HPLC法测定泰诺片中对乙酰氨基酚的含量

【摘要】  目的：建立泰诺片剂中对乙酰氨基酚的高效液相色谱测定方法。方法：采用ODS?C 18色谱柱，内标为非那西丁，流动相为甲醇?水(70：30，v/v)，流速1.0 ml/min，检测波长257 nm，测定泰诺片中对乙酰氨基酚的含量。结果：平均回收率为100.2%，RSD为0.42%。结论：本方法简便快速，结果准确可靠，可用于本制剂的含量测定和质量控制。

【关键词】  HPLC法；泰诺片；对乙酰氨基酚；内标法；非那西丁

　　Determination of Paracetamol in Tainuo Tablets by HPLC

　　Abstract:Objective To establish an assay method for paracetamol in Tainuo tablets by HPLC．Methods Paracetamol was analyzed with HPLC,ODS?C18 was packed in the analytical column,and phenacetin as internal standard.the mobile phase consisted of methanol?water(70:30)and the flow rate was 1.0 ml/min,The UV detection wave length was 257 nm．Results The average recovery was 100.2%,with RSD 0.42%.Conclusions This method was found to be simple,rapid,accurate and good for the determination of paracetamol and quality control.
　　
　　Key words:HPLC；Tainuo tablets；Paracetamol；Internal standard method；Phenacetin
   
　　泰诺片为解热镇痛抗炎药，为浅黄色薄膜衣片，其主要成分为对乙酰氨基酚，用于普通感冒、花粉症及其他上呼吸道感染或其他原因引起的发热、咳嗽、疼痛的对症。本实验采用内标非那西丁，HPLC法测定泰诺片中对乙酰氨基酚的含量，方法简便快速，结果准确可靠。

　　1  仪器与试药

　　1．1  仪器  Agilent 1100型高效液相色谱仪、紫外检测器（美国Agilent公司）；SEPU?3000色谱工作站(色谱仪器网)；天平(瑞士Sartorius)。

　　1．2  试药  对乙酰氨基酚对照品和内标物非那西丁（中国药品生物制品检定所）；泰诺片(市售，批号：060310223，060306115，060310220)；水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯。

　　2  方法和结果

　　2．1  色谱条件  色谱柱：ODS?C 18(250 mm×4.6 mm ID，5 μm)不锈钢柱；流动相：甲醇?水(70：30，v/v)；流速：1.0 ml/min；检测波长：257 nm；进样量20 μl；内标物为非那西丁，室温测定。

　　2．2  标准曲线的制备

　　2．2．1  内标贮备液和对照品贮备液的制备  精取非那西丁50 mg，加流动相溶解并定容至50 ml，得浓度为1 mg/ml的内标贮备液备用。精取对乙酰氨基酚对照品50 mg，加流动相溶解并定容至50 ml，得浓度为1 mg/ml的对照品贮备液备用。

　　2．2.2  标准曲线的制备  精密吸取对乙酰氨基酚对照品贮备液0.1 ml、0.2 ml、0.3 ml、0.5 ml、0.6 ml、0.8 ml，分别置6个10 ml容量瓶中，同时分别加入内标液0.2 ml，加流动相稀释至刻度，摇匀，即配成对乙酰氨基酚浓度为10 μg/ml、20 μg/ml、30 μg/ml、50 μg/ml、60 μg/ml、80 μg/ml，内标浓度为20 μg/ml的系列标准溶液，每一浓度进样3次，每次20 μl记录色谱图。以组分峰与内标峰的峰面积比为X，相应的组分浓度C为横坐标进行线性回归。得回归方程为：C=30.017X?1.3929，r=0.9998(n=6)。结果表明对乙酰氨基酚在10 μg/ml～80 μg/ml范围内线性关系良好。对乙酰氨基酚及内标之间分离良好，均达到基线分离，保留时间：对乙酰氨基酚2.890 min，内标非那西丁6.015 min，见图1。

　　图1  标准溶液的HPLC图谱　略

　　2．3  精密度试验  取泰诺片10片，精密称定，研细呈细粉状。精取细粉0.1 g，置50 ml容量瓶中，用甲醇定容。反复振摇10 min～15 min溶解，先用漏斗过滤，再用0.25 μm微孔滤膜过滤5 ml左右，精密吸取样品滤液1.0 ml，置50 ml容量瓶中，用流动相定容。按上述色谱条件，取对乙酰氨基酚浓度为40 μg/ml、内标浓度为20 μg/ml的标准溶液20 μl进样。重复进样6次测定，用内标法求出标示百分含量，其RSD=0.85%。

　　2．4  回收率试验  分别精取上述细粉共9份，置100 ml容量瓶中用甲醇定容。反复振摇溶解,过滤后，置100 ml容量瓶中，用流动相定容。各加入精密称定的对乙酰氨基酚对照品适量(低、中、高3种浓度，每种浓度称3份)，用流动相溶解，按标准曲线项下方法测定组分的含量，回收率，结果见表1。

　　表1  回收率测定结果(略)

　　2．5  样品测定  精取细粉适量，加内标溶液1.0 ml，加流动相定容至50 ml，摇匀。进样20 μl，测得峰面积以内标法计算含量。

　　表2  样品含量测定结果（略）

　　3  讨论

　　3．1  内标对比法  本实验采用内标对比法，在试样中加入内标物质，再经过高效液相色谱仪分析，以试样中待测组分和内标物的响应信号（蜂面积）之比确定待测组分的浓度。对乙酰氨基酚溶液在（257±1） nm波长处有最大吸收，可用于含量测定。选用非那西丁作内标物,两者的分离度较大,不影响对乙酰氨基酚的测定,提高了方法的准确性。

　　3．2  本法优点  应用本法简便快速，灵敏度高，稳定性好。所用流动相为甲醇?水(70：30，v/v)，价廉低毒，且使对乙酰氨基酚与内标物之间分离良好，精密度试验及相对回收率的RSD均＜1。故本法可用于泰诺片的含量测定和质量控制。

　　3．3  测定方法  由于泰诺片为固体，故需先研细成细粉状。对乙酰氨基酚在水中溶解度小，故先用甲醇溶解，再用流动相稀释定容，再依次用漏斗、0.25 μm微孔滤膜滤过，滤掉溶液中片剂的不溶性辅料，以免影响测定。