外周血NK，IL?12，CRP在子痫前期中的测定及意义

【摘要】  目的 测定子痫前期孕妇外周血NK、IL?12、CRP水平的变化并探讨其意义。方法 选择子痫前期患者42例，正常晚孕组20例，正常未孕育龄妇女20例，测定外周血NK细胞、IL?12及CRP水平并行统计学分析。结果 子痫前期组NK细胞平均值及IL?12，CRP水平明显高于正常晚孕组和正常未孕组；各组血中NK细胞值与IL?12水平呈正相关关系，NK与CRP之间相关性不明显。结论 NK细胞参与了子痫前期的发病，IL?12通过激活NK细胞，诱发免疫介导性血管内皮炎症、损伤引起子痫前期疾病；CRP水平在子痫前期时显著增加，可能成为临床早期发现子痫前期发病的一个灵敏指标。

【关键词】  子痫前期；杀伤细胞，天然；白细胞介素?12；C?反应蛋白

　　To explore the changes of NK, IL?12 and CRP levels in pre?gnancy with pre?eclampsia and its clinical significance. Methods  The NK cells, IL?12 and CRP levels were determined in the peripheral blood of 42 pregnant women with preeclampsia, 20 normal late pregnant women and 20 normal non?pregnant women. Results  Percentages of NK cells and levels of IL?12 and CRP were higher in the pre?eclampsia group than in the late pregnant group and the non?pregnant group. There was a positive correlation between percentage of NK cells and level of IL?12 and no evident correlation between NK cells and CRP. Conclusions  NK cells participate in the onset of pre?eclampsia. IL?12 intensifies immunological rejection on the maternal?fetal interface by activating the NK cells and induces immune?mediated damage of blood vessel endothelium and inflammatory reaction, which results in pre?eclampsia. CRP, which is increased in pregnancy with preeclampsia, may be a sensitive biochemical marker for early diagnosing  of preeclampsia.

　　Key words: Pre?Eclampsia; Killer cell, natural; Interleukin?12; C?reactive protein  

　　子痫前期（pre?eclampsia，PE）是严重威胁母儿健康的妊娠期特有疾病，虽然发病机制目前尚未完全清楚,但血管内皮损伤是其中心环节。近年来，由于分子免疫学的，免疫介导的炎性损伤在PE发病机制中所起的作用越来越受到人们的重视。本研究对晚孕期PE孕妇外周血杀伤（Natural Killer,NK）细胞水平及白介素?12 (Interleukin?12, IL?12)及C?反应蛋白（C?Reactive Protein, CRP）水平的变化进行检测,初步探讨了NK细胞、IL?12及CRP在子痫前期发病中的可能作用及相互关系，为能从免疫学角度寻找防治此病的措施提供新的思路。

　　1  资料与方法

　　1.1  标本来源及分组

　　选择2006年9月至2007年2月在山东省立产科住院的子痫前期患者42例（Preeclampsia Pregnancy,PE组）。选择同期住院的正常晚孕妇女（Normal Late Pregnancy，NLP组）20例为实验对照组，两组产次匹配，均为单胎妊娠。选择同期正常已婚育龄妇女20例作为正常对照组（Normal Non?pregnancy, NNP组）。各组病例既往无特殊疾病史，未服用免疫抑制或增强药物。

　　1.2  标本采集

　　子痫前期组患者、正常晚孕妇女于入院后未采取任何前清晨空腹采取肘静脉血6?mL，其中各取2?mL放于EDTA防凝管，4?℃冰箱放置，4?h内送流式细胞仪测定NK细胞水平；各取4?mL 1?h内4?℃下3?000?r/min离心10?min分离血清，标本应清澈透明，避免溶血标本，每人份分装2管，-70?℃冻存，待集中测定IL?12和CRP；同期同法采集门诊健康查体的正常未孕育龄妇女肘静脉血。

