甘草酸脂质体的处方及制备工艺

                  作者：程建峰，扈本荃，刘梅，贺建荣，扬胜，王弼时

【关键词】  ,甘草酸

    Formulation and preparation of glycyrrhizic acid liposome

　　【Abstract】 AIM: To optimize the prescription and  preparation of encapsulated liposome. METHODS: The liposomes were prepared by  conventional rotaryevaporated filmultrasonication method. The prescription and  preparation of liposome were optimized by uniform  design. Its shape and size distribution were detected under transmission electron microscope. A method to determine the encapsulated rate of the liposome by high performance liquid (HPLC) was established. RESULTS: Glycyrrhizic acid liposome was regular under its microphotograph and the diameter was  40-60 nm. The entrapment efficiency  of the glycyrrhizic acid liposome was 63.0%-89.0%.  CONCLUSION:  The entrapment efficiency of glycyrrhizic acid liposome and the stability of glycyrrhizic acid liposome prepared by conventional rotaryevaporated filmultrasonication method is good.

　　【Keywords】 glycyrrhizic acid；liposome；uniform design；encapsulation

　　【摘要】 目的: 优化甘草酸脂质体的处方及制备工艺. 方法: 用旋转蒸发薄膜超声法制备甘草酸脂质体，用均匀设计优选该脂质体的处方及制备工艺，采用扫描电镜观测其外观、大小及分布，用HPLC测定其包封率，初步考察该制剂的稳定性. 结果: 用旋转蒸发薄膜超声法制备的甘草酸脂质体球形圆整，大小较均匀，粒径40～60 nm，包封率63.0%～89.0%. 结论:薄膜分散法优化工艺后制备得到的脂质体包封率较高,稳定性较好.

　　【关键词】 甘草酸；脂质体；均匀设计法；包封率

　　0引言

　　甘草酸具有抗炎、抗氧化、抗过敏、抗肿瘤、增强免疫功能、诱生干扰素等作用［1］，可明显促进肝细胞再生［2］，目前临床上使用的甘草酸注射液副作用大［3］. 我们将其制备成脂质体，以促进吸收，提高疗效，降低副作用.

　　1材料和方法

　　1.1材料旋转蒸发器（上海申顺生物科技有限公司），W201恒温水浴锅（上海申顺生物科技有限公司），SHZ型真空干燥箱（北京科伟永鑫试验仪器设备厂），超声波清洗器（北京医疗设备二厂）微量分析天平（TG332A型、上海天平仪器厂），电动沉淀器（上海医疗仪器厂），透析卡（SlideALyzerR 10K）,JEM2000Ex型透射显微镜（日本电子），铜网、大豆磷脂（PL纯度>95%，天津市化学试剂公司），胆固醇（Chol分析纯，天津市登峰化学试剂厂），甘草酸（纯度>95.6%，陕西慧科植物开发有限公司），氯仿(CHCl3分析纯,西安化玻站化学厂)，甘露醇（MNT 双鹤药业）.

　　1．2方法

　　1.2．1均匀设计法优化处方甘草酸脂质体制备过程中影响烧瓶壁上及小玻璃珠上的类脂质膜的均匀性、水合的难易程度、脂质体的稳定性、脂质体形态及包封率的5种因素：胆固醇与磷脂的质量比、甘草酸与磷脂的质量比、甘露醇溶液的用量、氯仿的用量、蒸发温度，每个因素选6个水平，根据均匀设计法的设计原则和使用原则，按照均匀设计表U7（76）进行试验，得到6个制备甘草酸脂质体的处方（表1），按照实验方案进行，以类脂薄膜的均匀性、水合的难易程度、脂质体的稳定性、脂质体的形态、包封率高低为评价指标综合评定得出最佳处方.

