ＨＬＡ－ＤＲ基因与肝细胞癌的相关性研究

                     作者：王义成　李建忠　李长缨　柳富会

　　【摘要】 目的 探讨HBV感染人群HLA-DR基因与肝细胞癌的相关性。方法 应用
　　PCR-SSP方法对102例慢性乙型肝炎患者(实验1组)、38例肝硬化患者(实验2组)、34例肝细胞癌患者(实验3组)及1383例中华骨髓库山东分库无血缘关系自愿骨髓捐献者(对照组)的HLA-DR等位基因进行检测，分析其表达与肝细胞癌的相关性。结果 HLA-DR1在实验3组中的分布频率较对照组明显增高(χ²=4．80，P<0．05)，HLA-DR13在实验3组中的分布频率较实验1组明显增高(χ²=5．56，P<0．05)，实验2组与实验3组比较差异均无统计学意义。结论 HLA-DR1可能是肝细胞癌的易感基因，携带HLA-DR13基因位点的HBV感染者更易为肝细胞癌，HLA-DR各等位基因表型频率在肝硬化和肝细胞癌患者中的分布无差异。?
　　【关键词】HLA-DR；肝细胞癌；肝硬化；慢性乙型肝炎
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　　【Abstract】 Objective To investigate the association between HLA-DR alleles and hepatocellular carcinoma.Methods Experiment groups were composed of 102 patients with chronic hepatitis B(group1)，38 patients with liver cirrhosis(group2)and 34 patients with hepatocellular carcinoma(group3)．The control group was composed of 1383 marrow donors from China Marrow Bank Shandong Branch．HLA-DR were typed by PCR-SSP．Results HLA-DR1 were significantly more frequent in group3 compared with the control group(χ²=4．80，P<0．05)，HLA-DR 13 was significantly more frequent in group 3 compared with group1(χ²=5．56，P<0．05)，there was no significant difference between group 2 and group 3．Conclusion The HLA-DR 1 might be associated with hepatocellular carcinoma．Patients with HBV infection,who carried HLA-DR13 allelic genes had hepatocellular carcinoma easier.All kinds of HLA-DR allelic genes had no significantly different frequency between patients with liver cirrhosis and those with hepatocellular carcinoma.?
　　【Key words】HLA-DR；Hepatocellular carcinoma；Liver cirrhosis；Chronic hepatitis B
　　
　　肝细胞癌(HCC)是世界范围内发病率很高的恶性肿瘤之一，全世界每年新增病例超过100万人，尤其亚太地区居多。在我国90%以上HCC患者伴有HBV感染，持续HBV感染发生HCC的概率比正常人高100~200倍，约有10%~25%的慢性乙型肝炎(CHB)最终发展为HCC^[1]。HBV感染后，机体对病毒的清除能力及感染后疾病的转归，很大程度上取决于个体间基因组的差异。而后者主要取决于人类主要组织相容性复合体(MHC)。人类白细胞抗原(HLA)是MHC的基因产物，其中HLA-DRB1的基因多态性最为复杂，它在HBV感染的各种预后中发挥重要作用。本研究采用PCR/SSP技术对此进行分析，从基因水平了解遗传因素在肝细胞癌的发病机制中所起的作用。?
　　1 材料与方法?
　　1．1 研究对象 ①实验组：随机选取2007～2008年间青岛市传染病住院患者174例(均为HBV感染者)，其中慢性乙型肝炎102例为实验1组［男62例，女40例，年龄18~54岁，平均(32．6±12．3)岁］，肝硬化患者38例为实验2组［男18例，女20例，年龄35~73岁，平均(52．5±8．4)岁］，原发性肝癌患者34例为实验3组［男27例，女7例，年龄33~76岁，平均(53．8±9．5)岁］。均按照2005年中华医学会肝病学分会和传染病学分会联合制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中的诊断标准进行诊断和分类^[2];②对照组：随机抽取中华骨髓库山东省分库无亲缘关系健康志愿骨髓捐献者1383例，其中男654例，女739例，年龄18~45岁，平均(28．6±8．8)岁。?
　　1．2 HBV病原学检测 ①HBV免疫标记物检测：ELISA法(厦门新创生物制品有限公司试剂)，操作按说明书；②HBV DNA检测：荧光定量检测法(试剂和仪器均为美国罗氏公司产品)，操作按说明书。?
　　1．3 HLA-DR等位基因检测 ①人类DNA提取：采用成品试剂盒(美国戴诺生物有限公司)，操作按说明书，DNA含量：80~100 μg/μl，纯度260 nm/280 nm：1．65~1．80(DNA 定量仪测定)；②HLA-DR等位基因分型：采用美国戴诺生物有限公司试剂，引物可以覆盖2002年以前确定的HLA-DR等位基因，分型等级：低分辨率；PCR-SSP方法，操作按说明书；判读标准：遵循WHO下属HLA系统命名委员会规定，按标准HLA命名系统中星号后的头2个数字，个别等位基因按HLA命名系统中星号后的头4个数字，将等位基因型转化为相应的表现型。?
