外源性雌激素剂量与去势雌性大鼠海马CA1区NOS阳性神经元表达相关性的研究
【关键词】 ,雌激素
［摘要］ 目的：探讨雌激素补充对去势雌性大鼠海马CA1区一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元表达的影响及剂量的效应关系。方法：20只去势雌性Wister大鼠分成不同剂量组：0 μg（对照组）、20 μg(0.08 mg/kg) 组、50 μg(0.20 mg/kg) 组、100 μg(0.40 mg/kg)组；1周后，用免疫组化法进行观察。结果：NOS阳性神经元在CA1区，其数目在20 μg、50 μg剂量组数目出现剂量递增效应，与对照组有明显差异（P＜0.05）；但在100 μg剂量组与对照组比较没有明显差异（P＞0.05），同时50 μg与100 μg剂量组比较有明显差异（P＜0.05）。结论：雌激素补充疗法能选择性影响CA1区NOS阳性神经元，并有可能影响学习和记忆能力。
［关键词］ 雌激素；去势；CA1区
雌激素补充治疗在中枢神经系统作用有许多相关报道，它能增强胆碱能神经元的活动，拮抗β淀粉样蛋白毒性，减少A β产生，并能拮抗氧化应激，增加纤维侧支抽芽，减轻脑缺血的损伤［1～5］。但目前雌激素补充对NOS阳性神经元影响的报道较少，同时对雌激素补充治疗采用低剂量还是高剂量，仍有诸多争论。本文旨在探讨不同剂量雌激素补充对去势雌性大鼠海马CA1区NOS阳性神经元影响的剂量效应关系。
1材料与方法
1.1去势雌性大鼠动物模型的建立 选取健康的Wister雌性大鼠20只（体重约200 g～250 g）行去卵巢手术，并将其分为4组：0 μg（对照组）、20 μg、50 μg、100 μg苯甲酸雌二醇（EB）组，并将不同剂量药物分别溶于100 μg植物油中。于术后第2天皮下给药，隔天1次。
1.2免疫组化染色及玻片制作 1周后，将大鼠常规麻醉，开颅取脑，并后固定4 h，再转至30%蔗糖缓冲液保存至沉底，用恒温冰冻切片机切片，片厚约40 μm，取切片进行免疫组化染色，裱片制片。
1.3统计分析处理 先于明视野对各切片逐一观察，然后选取各组海马结构CA1区相同断面进行摄片，将40倍物镜下的图像输入四川大学图像图形研究所研制的MIAS－2000图像分析系统，人工分割、去伪，计数各个视野内阳性细胞的数目、灰度值。并经过SPSS作方差分析处理，LSD法对三组结果进行比较，并定义P＜0.05为差异显著性界值。
2结果
见表1。
表1 4组检测结果比较（略）
经过方差分析，20 μg、50 μg剂量组数目出现剂量递增效应，与对照组有明显差异（P＜0.05）；但在100 μg剂量组与对照组比较没有明显差异（P＞0.05），同时50 μg与100 μg剂量组比较有明显差异（P＜0.05）。
3讨论
NO是在一氧化氮合酶(NOS)的催化下,由L精氨酸分解为L瓜氨酸和NO而成。NO作为一种新型神经元信使物质，它参与多种经典神经递质的功能调控。同时与学习记忆有着密切关系，它被认为是海马长时程增强作用（LTP）中一种突触后至突触前的逆行神经递质。本实验发现雌性激素补充，50 μg剂量（0.2 mg/kg，隔天1次）能增加海马结构CA1的NOS阳性神经元的表达，而其他剂量组影响不明显；一周雌激素补充治疗使海马CA1区NOS阳性神经元数目呈剂量递增效应，但100 μg剂量组未出现明显改变，而且50 μg与100 μg组间出现明显差异，这提示50 μg剂量（0.2 mg/kg，隔天1次）在一周雌激素补充治疗中更加有效。
海马CA1区神经元与记忆有明显关系，1977年Andersen［6］等发现海马结构内部的神经环路――三突触回路存在于DG（齿状回）、CA1、CA2等区，而三突触回路是海马长时程增强（LTP）电生理效应的神经基础，与学习记忆关系密切。
综上所述，雌激素补充治疗对海马CA1区NOS阳性神经元的影响可能存在剂量关系，其作用机制还不十分清楚，推测可能是由于：雌激素补充治疗对NOS影响机制通过非基因组作用，刺激一氧化氮合酶产生NO，从而影响神经元的存活、分化、成熟、再生和可塑性，发挥雌激素样保护作用［7］。
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