薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量

                     作者：文欣欣,刘丹华,余陈欢,吴巧凤

【摘要】  目的 建立黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法 样品经提取、薄层展开后,采用薄层色谱-荧光分光光度法对黄连和香连丸中盐酸小檗碱进行含量测定,展开剂为苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5),激发波长Ex＝365 nm,发射波长Em＝409 nm。结果 盐酸小檗碱在0.473～3.784 μg范围内线性关系良好,r＝0.999 3。黄连的回收率为99.03%,RSD＝1.86%。香连丸的回收率为97.10%,RSD＝1.09%。结论 该法操作简便,分离效果好,灵敏度高。

【关键词】  黄连；香连丸；荧光分光光度法；盐酸小檗碱；含量测定

    Key words：Coptis chinensis Franch.；Xianglian Pills；fluorescence spectrophotometry；berberine hydrochloride；content determination
 
    黄连为毛茛科植物黄连(Coptis chinensis Franch.)、三角叶黄连(Coptis deltoides C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall.)的干燥根茎,具有清热燥湿、抗菌消炎、利胆等功效,临床上用于治疗消化道感染、泻痢等疾病。以黄连作原料的中成药香连丸气微、味苦,具有清热燥湿、行气止痛等功效,临床多用于湿热痢疾、里急后重、腹痛泄泻、菌痢、肠炎等症。盐酸小檗碱为两者共有的有效成分,具有抗菌、抗病毒、抗凝等作用,治疗原发性高血压、糖尿病等疾病。本试验采用薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量,为其质量控制提供依据。

　　1  仪器与试药
   
　　RF-5000荧光分光光度计(日本岛津),UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂),AG135(四川时运成套仪器有限公司),80-2离心沉淀器(上海手术器械厂),CQ-250超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。
    盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号0713-9906)；黄连(贵州,批号20060424；四川,批号20060827、20070422)。药材经本校资源鉴定教研室姚振生教授鉴定为黄连Coptis chinensis Franch.；香连丸(湖北诺得胜制药有限公司,批号061001、070101；湖北瑞华制药有限责任公司,批号060117)。硅胶G(青岛海洋化工有限公司,批号050428)；其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  对照品溶液和供试品溶液的制备

    精密称定干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品4.73 mg,置于10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.473 mg/mL的对照品溶液。

    取黄连药材粗粉约0.1 g,精密称定,置100 mL容量瓶中,加盐酸-甲醇(1∶100)溶液约95 mL,60 ℃水浴加热15 min,取出,超声处理30 min,室温放置过夜,加甲醇至刻度,滤过,滤液作为黄连供试品溶液[1]。
    精密称取香连丸约0.4 g,加适量盐酸-甲醇(1∶100)溶液,索式回流提取至无色,提取液置水浴上蒸至约20 mL,定量转移至50 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为香连丸供试品溶液[2]。
　　
　　2.2  薄层分析条件[3]
   
　　用0.3%CMC-Na为粘合剂自制硅胶G板,取对照品溶液适量,点样后用氨水饱和30 min,以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂,展距10 cm,晾干后置紫外光(365 nm)下检视,盐酸小檗碱呈黄绿色荧光斑点(Rf＝0.40)。

　　2.3  荧光条件的确定

    取对照品溶液,用荧光分光光度计扫描,结果显示,盐酸小檗碱最大激发波长Ex＝365 nm,最大发射波长Em＝409 nm。

    取对照品溶液1 mL,分别加入不同体积的1 mol/L NaOH溶液,并用甲醇定容至2 mL,在Ex＝365 nm、Em＝409 nm处测定其荧光强度。结果表明,随着NaOH量的增加,其荧光强度不断增大,当加入50 μL时荧光强度最大,此后继续增加NaOH用量时其荧光强度变化不大。故试验中确定NaOH加入量为50 μL。