　　1.3  实验方法及试剂

　　外周血CD3?CD56+CD16+NK细胞水平采用流式细胞分析技术，IL?12采用酶联免疫吸附试验技术，CRP采用免疫散射比浊法测定；所用试剂 FITC?CD3/PE?CD56CD16荧光抗体、FITC?IgG1/PE?IgG1(同型阴性对照)均由IMMUNOTECH公司提供，IL?12ELISA试剂盒、CRP试剂盒购于北京晶美生物公司(R&D公司产品)。

　　1．4  统计学处理

　　应用SPSS 11.0统计软件包对计量资料进行t检验、相关性检验及单因素方差分析。

　　2  结  果

　　2.1  各组临床特征

　　3组的平均年龄、基础血压、基础体重差异无统计学意义。PE组、NLP组的孕周差异无统计学意义，见表1（略）。

　　2.2  外周血NK、IL?12、CRP水平变化

　　PE组NK细胞水平明显高于NLP和NNP组,差异有统计学意义（P＜0.01）；NLP组NK细胞平均值低于正常未孕组，但差异无统计学意义（P＞0.05）；PE组IL?12水平明显高于NLP组(P＜0.01)和NNP组（P＜0.05）；NNP组外周血血清IL?12水平与NLP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；PE组外周血CRP值明显高于NLP组（P＜0.01），两组均明显高于NNP组(P＜0.01)，见表2（略）。

　　2.3  外周血NK细胞、IL?12、CRP间的关系

　　各组NK细胞与IL?12水平呈正相关，相关系数为rPE=0.758,rNLP=0.689,rNNP=0.779(P＜0.01)；NK与CRP之间相关性不明显,rPE=-0.053, rNLP=0.034,rNNP=0.048(P＞0.05）。

    PE的发病与炎症、血管内皮功能障碍、母胎间的免疫不耐受密切相关［1］。NK细胞是机体重要的免疫细胞，通过发挥细胞毒作用及分泌细胞因子,在机体抗感染、免疫调节等方面发挥着重要作用。NK细胞具有代表性的表型为CD3?CD56+CD16+，外周血中CD3?CD56+CD16+NK细胞具有很强的免疫排斥杀伤活性。正常妊娠时，NK细胞及淋巴细胞对胚胎及胎儿的作用处于一种平衡状态,这种平衡一旦被破坏,可激发子宫局部的NK细胞活性,使其免疫杀伤作用增强,表现为免疫排斥而导致病理妊娠的发生,而外周血NK细胞的变化间接表达了母胎界面局部的免疫状况。子痫前期时母体内免疫介导的炎性反应过度激活，引起全身血管内皮炎症及功能障碍，导致子痫前期的各种临床表现。与正常未孕妇女比较,中晚期孕妇外周血中辅助/诱导性T淋巴细胞减少,CD4/CD8比值下降,NK细胞有不同程度的下降,表明妊娠期母体细胞免疫功能处于一定的免疫抑制状态［2］。张建平［3］等发现孕妇临产后其外周血中NK细胞水平明显升高，提示NK细胞的数量及活性平衡在母胎双向免疫调节中的重要作用。一旦母胎双向免疫调节失衡,异体抗原性的胚胎将被排斥,造成病理性妊娠如子痫前期等。本研究显示子痫前期组外周血NK细胞水平明显高于正常晚孕组及正常未孕组，表明在子痫前期时，NK细胞数量增多，活性升高，介导免疫损伤性炎症，诱发机体及胎盘组织血管痉挛，内皮损伤。

