维生素A和锌摄入对大鼠卵巢脂质过氧化影响
1 材料与方法
1?1 材料
1?1?1 实验动物 动情周期正常的初成年健康SD雌性大鼠(SPF级)72只，8周龄，体重(180±15)g，(甘肃中医学院实验动物中心，动物证号：SCXK(甘)2004-007)。
1?1?2 试剂 VA醋酸酯(粉剂)，纯度为32?5万U／g(北京嘉康源化工有限公司)；硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，分析纯(莱阳化工实验厂)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1?1?3 仪器 722型分光光度计(上海精密仪器有限公司)；SHA-B型水浴恒温振荡器(常州国华电器有限公司)；TGL-6G-A型高速冷冻离心机(上海安亭化学仪器厂)；120型台式天平(德国赛多利斯天平有限公司)。
1?2 方法
1?2?1 剂量选择与分组 阴道涂片法连续涂片10d，筛检动情周期连续2次为4～5d的初成年健康SD雌性大鼠72只，分笼单只喂养，喂饲营养均衡饲料，饮双蒸水，随机分为6组，每组12只，每日定时等容积(0?5ml)灌胃给予大鼠受试物，具体剂量〔2〕为，正常对照组(CG)：双蒸水0?5ml／d；Zn实验组(ZnG)：累计剂量相当于大鼠20倍推荐摄入量(RNI)；VA实验组(VAG)：累计剂量相当于大鼠30倍RNI；VA和Zn联合实验I组［(VA+Zn)IG］：VA和Zn累计剂量分别相当于大鼠10倍、20倍RNI；VA和Zn联合实验Ⅱ组［(VA+Zn)ⅡG］：VA和Zn累计剂量分别相当于大鼠30倍、20倍RNI；VA和Zn联合实验Ⅲ组，［(VA+Zn)ⅢG］：VA和Zn累计剂量分别相当于大鼠50倍、20倍RNI，1次／d，连续30d，期间正常喂饲双蒸水，每隔3d称重1次。
1?2?2 卵巢组织匀浆制备 于染毒第31d处死大鼠，分离血清，卵巢称重后剪碎，用玻璃匀浆器加入0?01mmol／L Tris-HCl缓冲液［0?01mol／L蔗糖、0?1mmol／L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)］制成10％(m／v)组织匀浆，5000r／min离心10min，取上清液待测。
1?2?3 指标测定 血清和卵巢组织中SOD、GSH-Px活性、T-AOC、MDA含量的测定依据试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书进行，卵巢组织蛋白以总蛋白浓度来校正。
1?3 统计分析 采用SPSS11?5软件进行单因素方差分析，并进行对照组与实验组的两两比较。
2 结果
2?1 VA和Zn摄入对SOD、GSH-Px活性的影响 在卵巢组织中，各实验组SOD、GSH-Px活性与CG比较明显降低各实验组与CG比较，差异均有统计学意义，(P<0?01)；(VA+Zn)ⅡG与ZnG比较GSH-Px活性降低(P<0?05)；(VA+Zn)ⅡG与VAG比较GSH-Px活性降低(P<0?05)；(VA+Zn)ⅡG与(VA+Zn)ⅢG比较GSH-Px活性降低(P<0?05)。在血清中，各实验组SOD活性与CG比较，除ZnG降低外，其余各实验组均升高，但差异无统计学意义；(VA+Zn)IG与ZnG比较SOD活性升高(P<0?05)，各实验组GSH-Px活性与CG比较，除ZnG、(VA+Zn)IG降低外，其余各实验组均升高，但差异无统计学意义；(VA+Zn)ⅢG与ZnG比较GSH-Px活性升高(P<0?05)，见表1。
表1 VA和Zn摄入对雌性大鼠卵巢及血清SOD活性、GSH-Px活性的影响（略）
注：与CG比较，a P<0?01；与ZnG比较，b P<0?05；与VAG比较，c P<0?05；与(VA+Zn)ⅡG比较，d P<0?05
2?2 VA和Zn摄入对T-AOC活力、MDA含量的影响 在卵巢组织中，各实验组T-AOC活力与CG比较明显降低(各实验组与CG比较，差异均有统计学意义，P<0?01，其中(VA+Zn)IG和ZnG与CG比较，P<0?05；各实验组MDA含量与CG比较，除ZnG与VAG升高外，其余各联合实验组均降低，但差异无统计学意义；(VA+Zn)IG与ZnG比较，MDA含量降低(P<0?05)；(VA+Zn)ⅢG与ZnG比较，MDA含量降低(P<0?05)。在血清中，各实验组T-AOC活力与CG比较降低，(VA+Zn)ⅡG和(VA+Zn)ⅢG与CG比较，差异有统计学意义，P<0?05，各实验组MDA含量与CG比较均降低；(VA+Zn)ⅢG与CG比较，差异有统计学意义(P<0?05)；(VA+Zn)ⅢG与(VA+Zn)IG比较，MDA含量降低P<0?05，见表2。
表2 VA和Zn摄入对雌性大鼠卵巢及血清T-AOC活力、MDA含量的影响（略）
注：与CG比较，a P<0?05，b P<0?01；与ZnG比较，c P<0?05；与(VA+Zn)IG比较，d P<0?05
3 讨论
摄入大剂量VA可引起急性、慢性及致畸毒性〔3,4〕，过量摄入Zn可以损害免疫器官和免疫功能〔5，6〕，VA和Zn具有某些相似的生理功能，可能具有协同效应〔7,8〕。本研究观察到过量摄入VA、Zn能引起大鼠卵巢的氧化应激。SOD与GSH-Px作为酶系和非酶系自由基清除剂，对维持机体抗氧化能力稳定起关键作用，各实验组卵巢组织中SOD活性、GSH-Px含量有不同程度降低，说明过量摄入VA、Zn可抑制SOD活性，使GSH-Px含量减少，破坏机体氧化平衡状态，从而使细胞抗氧化应激能力下降，而氧化应激会进一步引起脂质过氧化、巯基耗竭等氧化性损伤。T-AOC是机体防御体系之一，其能力强弱与健康程度存在着密切联系，该体系有酶促和非酶促2个体系，这种机能的降低常常导致各种疾病的产生，而过量摄入VA、Zn所致的各实验组卵巢组织中T-AOC的降低，更进一步证实过量VA、Zn所致脂质过氧化损伤作用加剧。在本实验研究剂量下，过量摄入VA、Zn对大鼠卵巢功能已产生一定的影响，引起卵巢组织的氧化损伤，表现在抗氧化系统活性降低，MDA增加，由此调节卵巢抗氧化系统的活性，这可能是过量摄入VA和Zn对生殖系统损伤的毒理机制之一。
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