血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶－２在乳腺癌中的表达及其相关性的意义

                  作者：韩晖　赵文新　林舜国　许春森　杨映红　郑宇辉

　　【摘要】 目的 研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-2(matrix metal proteinase-2,MMP-2)在乳腺癌中的表达及其相关性,并探讨其意义。方法 2006年1月至2006年12月在福建医科大学附属协和行乳腺癌改良根治术患者20例术后石蜡包埋组织,应用免疫组织化学方法检测VEGF、MMP-2的表达情况,另选取同期20例正常乳腺组织作为对照。结果 乳腺癌组织中VEGF与MMP-2的阳性表达率分别为65%(13/20)与60%(12/20),与正常组织相比差异均有统计学意义(P<0．01);且VEGF与MMP-2的表达密切相关(kappa=0．894,P<0．01)。结论 VEGF和MMP-2在乳腺癌组织中表达明显增高,且存在显著相关性,二者在乳腺癌发生中起着重要的作用。?
　　【关键词】乳腺肿瘤;血管内皮生长因子;基质金属蛋白酶-2
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　　【Abstract】 Objective To study the expression and the relation of vascular endothelial growth factor(VEGF)and matrix metal proteinase-2(MMP-2)in human breast cancer,and investigate its significance.Methods Archival primary breast carcinomas(n=20)were analyzed for vascular endothelial growth factor(VEGF)and matrix metal proteinase-2(MMP-2)expressions by immunohistochemistry using specific monoclonal antibodies,20 cases normal breast tissue served as the control group.Results VEGF and MMP-2 genes were over expressed in tumor specimens as compared with normal epithelia,and a significant correlation was found between VEGF and MMP-2 expressions.Conclusion VEGF and MMP-2 may play important roles in the occurrence and development of human breast cancer.?
　　【Key words】Breast carcinoma;Vascular endothelial growth factor;Matrix metal proteinase-2
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　　乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,淋巴系统转移是其首要转移途径和致死原因,故乳腺癌发生发展的早期预测及控制其转移潜能已成为提高治愈率的关键^[1-2]。肿瘤的增殖生长、侵袭转移等过程与肿瘤血管生成密切相关,也与多种细胞因子的作用有关 。VEGF是当今所知的、作用最强的促血管生长因子;MMP-2是基质金属蛋白酶(matrix metal proteinases,MMPs)家族的一员,它可通过降解细胞外基质(extracellar matrix,ECM)和基底膜(basement membrane,BM),诱导与增强血管形成等机制促进肿瘤的增殖生长、侵袭转移。笔者应用免疫组化方法检测VEGF和MMP-2在乳腺癌组织中的表达,分析二者相关性,并探讨其意义。?
　　1 资料与方法?
　　1．1 临床资料 选取2006年1月至2006年12月在本院行乳腺癌改良根治术或根治术20例患者术后石蜡包埋组织。20例患者无非甾体类抗炎药和糖皮质激素长期用药史,未接受放疗或化疗等,均为女性,平均46．8岁(27~68岁)。肿瘤组织术后均经病证实,其中浸润性导管癌15例,导管原位癌局灶浸润1例,其他类型4例。按TNM分期,Ⅰ期4例,Ⅱ期10例,Ⅲ期5例,Ⅳ期1例。另取同期20例乳腺良性病变女性患者乳腺正常组织作为对照。?
　　1．2 主要试剂 VEGF单克隆抗体、MMP-2单克隆抗体和SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。染色按试剂盒说明进行,用PBS代替一抗作阴性对照,阳性对照由公司提供。?
　　1．3 阳性结果判断 VEGF与MMP-2阳性判定依照Kase及Kallakury等^[3-4]的评判标准,均以细胞浆内出现棕黄色颗粒者为阳性染色,观察5个高倍镜视野,胞浆阳性细胞所占百分数,取其平均计数：<10%阳性细胞为阴性表达,≥10%阳性细胞为阳性表达。?
　　1．4 统计学方法 应用SPSS10．0统计软件进行统计学处理。采用χ²检验,一致性用kappa分析,以P<0．05为差异有统计学意义。?
　　2 结果?
　　2．1 VEGF与MMP-2在乳腺癌组织中的表达 20例乳腺癌组织与正常组织VEGF阳性表达率分别为65%、10%,二者比较差异有统计学意义(χ²=12．91,P<0．01),而MMP-2阳性表达分别为60%、10%,二者比较差异亦有统计学意义(χ²=10．99,P<0．01)。乳腺癌组织中VEGF与 MMP-2阳性表达,在镜下均表现为细胞浆内出现棕黄色颗粒,且绝大多数均定位于肿瘤细胞。见表1。?
　　
　　2．2 VEGF与MMP-2在乳腺癌组织中的相关性 kappa分析表明,VEGF与MMP-2在乳腺癌组织中的表达高度一致(kappa=0．894,P<0．01),见表2。?
　　
　　3 讨论?
　　血管生成是肿瘤增殖生长、侵袭转移的先决条件,当肿瘤生长至1 mm?3时,如果缺乏新生血管供应营养,癌细胞将停止增殖,而肿瘤新生血管形成受肿瘤细胞分泌的血管形成因子的调节^[5]。VEGF是血管生成过程最重要的正向调控因子,它能特异性地作用于血管内皮细胞,引起内皮细胞分裂增殖,从而促进新生血管形成,是当前已知作用最强的促血管生成因子;而VEGF尚能提高血管通透性,其通过增加内皮细胞内囊泡的功能发挥渗透作用,形成1个有利于大分子渗透的通道,从而对血管形成前肿瘤营养运输起着重要作用,是目前已知最强的血管渗透剂。众多学者通过实验证实,VEGF在乳腺癌组织中呈现过表达,其阳性表达率多>50%,与肿瘤的临床病理因素有着密切联系^[6]。本研究应用免疫组化法检测VEGF 在20例乳腺癌组织中的表达,阳性表达率为65%,结果与既往大多报道较一致,提示VEGF作为促进血管新生的因子,应在乳腺癌血管形成过程中扮演重要角色,可成为影响着乳腺癌生物学行为的分子指标之一。?

　　MMP-2可能是MMPs中作用最广泛的酶,它在许多侵袭性肿瘤细胞中都表达。MMP-2主要功能就是降解细胞外基质(ECM)和基底膜(BM)的主要成分-Ⅳ型、Ⅴ型胶原和明胶,改变局部组织结构,破坏基底膜屏障,从而增强肿瘤新血管生成,促进肿瘤增殖生长,利于肿瘤侵袭转移^[7]。本研究表明,MMP-2在乳腺癌组织中高表达,提示MMP-2与乳腺癌发生有关。?
　　最近研究显示,VEGF与MMP在促进肿瘤血管生成、肿瘤细胞侵袭转移方面有相互作用,已愈益引起学者们关注。局部微环境中的生长因子可在不同水平上与原癌基因产物、细胞因子、激素等相互作用,调控MMPs的表达,从而控制细胞外基质的合成与降解,影响肿瘤的侵袭、转移^[8];而MMP-2能提高促血管生成VEGF、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α和转化生长因子-β的释放,加速细胞膜和血管内皮细胞的迁移,促进血管形成和肿瘤增殖生长、侵袭转移^[9]。本研究表明,VEGF与MMP-2 在乳腺癌组织中的表达均增强,两者密切相关,因此二者在乳腺癌发生发展中共同发挥着重要的作用,虽然其具体作用机制有待进一步阐明,但笔者认为联合VEGF和MMP-2为靶点的抗肿瘤研究有望开辟乳腺癌防治一条新策略。?
　　
　　
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