大程度上取决于患儿对ＧＣ治疗反应。CD4+T细胞依其分泌的细胞因子的类型分为二个亚群Th1和Th2。Th2以产生IL4为特征。自从1990年Fisher研究发现NS患儿存在T细胞功能紊乱以来，许多学者对NS的发病机制进行了广泛而深入的研究，研究发现活动期的NS CD4+下降及CD8+的升高；国内顾莲芝等提出CD8+是影响激素疗效的关键。而IL4与GC疗效的关系国内无人报道。本文将对NS的GC疗效与IL4之间的关系进行探讨。

　　1　对象和方法

　　1.1　对象　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　来自2003年2月至2005年2月间在我院、西安大学第一、儿童医院、西安市中心医院诊断为NS患儿31例，全部符合小儿2001年11月珠海会议中华儿科肾脏病学组制定的NS诊断标准。男20例，女11例，年龄2岁~15岁。临床表现为单纯性肾病18例，肾炎性肾病13例，分为GC治疗有效组17例及GC治疗无效组14例。GC治疗有效组：应用GC后，8周内尿蛋白明显减少，血浆白蛋白上升，尿量增加，水肿消失的为GC有效组。GC治疗无效组：应用GC后，8周内尿蛋白无减少，血浆白蛋白无上升，尿量无增加，水肿未消失的为GC无效组。对照组：20例健康儿童，来自西安市福利院的儿童，其中男9例，女11例，年龄2岁~14岁，平均年龄为7岁（采血前均未患感染性疾病，未服用过GC和免疫抑制剂）。

　　1.2　方法　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　NS患儿于明确诊断后GC治疗前清晨空腹静脉取血3 ml，快速注入盛有肝素的无菌小瓶中，吸取淋巴细胞分离液（每10 ml稀释血加3 ml~5 ml分离液）或1∶1置于离心管倾斜45度角，将用PBS稀释的血液在距分离层液面上1 cm处沿试管壁缓慢加至分离层上面，将离心管置于水平式离心机内，在18 ℃~20 ℃下，1 500转离心20 min，结束后用直头吸管轻轻插入灰白色层，沿管壁轻轻吸出灰白色的单个核细胞，盛入另一只离心管中，将所得的PBMNC混液用5倍体积的RPMI1640洗涤2次，依次以2 000转/min,5 min，1 500转/min在室温下（18 ℃~25 ℃）离心10 min，可去掉大部分混杂的血小板。在沉淀的PBMNC中加入1 ml 0.83%氯化氨溶液，轻轻震荡20 min，即可裂解红细胞，经1 500转/min，10 min离心洗涤，即可去除红细胞。RPMI1640或PBS洗涤离心3次后，加入10%小牛血清的RPMI1640培养基定容细胞，记数细胞后在调整至所需浓度，一般每毫升血中分离出1×106个单核细胞。用台盼蓝染液检查所分离的细胞活性，记数200个细胞，活细胞的百分率，一般活性应在95%以上。将细胞悬液接种于培养瓶中，加入25 μg PHA/ml。将培养瓶放入37 ℃ PH 7.2~7.45 CO2孵箱中培养48 h~72 h后收集上清液，冻存于-20 ℃待测细胞因子。用ELISA检测PBMCs上清液IL4,IFNγ的含量（进口试剂盒由深圳晶美公司提供）。24 h尿蛋白含量测定采用磺基水杨酸比浊法。

　　1.3　统计学处理　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　
　　结果用SPSS软件进行统计学处理，检验结果用±s表示。IFNγ方差不齐时用GamesHowell法。各组间采用方差分析及AVOVAq检验(NewmanKeuls检验及LSD双重检验)，两种细胞因子与24 h尿蛋白定量的相关性用直线相关性分析。