高效液相色谱法测定宣肺丸中葛根素的含量

【摘要】  目的建立测定宣肺丸中葛根素的含量测定方法。方法高效液相色谱法采用ZORBAX SB?C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相：甲醇-水（22∶78），流速：1.0 ml·min?1，检测波长250 nm，柱温40℃，进样量10 μl。结果线性范围是：葛根素0.0463 2～0.694 8 μg，r=1.0。平均回收率为103.24%，RSD为0.44%。结论该法分离好，快速简便，可作为该产品的质量控制方法。

【关键词】  宣肺丸；葛根素；高效液相色谱法

　　Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of puerarin in Xuanfeipill.  MethodsHPLC was used for quantitative ananlysis.  The ZORBAX SB-C18 （250 mm×4.6mm，5μm） column was used, and the  mobile phase was composed of methanol-water（22∶78）.Detection wavelength was at 250 nm, the flow rate was 1.0 ml·min-1, column temperature was at 40 ℃,  and the injection volume was 10 μl.  ResultsThe linear response was in the range of 0.046 32～0.694 8 μg puerarin (r=1.0).  The average recovery of puerarin was 103.24%, RSD was 0.44%.  ConclusionThe method is simple, accurate, and it is suitable for the determination of the purarin in compound preparations.

　　Key words：Xuanfeiwan；  Puerarin；  HPLC
     
　　宣肺丸是由葛根、人参等多味中药组成的复方制剂，为部颁第7册收载品种，具有解表散寒，宣肺化痰功效。用于肺经痰湿，感冒风寒引起的头痛鼻塞，周身不适，咳嗽痰多，胸膈满闷，气逆恶心等证。葛根具有解肌退热、生津功效，为方中君药，其主要成分为葛根素、黄酮类成分［1］，原标准中无含量测定项，故选用葛根中主要有效成分葛根素作为指标成分，建立高效液相色谱法测定成品中含葛根素的含量，该法灵敏度高、专属性好、重现性好［2］。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器 

　　岛津LC?10ATvp高效液相色谱仪，DAD检测器。

　　1.2  试药 

　　葛根素对照品（批号752?200108，药品生物制品检定所提供）。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。宣肺丸（批号5082052，5082052，5082052），同仁堂制药公司生产。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

　　色谱柱：ZORBAX SB?C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）分析柱；流动相：甲醇-水（22∶78）为流动相；检测波长为250 nm柱温：40℃。

　　2.2  检测波长的确定 

　　经紫外扫描葛根素在250 nm处有最大吸收峰，故确定检测波长为250 nm。

　　2.3  对照品溶液的制备 

　　取葛根素对照品适量，精密称定，加30%乙醇制成每毫升含20 μg的溶液，即得。

　　2.4   供试品溶液的制备

　　取装量差异项下的本品，研细，混匀，取约0.6 g，精密称定，置100 ml量瓶中，加入30%乙醇约60ml，密塞，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）30 min，放冷至室温，用30%乙醇定容至刻度，摇匀滤过，取续滤液，即得。

　　2.5  系统适用性实验  按处方量配制缺葛根药材的阴性对照样品，照正文含量测定项下方法测定，比较了供试品溶液、葛根素对照品溶液、阴性对照样品液的色谱图，结果在正文色谱条件下，样品中葛根素峰与其它组分色谱峰能达到基线分离，阴性对照液中色谱峰对测定无干扰。见图1。   

　　2.6  线性关系的考察 

　　精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇溶解并制成每毫升含0.2316 mg溶液，作为储备液。分别精密量取对照品储备溶液0.2，0.6，1.0，1.4，2.0，3.0 ml置于10 ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，按正文所述色谱条件测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，回归方程。

    回归方程为Y=4 352 303.384X＋4 132.516，r=1.0

    结果表明：葛根素在0.0463 2～0.694 8μg范围内有良好的线性关系。

　　2.7  精密度实验  

　　精密吸取浓度为0.023 16 mg/ml葛根素对照品溶液10 μl，重复进样6次，按正文所述色谱条件测定，峰面积积分值的RSD为1.02%。

　　2.8   样品溶液稳定性实验精密称取供试品（批号5082052）0.602 4 g，照正文所述方法制备供试品溶液，精密吸取10 μl，每间隔一定时间进样，测定。结果表明，供试品溶液在22 h内基本稳定。

　　2.9  重复性实验 

　　取同一批号的宣肺丸6份，按正文含量测定方法平行实验，测定其平均含量为3.58 mg/g，RSD为1.91%。

　　2.10  加样回收率实验

　　精密称取已知含量的同一批样品（含量为3.58 mg/g）约0.3 g，分别精密加入葛根素对照品适量，按正文供试品溶液的制备方法制备供试液，平行试验6份，按正文色谱条件，测定其含量，按下式回收率。结果见表1。表1  葛根素加样回收率试验（略）

    上述结果表明本方法具有良好的回收率。

　　2.11  样品测定 

　　本品3批，按正文所述方法测定，计算葛根素的含量，结果分别为3.58，3.16，3.39 mg/g。

　　3 讨论

    实验中进行了提取方法、提取溶剂、提取时间等比较，最后确定文中提取条件及色谱条件分离较好。

    实验中进行了耐用性考察，即用不同的色谱柱和不同比例的流动相进行了比较，结果该样品在本色谱条件下对常用的不同品牌的色谱柱都能得到较好的分离。

【】
  　　［1］阴 健，刘 云，吴 禾，等. 中药研究与临床研究［M］. 北京：中医古籍出版社，1997：51.

　　［2］国家药典委员会. 药典，Ⅰ部［S］.北京：化学出版社，2005.