　　表1均匀设计试验方案（略）

　　1．2.2甘草酸脂质体的制备工艺精密称取处方量的磷脂和胆固醇于茄型烧瓶中，然后加入氯仿使其充分溶解后再加入甘草酸，将烧瓶放在超声清洗器上超声使药品完全溶解后，再经旋转蒸发仪旋转蒸发除去氯仿(旋转蒸发薄膜分散法)，可看见在烧瓶上形成一层半透明的薄膜，将烧瓶放在真空干燥箱中干燥后，加入甘露醇溶液进行水合，再水浴超声得乳白色半透明液体，依次经过0.8 μm和0.45 μm微孔滤膜过滤，分装于适合的安瓿中，4℃条件下密闭避光保存. 精密量取甘草酸脂质体2.0 mL，注入透析卡. 将透析卡浸入甘露醇液中透析3次，第1次2 h，换溶液后再进行第2次透析，时间为2 h左右，第3次将其保存在4℃温度下透析12 h以除去游离药物， 然后从卡中取出药物，4℃下保存. 取3批样品，每批样品5个样本，采用反相高效液相色谱法测定甘草酸脂质体的包封率. 取脂质体适量，加甲醇溶液溶解、稀释，取稀释液20 μL进样. 色谱条件：流动相：甲醇∶磷酸盐缓冲液（50 mmol/L）（68∶32）；流速：1 mL/min；紫外检测波长为254 nm；进样量为20 μL；柱温：室温. 以测定甘草酸脂质体的包封率.

　　1．2.3脂质体的电镜观察将所制得的脂质体，加水稀释到合适的浓度，取1滴于点滴反应瓷板的凹槽内，并将喷碳铜网放于试液上(膜面向下)，1～2 min后取出铜网，用滤纸小片从铜网边缘吸干多余液体； 按上述同样方法，将该铜网放在染液滴(20 g/L磷钨酸溶液，pH 7.0)上约30 s，用滤纸小片从铜网边缘吸干多余染液，干燥. 在透射电镜下观察脂质体的形态及分布并测量其粒径.

　　2结果

　　2.1包封率和处方优化通过均匀设计法优化实验，结合类脂质膜的均匀性、水合时间、脂质体的稳定性、脂质体的形态、包封率等确定制备甘草酸脂质体的处方，6为最佳处方工艺，即：磷脂100 mg，胆固醇70 mg，甘草酸10 mg，水合介质甘露醇14 mL，氯仿23 mL，氯仿蒸发温度36℃. 按处方6制备得到的脂质体结合类脂质膜的均匀性好、易水合、脂质体稳定、脂质体的形态好、包封率高(表2).

　　2.2电镜结果在透射电镜下可观察到处方6和处方2所制得的甘草酸脂质体的粒径均匀，在40～60 nm之间，成圆形或类圆形，整体分布比较均匀(图1).

　　表2脂质体的包封率和处方优化结果（略）

　　A: 处方6； B: 处方2.

　　图1甘草酸脂质体的超微结构TEM ×100 000（略）

　　3讨论
　　
　　甘草酸是水溶性极低的药物，只有氯仿对甘草酸的溶解较完全，且形成的薄膜也比较好，所以我们采用氯仿作有机溶媒. 制备脂质体的方法很多，主要有：薄膜分散法、逆相蒸发法、高压乳匀法、乳化分散法、超声波分散法等. 逆相蒸发法和超声波分散法适合于包裹水溶性药物，但甘草酸的水溶性极低，所以不宜选择. 高压乳匀法、乳化分散法等需要加热到一定的温度，对甘草酸脂质体的稳定性有影响. 旋转蒸发薄膜分散法适合于脂溶性及水溶性低的药物且简便易行，适合于实验室制备. 载药的脂质体和游离的药物必须分离后才能测定包封率. 常用的分离方法有凝胶层析法、离心法、透析法. 而凝胶层析法操作繁琐，高速离心时脂质体有可能凝聚而被破坏，因此在本次实验中采用透析法.

　　【】

　　［1］ 柳长华. 李时珍医学全书［M］. 北京:中医药出版社,1999：418.

　　［2］ Liu J，McIntush H，Lin H．Chinese medicinal herbs for chronic hepatitis B:A systematic review［J］. Liver, 2001, 21(4):280-286.

　　［3］ 徐会选. 甘草酸类药物的不良反应［J］. 药物不良反应杂志，2003, 5(3):166-171.