    IL?12又名NK细胞刺激因子，可诱导增强NK细胞的杀伤活性及与杀伤活性相关的蛋白质(如穿孔素、颗粒酶B)编码基因的转录，增加NK细胞对抗CD16抗体诱导凋亡的敏感性［4］。是诱导细胞免疫排斥反应的主要因素。关于IL?12在子痫前期中的变化有不同说法，有研究［5］发现PE时蜕膜组织的IL?12水平下降，同时外周血CD3?CD56+CD16+NK百分比高于正常对照，而Sakai M［6］等分离外周血单核细胞（PBMC）培养24?h后，ELISA方法检测上清液中IL?12分泌量，发现正常孕妇PBMC的IL?12分泌量低于孕龄正常非孕妇女，来自PE孕妇的PBMC分泌IL?12明显高于正常孕妇。妊娠期血清IL?12水平下降与先天免疫细胞系统和抗原呈递细胞系统在妊娠期的功能受抑从而导致母胎间免疫耐受有关。本研究发现子痫前期组的IL?12水平均高于正常晚孕组，差异有统计学意义；正常妊娠妇女血清IL?12水平较正常非孕妇女降低，但无统计学意义，可能与样本含量偏少有关，有待进一步研究。另外，患者血清IL?12水平与NK细胞呈正相关性, 说明血清中IL?12水平与NK细胞有良好的依赖关系。产生此结果可能有以下原因:一方面IL?12诱导静止和活化NK细胞产生IFN?γ，而IFN?γ是巨噬细胞（Mф）活化因子的主体, 通过此路径活化Mф,使Mф产生更多的IL?12,从而促进NK细胞的活性；同时，IFN?γ是NK细胞活性的最强烈激活剂,可促进NK细胞上IL?2R密度增加,来促进NK细胞的活性［7］。

    CRP是反映机体炎症反应的敏感指标，其水平升高与炎性损伤、血管内皮功能障碍密切关联。CRP与心血管疾病如AS等的发生有着密切的关系，而有过子痫前期发病史的孕妇体内代表炎症或内皮激活的标志物如vWF,纤维蛋白原，CRP等水平异常升高［8］，反映出发生子痫前期的易感性，CRP水平的升高、血管内皮舒张障碍在子痫前期出现症状前已有明显表现［9］。本研究中子痫前期组CRP浓度显著高于正常晚孕组及正常未孕组，进一步证明子痫前期患者体内存在明显的内皮激活、炎性损伤，临床上可通过检测CRP来监测子痫前期的早期病情变化。

    总之，子痫前期患者体内NK细胞，IL?12,CRP水平的升高及NK与IL?12的相关性进一步证实了免疫介导的炎性损伤在子痫前期发病中的重要作用，但仍需进一步试验对其免疫性发病机制及可能的防治作出研究。

【】
  　　［1］Vickers M, Ford I, Morrison R, et al. Markers of endothelial activation and atherothrombosis in women with history of preeclampsia or gestational hypertension［J］. Thromb Haemost, 2003, 90(6):1192?1197.

　　［2］Toor A A, Lund T C, Miller J S. T?cell factor?1 expression during human NK cell development and in circulating CD56+ bright NK cells［J］. Exp Hematol, 2001, 29(4):499?506.

　　［3］张建平,陈立斌,王蕴慧,等.足月妊娠分娩发动时孕妇外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的变化［J］.中山医科大学学报,2002,23(4):245?247.

　　［4］Kourilsky P, Truffa?Bachi P. Cytokine fields and the polarization of the immune response［J］. Trends Immunol, 2001, 22(5):502?509.

　　［5］Wilczynski J R, Tchorzewski H, Banasik M, et al. Lymphocyte subset distribution and cytokine secretion in third trimester decidua in normal pregnancy and preeclampsia［J］. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 2003, 109(1):8?15.

　　［6］Sakai M, Tsuda H, Tanebe K, et al. Interleukin?12 secretion by peripheral blood mononuclear cells is decreased in normal pregnant subjects and increased in preeclampsia patients［J］. A JRI, 2002, 47(2):91?97.

　　［7］Banerjee S, Smallwood A, Moorhead J, et al. Placental expression of interferon?gamma (IFN?gamma) and its receptor IFN?gamma R2 fail to switch from early hypoxic to late normotensive development in preeclampsia［J］. J Clin Endocrinol Metab, 2005, 90(2):944?952.

　　［8］ Vickers M, Ford I, Morrison R, et al. Markers of endothelial activation and atherothrombosis in women with history of preeclampsia or gestational hypertension［J］. Thromb Haemost, 2003, 90(6):1192?1197.

　　［9］ Paternoster D M, Fantinato S, Stella A, et al. C?reactive protein in hypertensive disorders in pregnancy［J］. Clin Appl Thromb Hemost, 2006, 12(3):330?337.