　　1．4 统计学方法 对基因表型频率的组间比较采用χ²检验。检验水准α=0．05。?
　　2 结果?
　　见表1。?
　　
　　3 讨论?
　　HBV感染呈全球性分布,我国是乙型肝炎的高发区,慢性乙肝病毒携带率约达10．3%,其中部分患者可发展为肝硬化和原发性肝癌,但其机制不明。不同个体感染HBV后出现的临床症状复杂多样，形成了复杂的疾病谱。HBV感染后表现出的不同疾病过程决定于个体的免疫反应状况^[3]。研究表明^{[4-5],肿瘤发生与机体免疫监控失调有关，HLA-Ⅱ类抗原与肿瘤的发生发展关系密切。?} 　　HLA复合体是迄今所知人类多态性最丰富的遗传系统，HLA-DRB1位于HLA-Ⅱ类基因区的DR亚区，可能与加工处理的外源性抗原肽结合，在抗原提呈细胞和靶细胞表面表达，被CD4⁺T细胞识别后产生免疫应答，同时在免疫调节中也发挥着重要作用。从20世纪90年代初，随着PCR技术的建立和，尤其是PCR-SSP的发展，人们逐渐从基因水平研究HLA与乙肝疾病的相关性。国内研究较多的是等位基因HLA-DRB1与慢性乙型肝炎、HBV感染后恢复、乙肝肝硬化、自身免疫性肝炎^[6]等之间的性关性，并且已取得不少共识。但是关于该基因与肝细胞癌之间的相关性研究较少。?
　　据报道，肝癌患者中约有95%均有HBV感染的血清学证据，HBV感染后增加了肝癌的发生率，但肝癌的发生与HLA亦相关。程元桥^[7]等发现，HLA-DRB1×1501/1502在乙肝肝硬化组中出现的频率较正常对照组明显下降，说明此基因可能为湖北地区乙肝肝硬化的抵抗基因。但是Donaldson等^[8]在123例HBsAg阳性的香港人群中(其中有84例肝细胞癌患者)进行HLA的分析，发现DRB1×1501、DQA1×0102和DPB1×0501在HCC的基因频率显著高于对照组，而DQA1×03、DQB1×0302和DPB1×0201的频率则显著低与对照组。由此说明此基因位点可能是肝癌的易感基因。而Li等^[9]应用限制性内切酶片段长度多态性分析法对HLA-Ⅱ类基因与原发性肝癌的相关性进行了研究，未发现HLA-DQ、HLA-DR基因与南方人群的原发性肝癌相关。本试验结果表明，HLA-DR1在实验3组中的分布频率较对照组明显增高(χ²=4．80，P<0．05)，说明HLA-DR1可能是肝癌的易感基因。HLA-DR13在实验3组中的分布频率明显高于实验1组(χ²=5．56，P<0．05)，说明携带此基因位点的HBV感染者更易发展为肝细胞癌。而实验2组与实验3组各HLA-DR基因位点比较差异均无统计学意义，说明HLA-DR基因在肝硬化和肝细胞癌患者中的分布无差异。?
　　
　　
　　［1］ Lok AS,Heathcote EJ,Hoofnagle JH.Management of hepatitis B：2000-summary of a workshop.Gastroenterolgy,2001(120)：1828-1853.?
　　［2］ 中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南.中华肝脏病杂志，2005，13(12)：881-891.?
　　［3］ Thursz MR,Kwiatkowski D.Association between an MHC class Ⅱ allele ang clearance of hepatitis B virus in the Gambia.New Engl J Med,1995(332)：1065-1068.?
　　［4］ DavisM,Bjorkman PM.T cell antigen receptor gene and Tcell recognition.Nature,1998,334(6181)：395-398.?
　　［5］ Jackson MR,Cohen Dogle MF,Peterson PA,et al.Regulation of MHC Class I transport by the molecular chaperone,calnexin.Science,1994,263(5145)：384-387.?
　　［6］ 邱德凯，马熊.上海地区型自身免疫性肝炎与HLA-DRB1等位基因的相关性研究.中华肝脏病杂志，2002，10(5)：347-350.?
　　［7］ 程元桥，林菊生，黄丽红，等.人类白细胞抗原DRB1等位基因与乙肝后肝硬化遗传易感性的研究.中华医学遗传学杂志，2003，20(3)：247-249.?
　　［8］ Donaldson PT，Ho S，Williams R，et al.HLA classⅡalleles in Chinese patients with hepatocellular carcinoma.Liver，2001，21(2)：143-148.?
　　［9］ Li PK，Leung NW，Poon AS，et al.Molecular genetics of major histocompatibtility complex classⅡgenes in hepatocellular carcinoma.Dig Dis Sci，1995,40(7)：1542-1546.?