HPLC法测定盐酸度洛西汀的含量及有关物质
【关键词】 高效液相色谱法；盐酸度洛西汀；含量；有关物质
［摘要］ 目的：建立HPLC法测定盐酸度洛西汀的含量和有关物质。方法：采用ODS2C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相为0.025 mol/L磷酸二氢钾溶液乙腈甲醇（3∶2∶2），流速为1.0 mL/min，检测波长为290 nm。结果：在9.0～45.0 μg/mL范围内，色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.9999；回收率100.2%（RSD=0.75%，n=9），最低检测限4 ng/mL。结论：该法准确、简便、灵敏，可用于盐酸度洛西汀的含量测定及有关物质检查。
［关键词］ 高效液相色谱法；盐酸度洛西汀；含量；有关物质
Determination of contents of duloxetine hydrochloride and its related substances with HPLC
ZHUO Zhi1, WANG Qing2
(1.Chongqing Institute For Drug Control, Chongqing 401121, China; 2. Chongqing Shenghuaxi Pharmaceupical CO. LTD, Chongqing 400061, China)
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method to detemine duloxetine hydrochloride and its related substances. Methods: A Diamonsil ODS2C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used with the mobile phase of 0.025 mol/L potassium dihydrogen phosphateacetonitrilemethol (3∶2∶2) at the detection wavelength of 290 nm. The flow rate was 1.0 mL/min. Results: The calibration curve was linear in the range of 9.0～45.0 μg/mL, r=0.9999. The average recovery was 100.2% (RSD=0.75%, n=9). The minimum detection amount of duloxetine hydrochloride was 4 ng. Conclusions: This method is accurate, simple and sensitive, and it can be used for the assay or related substances control of duloxetine hydrochloride.
［Key words］ HPLC; Duloxetine hydrochloride; Content; Related substances
盐酸度洛西汀［1］（Duloxetine hydrochloride）为一种口服选择性5羟色胺（5HT）和去甲肾上腺素再摄取抑制剂（SSNIR），主要用于抑郁症和各种抑郁状态及疼痛性躯体症状，也用于治疗妇女应激性尿失禁症，至今未见其含量及相关物质测定的报道。本文其类似物的测定方法［2-5］建立了HPLC法测定其含量及相关物质，方法准确可靠，操作简便。
1 仪器与试药
岛津SPD10Avp型高效液相色谱仪，SPDM10Avp二极管阵列检测器，CLASSVP6.2色谱工作站；岛津UV2401PC紫外分光光度仪。盐酸度洛西汀对照品（HPLC面积归一化法测定含量为98.6%）由重庆圣华曦药业公司实验室精制，盐酸度洛西汀（批号：030301、030302、030303）、胶囊（批号：030414、030415、030416）及辅料为重庆某公司提供。乙腈、甲醇均为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯，试验用水为去离子水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Diamonsil ODS2C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.025 mol/L磷酸二氢钾溶液乙腈甲醇（3∶2∶2）；流速：1.0 mL/min；检测波长：290 nm；进样量：20 μL。在此色谱条件下，空白辅料对测定无干扰，盐酸度洛西汀色谱峰的理论塔板数为4 534，主峰的保留时间约为8 min，见图1。
图1 盐酸度洛西汀色谱图 略
2.2 标准曲线取盐酸度洛西汀对照品45.0 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取该溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成系列溶液。在上述色谱条件下，精密量取以上溶液各20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积A对浓度C进行线性回归，回归方程为：A=49432.5C+1951.81，r=0.9999（n=6）。结果表明盐酸度洛西汀浓度在9.0～45 μg/mL范围内线性关系良好，在信噪比S/N=3时，最低检测限为4 ng。
2.3 稳定性试验取含量测定项下的同一份供试品溶液，在上述色谱条件下，室温下放置0、2、4、8、16、24 h后测定峰面积，结果显示供试品溶液的峰面积基本一致（RSD=0.21%），说明溶液在室温下24 h内稳定。
2.4 精密度试验取含量测定项下的同一份供试品溶液，在上述色谱条件下自动连续进样6次，结果峰面积RSD=0.32%。
2.5 峰纯度检测取盐酸度洛西汀胶囊样品测定项下的供试品溶液，用SPDM10Avp二极管阵列检测器对主峰的起点、顶点和终点进行峰纯度检测，结果主峰的纯度因子为1.0000，表明胶囊中的辅料和杂质对盐酸度洛西汀的含量测定无干扰。
2.6 回收率试验按处方标示量的80%、100%和120%进行回收试验。分别取盐酸度洛西汀对照品约24、30、36 mg，精密称定后置100 mL容量瓶中，按处方量加入空白辅料，流动相溶解并稀释至刻度，精密量取10 mL置100 mL容量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，照样品测定项下的方法，依法测定，结果平均回收率100.2%（RSD=0.75%，n=9）。
2.7 样品测定精密称取盐酸度洛西汀30 mg，加流动相溶解并定量稀释制成30 μg/mL的溶液，作为供试品溶液（1）。取盐酸度洛西汀胶囊10粒，精密称定，取出内容物，囊壳拭净后再精密称定，求出平均装量。精密称取内容物适量（约相当于盐酸度洛西汀30 mg），置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL置100 mL量瓶中，加流动相并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（2）。另精密称取在105 ℃干燥至恒重的盐酸度洛西汀对照品适量，同法操作。照上述色谱条件，分别吸取供试品溶液（1）、（2）及对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积，结果见表1。
2.8 有关物质检查按上述色谱条件，取本品适量，加流动相溶解并制成2 μg/mL的溶液，在200～400 nm的波长处扫描，结果显示本品在230 nm和290 nm附近均有最大吸收。因290 nm附近吸收峰用于有关物质检测的响应值低，在此波长下杂质基本不出峰，而230 nm附近吸收峰的响应值高，且能够灵敏地检测到杂质的存在情况，故选择230 nm作为本品有关物质的检测波长。
表1 样品含量测定结果 略
取本品适量，加流动相溶解并稀释成0.4 mg/mL溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。取对照溶液20 μL注入液相色谱仪进行预示，调节检测灵敏度，使主峰高约为记录仪满刻度的20%，再取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。结果显示供试品溶液的色谱图中杂质峰面积之和相当于1.5%自身对照溶液的峰面积。
3 讨论
在其他西汀类药物测定的HPLC方法的基础上，综合考虑有机溶剂的种类、有机相与水相的比例等因素，选择了“2.1”项下的色谱条件。在此条件下盐酸度洛西汀与杂质可达到基线分离，保留时间适中，辅料不干扰测定。峰纯度试验表明，本文所建立色谱系统
图2 有关物质检查 略
能够达到主峰与辅料和杂质峰的完全分离，且检测灵敏度较高，操作简便，结果准确可靠。本法除可用于盐酸度洛西汀及其胶囊的含量测定外，也可采用自身对照法或面积归一化法对其杂质进行限度检查。
参考：
［1］ 赵 静, 朱 珠. 重症抑郁和糖尿病周围神经病变的新药―度洛西汀［J］. 药学杂志, 2006, 41(14): 11181120.
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［3］ 张孝君, 倪乐平. 盐酸帕罗西汀中R异构体的HPLC测定［J］. 中国医药杂志, 2005, 36(3): 161162.
［4］ 李美月, 曾海虹. 高效液相色谱法测定盐酸帕罗西汀片中盐酸帕罗西汀含量［J］. 中国药业, 2006, 15(8): 23.
［5］ 何 娟, 周志凌, 李焕德. HPLCMS同时测定4种新型抗抑郁药物的血药浓度［J］. 药物分析杂志, 2005, 25(12): 14281432.
